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       【摘要】 
       目的测定全国8个省24个不同产地25个穿心莲样品及其中10个产地11个批次穿心莲不同部位中总内酯的含量。方法用二硝基苯甲酸和KOH试液显色，比色法在540 nm处测定穿心莲中总内酯的含量。结果不同产地及不同批次穿心莲样品中总内酯的含量在0.49%～2.76%之间，有显著差异。叶在1.82%～3.68%之间，茎在0.44%～1.04%之间，药材在1.27%～2.76%之间，穿心莲不同部位总内酯的含量有显著差异。结论该方法准确、可靠，为穿心莲的质量评价及质量控制提供依据。
       【关键词】  穿心莲; 总内酯; 比色法
       Abstract：ObjectiveTo determine the contents of total lactones in 25 Andrographis samples from 24 origins or provinces and 11 batches of different parts among 10 origins.MethodsWith 2-nitrobenzoic acid and KOH test solution as color developing reagents, colorimetry method was used to determine the content of total lactones in Andrographis paniculata at the wavelength of 540 nm. ResultsThe total lactones contents of Andrographis paniculata from different localities and batches were in the range of 0.49%～2.76%, and there was significant difference. Leaves were in the range of 1.82%～3.68%, stems were in the range of 0.44%～1.04%,medicines were in the range of 1.27%～2.76%, the total lactone content had significant difference in different parts of Andrographis paniculata. ConclusionThis method is accurate and credible and it has provided the basis for the study of the quality assessment and control of Andrographis paniculata.
       Key words：Andrographis paniculata; Total localities; Colorimetry; Content determination
       穿心莲为常用中药，具有清热解毒，凉血，消肿的作用，临床上主要用于治疗感冒发热，咽喉肿痛，口舌生疮，顿咳劳嗽，泄泻痢疾，热淋涩痛，痈肿疮疡，毒蛇咬伤等[1]。穿心莲的主要有效成分为二萜内酯类成分，主要为穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯，去氧穿心莲内酯等，其中以穿心莲内酯的含量最高[2，3]。《中国药典》2005年版Ⅰ部用高效液相色谱法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，但中药的作用机理比较复杂，可能不是一种或两种成分产生药效作用，我们认为增加总内酯的含量作为评价穿心莲药材质量的指标，比仅用穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量作指标更为全面。目前有关于穿心莲含量测定的报道，也多以高效液相法测定单一成分的含量为多[4]，以总内酯含量评价穿心莲药材质量的报道较少[5，6]。
       本研究为国家自然科技资源共享平台项目“药用植物种质资源标准化整理、整合及共享试点—穿心莲”的研究内容之一。本文以二硝基苯甲酸和KOH试液为显色剂[5]，通过比色法测定不同产地及不同部位中穿心莲总内酯的含量，为更好地研究和开发穿心莲资源提供质量评价手段。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器UV-1100紫外-可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)，KQ-3200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
       1.2 试药穿心莲内酯对照品(批号：110797-200307，购自中国药品生物制品检定所);其他试剂均为分析纯。穿心莲自采和购自全国8个省、市24个产地(表2)，均经成都中医药大学鉴定教研室卫莹芳教授鉴定为穿心莲Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees 的干燥地上部分。
       2 方法与结果
       2.1 供试品溶液的制备 取穿心莲药材粉末(过2号筛)1.0 g，精密称定，加入25 ml 85%乙醇及适量活性炭回流提取2次，2 h/次，滤过，合并滤液。滤液再次加入适量活性炭，静置过夜(以不呈绿色为准)，滤过，滤液回收85%乙醇，置50 ml量瓶中，加乙醇至刻度，即得。
       2.2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的穿心莲内酯对照品10.85 mg，加乙醇溶解于25 ml量瓶中，得0.434 mg/ml的对照品溶液。
       2.3 最大吸收波长的选择精密量取对照品溶液1.5 ml，置10 ml量瓶中，加60%乙醇2 ml，2% 3,5-二硝基苯甲酸1 ml，2%KOH试液1ml,摇匀，以60%乙醇代替对照品溶液加显色剂为空白。放置15 min，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，在400～760 nm波长范围内扫描，结果显示，在540 nm处有最大吸收，同时供试品溶液在400～760 nm波长范围内扫描，结果亦显示在540 nm处有最大吸收，故选择540 nm为检测波长。扫描结果见图1～2。
       2.4 测定方法 精密吸取样品溶液2 ml，置10 ml量瓶中，加60%乙醇2 ml，2%3,5-二硝基苯甲酸1ml，2%KOH试液1 ml,摇匀，以60%乙醇代替样品溶液加显色剂为空白对照，在540 nm处测定吸光度。
       2.5 标准曲线制备精密量取对照品溶液0，0.5，1，1.5，2，2.5 ml，分别置于10 ml量瓶中，各加60%乙醇2 ml、2%3,5-二硝基苯甲酸、2%KOH试液1 ml,摇匀，以第1管为空白，分别在540 nm波长处测定吸收度，绘制标准曲线，以吸光度A为纵坐标，穿心莲内酯重量X(mg)为横坐标，得标准曲线方程为:A= 5.193 5x -0.044 7，相关系数r=0.999 5,线性范围为0.021 7～0.108 mg。如图3所示。图1 穿心莲内酯对照品溶液最大吸收波长图图2 穿心莲药材样品最大吸收波长图
       2.6 精密度实验精密量取1ml穿心莲内酯对照品溶液，平行6份，按样品测定方法测定吸光度，结果RSD=1.16 %，表明仪器精度良好。
       2.7 稳定性实验精密量取穿心莲供试品溶液2 ml，置于10 ml量瓶中，按样品测定方法操作，分别在显色15，17，19，21，23，25 min后，于540 nm处测定吸光度，结果RSD=1.22 %，表明样试品溶液在显色后25 min内稳定，为保证测定结果的准确性，均选择显色后第20 min时测定吸光度。图3 穿心莲内酯标准曲线图
       2.8 重复性实验称取同一批穿心莲样品6份，每份1.0 g，精密称定，照“2.1”项下方法制备，精密吸取各供试品溶液适量，按样品测定方法操作测定吸光度，结果RSD=1.65 %，表明该方法有较好的重复性。
       2.9 加样回收率实验精密称取穿心莲内酯对照品适量，加乙醇制成每毫升含3.042 5 mg的溶液，备用。取已知含量的穿心莲样品约0.5 g，平行6份，精密称定，各加入对照品溶液3 ml，按供试品溶液制备方法制备，测定吸光度，计算回收率。见表1。结果表明，穿心莲总内酯6次试验的加样回收率测定结果在98.89%～102.62%之间，平均回收率为100.42%，RSD=1.31 %(n=6),表明本法回收率好，方法可行。表1 穿心莲内酯回收率实验结果
       2.10 样品测定及结果按供试品溶液制备方法制备各样品溶液，依法测定吸光度，计算样品中总内酯的含量。结果见表2～4。表2 全国不同产地穿心莲样品中总内酯含量测定结果表3 穿心莲不同部位样品中总内酯含量测定结果表4 不同产地穿心莲药材茎叶比
       3 讨论
       本实验用二硝基苯甲酸和KOH试液显色，比色法在540 nm处测定穿心莲中总内酯的含量，在 0.0217～0.108 mg范围内线性关系良好(r=0.999 5)，平均回收率为100.42%，RSD为1.31%，可作为该药材总内酯的分析测定方法。
       在提取分离总内酯的过程中，提取溶剂、提取方法、提取时间、料液比对其含量都有影响，结果显示用25 ml 85%乙醇和活性炭回流提取两次，2 h/次，提取液加活性炭脱色过夜(以不呈绿色为准)，提取效果最佳。
       由表2可知，12个穿心莲产地的13个自采药材样品中总内酯含量1.27%～2.76%，有较大的差异，广东湛江遂溪县产穿心莲总内酯含量高于其他地区，达2.76%，其次是广东清远英德市和广西南宁邕宁县，安徽林泉谭棚乡的含量最低为1.27%。12个穿心莲商品药材样品中总内酯含量0.49%～2.13%，也有很大的差异，以贵州花果园太升药材批发市场的商品药材总内酯含量最高，达2.13%，具体产地不明，其次是遵义泰康医药公司和广东清平药材市场所购商品药材，分别产自遵义地区和广东，含量最低的为山东济宁曲阜育德药栈的药材，仅为0.49%，具体产地也不明。
       从地理环境上看，广东广西等南方省份所产药材的总内酯含量较高，四川安徽等省份所产药材的总内酯含量稍低。不同产地穿心莲药材总内酯含量有一定的差异，是否与当地的生态环境、药材种植和管理方法、加工、运输、贮存时间的差异和药材茎叶的比例有关，有待于进一步考察。
       由表3可知，11个批次的穿心莲药材样品，不同部位的总内酯含量差异较大。叶中总内酯含量最高为3.68%，最低为1.82%，茎中总内酯含量最高为1.04%，最低为0.44%，茎中最高总内酯含量小于叶中最低总内酯含量，叶中含量明显高于茎中含量，《中国药典》2005年版Ⅰ部中规定穿心莲药材叶的含量不得少于30%是有科学依据的。穿心莲药材总内酯的含量与药材中所含茎和叶的比例有关。11个批次样品中，茎中总内酯含量以广东清远英德所产药材最高，安徽临泉谭棚所产药材最低，叶中总内酯含量以广东湛江遂溪所产药材最高，安徽临泉牛庄所产药材最低。
       【参考文献】
         　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005:189.
       
       [2] 王国才，胡永美，张晓琦，等.穿心莲的化学成分[J].中国药科大学学报，2005,36(5):405.
       
       [3] 肖树熊，王晓钰，郑剑红.穿心莲的成分及其分析方法研究概况[J].中国药师，2002,5(11):693.
       
       [4] 张 涛.穿心莲的研究进展[J].中药材，2000,23(6):366.
       
       [5] 吴俊伟，古淑英，曾忠良，等.酸水法及其它方法提取穿心莲总内酯的比较[J].中国兽药杂志,1999,33(2):23.
       
       [6] 王桂英.穿心莲中总内酯的含量测定[J].中成药研究，1983，10：31.