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       【摘要】 
       目的探讨不同炮制方法对厚朴中厚朴酚含量的影响。方法采用HPLC-ELSD法测定不同厚朴炮制品中厚朴酚的含量。结果不同炮制方法均能影响厚朴中厚朴酚的溶出度，姜制厚朴中厚朴酚的含量最高，厚朴生品的厚朴酚含量最低。结论炮制方法对厚朴中厚朴酚的含量影响较大，HPLC-ELSD可以较好的应用于厚朴炮制的研究。
       【关键词】  高效液相色谱-蒸发光散射检测法; 炮制; 厚朴酚
       Abstract：ObjectiveTo discuss the influence of processed methods on the content of magnolol in Cortex Magnoliae Officinalis.MethodsHPLC-ELSD was used to determine the content of magnolol in Cortex Magnoliae Officinalis with different processed methods.ResultsDifferent processed methods affected the dissolution rate of magnolol in Cortex Magnoliae Officinalis. The content of magnolol in Cortex Magnoliae Officinalis by Ginger-processed was the highest. The content of magnolol in Cortex Magnoliae Officinalis without disposal was the lowest. ConclusionThe processed methods can affect the content of magnolol in Cortex Magnoliae Officinalis significantly. The method of HPLC-ELSD can be used to study the influence of processed methods on Cortex Magnoliae Officinalis.
       Key words：HPLC-ELSD; Processed; Magnolol
       厚朴为木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮，具有燥湿消痰、下气除满的功能，主治湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳[1]。厚朴为常用中药，临床上生品较为少用，多使用炮制品。历代使用的厚朴炮制品品种较多，但以姜制厚朴使用时间最长，沿用至今。宋代《本草衍义》更是阐明“不以姜制，则棘人喉舌”。厚朴主要有效化学成分为酚类成分，以厚朴酚、和厚朴酚为代表，目前含量测定方法较多，以高效液相色谱-紫外检测法为主，没有HPLC-ELSD法测定的相关报道。本研究拟采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法研究不同炮制方法对厚朴中厚朴酚含量的影响，探讨HPLC-ELSD法在厚朴炮制机理研究中的可行性，为厚朴炮制品的成分变化研究提供参考方法。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器HP1100型高效液相色谱仪，Alltech 2000型蒸发光散射检测器，色谱柱：Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm)，浙大N2010色谱工作站，METTLER TOLEDO AG285 电子分析天平。
       1.2 试药厚朴酚对照品(含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供，批号为110729-200310)，厚朴药材购自重庆城口药材公司，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
       2 方法与结果
       2.1 炮制品的制备[2]
       2.1.1 生厚朴去粗皮，除去杂质，洗净，切丝，低温干燥。
       2.1.2 姜制厚朴按《中国药典》及中药饮片炮制规范方法处理，取厚朴丝，加姜汁拌匀，闷润至姜汁吸尽，用文火炒干，每10 kg药材用鲜生姜1 kg。
       2.1.3 姜烘厚朴取厚朴丝，加姜汁拌匀，闷润至姜汁吸尽，置烘箱中80℃烘干，每10 kg药材用鲜生姜1 kg。
       2.1.4 清炒厚朴取厚朴丝，文火炒至变黄。
       2.2 供试品溶液的制备将各炮制品随机取少量粉碎成细粉，各炮制品分别取6份样品，每份约0.5 g，精密称取，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声30 min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置10 ml容量瓶中，摇匀，即得。
       2.3 对照品溶液的制备精密称取厚朴酚10 mg，分别置25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，作为对照品储备溶液。
       2.4 高效液相色谱条件[3，4]色谱柱：Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：甲醇-水(73∶27)，流速1.0 ml·min-1;柱温为室温;进样量20 μl;蒸发光散射器(ELSD)条件：漂移管温度75℃，氮气流速2.0 L·min-1;理论塔板数按厚朴酚峰计算应不低于3 000，在此条件下各组分得到良好分离，液相色谱图见图1。
       2.5 线性关系的考察精密量取“2.3”项中配制的厚朴酚对照品溶液，加甲醇制成标准系列进样测定。以色谱峰面积的对数Y作为纵坐标，标准品溶液浓度(mg·ml-1)的对数X作为横坐标，求回归方程得：Y=1.002 4X+6.154 4，r=0.999 8。结果表明厚朴酚在0.04～0.4 mg·ml-1浓度范围内线性关系良好。A-对照品 B-姜制厚朴 C-姜烘厚朴D-清炒厚朴 E-厚朴生品图1 样品高效液相色谱图
       2.6 精密度实验在上述色谱条件下，精密吸取厚朴酚甲醇溶液(0.4 mg·ml-1)20 μl，重复进样6次，测得厚朴酚峰面积A=571 469，RSD为1.77%。
       2.7 重复性试验精密称取同一批姜制厚朴样品6份，按样品溶液的制备方法制备，分别进样20 μl，在上述色谱条件下测定，按外标法测定其厚朴酚含量为2.41%，RSD为2.15%。
       2.8 加样回收率试验取已知厚朴酚含量的厚朴药材细粉6份，精密称定，分别精密加入对照品溶液，按照样品溶液制备方法制备并测定，计算平均回收率。结果厚朴酚的平均回收率X=99.8%，RSD=2.83%。
       2.9 不同炮制品中厚朴酚的含量测定分别精密吸取对照品溶液各20uL，按上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中厚朴酚的含量。结果见表1。表1 样品测定结果
       3 讨论
       厚朴为中医临床常用中药，历代使用的厚朴炮制方法有十余种，但以姜制厚朴流传最广，沿用至今，《中国药典》2005版和《全国中药炮制规范》均收载了姜制厚朴，没有收录其他炮制方法。本文在相同实验条件下比较了不同炮制方法对厚朴中代表性化学成分厚朴酚的影响。实验结果表明，不同炮制方法均能提高厚朴酚的含量，其中厚朴生品中厚朴酚的含量最低，姜制厚朴中厚朴酚的含量最高，证明辅料姜汁和加热处理对厚朴酚的溶出量均有影响。实验结果表明厚朴经过炮制处理后厚朴酚的含量有所提高，推测可能是厚朴炮制后组织结构发生了一定的改变，有利于厚朴酚的溶出。
       由于蒸发光散射检测器(ELSD)不依赖于样品的光学特性，能够检测不含发色团的化合物，任何挥发性低于流动相的成分均能被检测，克服了传统紫外和荧光检测器的不足，应用HPLC-ELSD建立的中药指纹图谱能够真实全面的反应中药内在的化学成分。本文利用HPLC-ELSD建立了厚朴药材中代表性成分厚朴酚的测定方法，方法简便快速，结果准确可靠，可以有效的应用于厚朴药材质量控制的研究。另外在比较研究姜制厚朴和厚朴生品的色谱图可以发现，姜制厚朴的色谱图中增加了两个色谱峰，可以判断厚朴炮制加工后产生了新成分，而在使用紫外检测器的色谱图中不能发现这两个色谱峰。可以预见HPLC-ELSD法将成为中药炮制机理研究的有力手段，本文方法为进一步研究不同炮制方法对厚朴特征性化学成分的变化规律奠定基础。
       致谢：本文为作者受教育部“质量工程”资助于华中科技大学同济医学院药学院进修期间所做研究工作，感谢吴继洲教授的指导和帮助。
       【参考文献】
         　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S]. 北京：化学工业出版社，2005：176.
       
       [2] 中华人民共和国卫生部药政管理局. 全国中药炮制规范[S].北京：人民卫生出版社，1988：287.
       
       [3] 冯慧萍，杨中林，胡育筑. 厚朴及其炮制品HPLC-DAD-MS色谱指纹图谱的研究[J].中成药，2007，29(1)：84.
       
       [4] 张海江，郭怀忠，杨晓萍，等. 固相萃取-高效液相色谱法测定藿香正气口服液中厚朴酚与和厚朴酚的含量[J].药物分析杂志，2009，29(2)：316.