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       【摘要】 
       目的观察中药明目“五子”对大鼠光损伤视网膜氨基酸水平的影响，并探讨其对光损伤视网膜的保护作用及其机理。方法采用绿色荧光灯(波长510～560 nm)持续照射24 h造成大鼠视网膜光损伤。同时给予明目“五子”高、低剂量灌胃，连续给药14 d后，检测视网膜氨基酸含量。结果模型组对照组大鼠视网膜天门冬氨酸(ASP)、谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量升高，与正常对照组比较统计学上有显著性差异(P<0.01);中药高剂量组视网膜氨基酸含量与模型对照组比较明显降低，统计学上有显著性意义(P<0.05)。 结论明目“五子”可降低光损伤后视网膜游离氨基酸的含量，从而发挥减轻视网膜光损伤、保护视网膜的功效。
       【关键词】  视网膜; 光损伤; 明目“五子”; 氨基酸类
       视网膜光损伤、视网膜萎缩性变性等病变发生发展的主要机制是感光细胞和色素细胞的凋亡。细胞凋亡是一个极其复杂的生理或病理过程，与若干因素有关，近年研究发现视网膜兴奋性氨基酸的过量可导致兴奋毒性作用，引起视网膜神经元的死亡[1～3]。本实验采用大鼠视网膜光化学损伤模型作为研究对象，通过视网膜游离氨基酸的测定，研究中药明目“五子” 对视网膜光化学损伤及损伤修复的影响，并探讨其对视网膜的保护作用及机理。
       1 材料与仪器
       实验动物8周龄SD大鼠32只，雌性，体质量150～170 g。由成都中医药大学动物实验中心提供，动物及实验使用条件符合国家科学技术委员会的《实验动物管理条例》。实验药物为中药明目“五子”，主要组成为枸杞子、菟丝子、五味子、茺蔚子、楮实子，中药以常规剂量制成水煎剂。主要仪器：日本产日立835-50型氨基酸分析仪。
       2 方法
       2.1 造模方法[4]采用自制光化学损伤装置。在光照架的6个面分别放置1根40W的绿色荧光灯管(波长510～560 nm)。光照箱中心各方向平均照度为(1 900±107)Lux，相当于大鼠正常活动时眼球水平的各箱壁的照度为2000Lux。动物房的室温控制在21～24℃，光照箱内的平均温度为22～25℃。所有实验动物在12 h明(30～50 lux)及12 h暗环境光照维持，自由摄食饮水，驯养10 d。10 d后将大鼠暗适应24 h，然后进入光照箱，接受24 h光照。光照期间大鼠不予散瞳及麻醉，可在光照箱内自由活动，光照后送回暗环境中饲养。
       2.2 分组及给药方法随机选取8只大鼠作为正常对照组，其余24只造模后随机分为模型对照组、中药高剂量组、低剂量组，每组各8只。中药高、低剂量组：分别以临床成人剂量20倍(13 g生药/kg)、10倍(6.5 g生药/kg)的明目“五子”水煎剂灌胃，1次/d。模型对照组、正常对照组：以中药等容量的生理盐水灌胃，1次/d。光照同时给药，共14 d。
       2.3 大鼠视网膜组织游离氨基酸的测定于用药14 d后各组过量麻醉大鼠，摘除眼球进行视网膜组织游离氨基酸的测定。过量麻醉大鼠，立即取出眼球，在冰块上(4℃)，显微镜下沿角巩膜缘前约0.5～1 mm处剪开角膜，去除晶体、玻璃体，然后沿锯齿缘剥离视网膜，立即称重。用70%乙醇水溶液5 ml充分匀浆后在80 ℃下回流提取游离氨基酸20 min，离心，吸取上清液于小烧杯中。重复提取5次，集中上清液，80℃蒸干，准确吸取2%磺基水杨酸溶液0.6 ml溶解，离心，取上清液供测定视网膜游离氨基酸。
       2.4 统计学处理采用SPSS10.0软件进行分析。采用单因素方差分析，各项指标均以±s表示。
       3 结果
       模型对照组与正常对照组比较，视网膜游离氨基酸〔天门冬氨酸(ASP)、谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)〕含量明显升高，具有显著性差异(P<0.01);与模型对照组比较，中药明目“五子”高剂量组视网膜氨基酸含量明显降低，统计学上有显著性意义(P<0.05);而低剂量组与模型对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。表1 各组大鼠视网膜游离氨基酸含量的比较
       4 讨论
       中药“五子”(枸杞子、菟丝子、茺蔚子、五味子、楮实子)是中医眼科古代若干明目效方中补肝肾最常用的药物，皆为种子，具有补益肝肾，活血利水等功效。古人认为：“诸子明目”，多种子仁类药物都可以入目，用于治疗眼部疾患，而具有补益肝肾、活血明目类的药物则对视网膜退行性病变等老年性眼病有显著防护作用，如决明子丸、车前子散、青葙子丸等。子类药物素有眼科“中药维生素”之称，临床实践证实子类为主的中药复方对防止视网膜损伤及促进损伤后修复方面有着明显的优势。
       中枢神经系统包含有多种神经递质，氨基酸是视网膜中一类重要的神经递质。谷氨酸是视网膜神经系统的主要兴奋性神经递质，主要传递光感受器以及处于视信号传递直接通路上的双极细胞的信息[5]，研究认为谷氨酸过度激活相应受体可使神经元过度兴奋、坏死或凋亡，导致钙离子持续内流，引起细胞迟发性损伤[6]，与青光眼缺血节细胞损伤级联反应、增生性糖尿病性视网膜病变的新生血管形成有重要关系[7]。而介导横向相互作用的水平细胞和无长突细胞的主要递质GABA[8]，是视网膜神经系统中重要的抑制性神经递质，对谷氨酸毒性有“抑制保护”作用[9]。
       本实验测定大鼠光损伤模型的视网膜GLU、ASP、GABA含量，结果表明3种游离氨基酸含量均显著升高，分析其原因可能是由于实验光照度较强，光感受器细胞在较短时间内大量凋亡，谷氨酸和天门冬氨酸作为视网膜光感受器所释放的神经递质细胞崩裂分解而解释出大量谷氨酸和天门冬氨酸，在此过程中由于机体自我调节机理，诱导无长突细胞、双极细胞中GABA释放， 最终GABA作为视网膜中一种抑制性神经递质代偿性释放增加。中药明目“五子”高剂量组视网膜氨基酸含量明显降低，推测这种病理改变明显减轻的原因可能为“五子”减少了氨基酸的释放，促进其再摄取，并对抗其受体激活，抑或可能通过抑制钙离子超载，保护视网膜细胞，抑制凋亡的途径，从而降低氨基酸的释放，机理有待我们进一步研究。
       【参考文献】
         　[1] 刘 凯,刘 丹. 视网膜光损伤凋亡机制研究进展[J]. 辽宁医学院学报,2008,29(2):186.
       
       [2] 鲍玉洲,蒋永祥,陈 慷，等. 眼内不同组织氨基酸的测定及对视细胞损伤的影响[J]. 医学研究杂志,2006,35(5):46.
       
       [3] 张 鹏,刘学政. 视网膜光损伤机制的研究[J]. 中华现代眼科学杂志,2005,2(7):606.
       
       [4] 刘学政,于 波,萧 鸿,等. 实验性大鼠视网膜光损伤模型的建立与研究[J].眼视光学杂志，2003，5(1):29.
       
       [5] Mike Boultona, Malgorzata Rozanowska,Bartosz Rozanowski.Retinal photodamage[J].Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology,2001,64: 144.
       
       [6] Gosbell AD,Stefanovic N, Scurr LL, et al. Retinal light damage: structural and functional effects of the antioxidant glutathione peroxidase-1[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci,2006,47 (6):2613.
       
       [7] 曹业宏,林乐理. 青光眼与谷氨酸、细胞凋亡[J]. 沈阳医学院学报,2007,9(1):54.
       
       [8] 陆孟婷,李平华.视网膜缺血再灌注损伤中谷氨酸的兴奋毒性及其机制[J]. 国际眼科杂志,2008,8(8): 1637.
       
       [9] Traustason S, Eysteinsson T, Agnarsson BA, et al. GABA agonists fail to protect the retina from ischemia-reperfusion injury[J]. Exp Eye Res,2009,88(3):361.