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       【摘要】 
       目的从不同品种的北五味子藤茎中提取多糖并测定多糖含量。方法经脱脂、醇提后，用水提醇沉法提取多糖，用苯酚-硫酸法测定其含量。结果五味子藤茎中多糖含量为2.46%～4.44%，平均回收率为100.26%，RSD=1.55% (n=6)。结论不同品种的北五味子藤茎多糖的含量有一定的差异。
       【关键词】  北五味子; 多糖; 提取; 苯酚-硫酸法
       北五味子Schisandra chinensis ( Turcz.) Baill.为木兰科北五味子属植物，主产东北，为常用中药，《神农本草经》将其列为上品，具有补肾、益气、生津、固涩等功效。北五味子的化学成分主要是五味子木脂素、挥发油、多糖等[1]。北五味子粗多糖具有保肝作用，能对抗肝细胞脂质过氧化、促进肝再生和利胆作用[2];具有增强机体抗应激能力和免疫功能，还具有改善体内自由基代谢紊乱的作用;能明显提高小鼠耐氧及抗疲劳能力，增加正常小鼠免疫器官重量，并明显增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能，有较好的免疫兴奋作用和抗衰老作用[3]。通过我们的初步研究，五味子藤茎也含有大量的多糖类成分，因此对五味子藤茎中多糖含量进行了测定。本文采用热水浸提法，用苯酚-硫酸法测定北五味子藤茎中多糖的含量。
       1 材料与仪器
       1.1 药材来源北五味子藤茎供试品共9种，黄果一年生，461一年生，461两年生，462一年生，462两年生，抚松1号一年生，抚松1号两年生，抚松2号一年生，抚松2号两年生。洗净，切断，55℃烘干，粉碎，粉末混合均匀后，装于自封袋中，置于干燥器中保存，备用。样品于2009-11采自吉林左家中国农业科学院特产研究所药用植物资源圃，经中国农业科学院特产研究所沈育杰研究员鉴定为木兰科(Magnoliaceae)五味子属(Schisandra Michx)植物。
       1.2 试剂无水乙醇、铝片、NaHCO3、丙酮、氯仿、正丁醇、浓硫酸、苯酚、葡萄糖、蒸馏水等均为国产分析纯。
       1.3 仪器UV-2450紫外分光光度计, SHIMADZU Corporation; 数显恒温水浴锅HH-6，常州澳华仪器械有限公司产品;电热恒温鼓风干燥箱101-1，上海路达实验仪器有限公司产品;旋转蒸发器R502B，上海申生科技有限公司产品;超生波清洗仪SK8200H，上海科导超声仪器有限公司产品; 150 ml索氏提取器，北京玻璃仪器厂产品。
       2 方法与结果
       2.1 葡萄糖标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.103 8 g，用蒸馏水溶解并定容到100 ml即为1.038 mg/ml的葡萄糖储备溶液。吸取1 ml葡萄糖储备溶液于100 ml容量瓶中，用水稀释到刻度，作为葡萄糖标准溶液。
       2.2 苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加铝片0.1 g和NaHCO3 0.05 g，蒸馏，收集182℃馏份，称取10.0 g，加水溶解定容于200 ml容量瓶中，放冰箱备用。
       2.3 标准曲线绘制精密量取葡萄糖标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml置具塞试管中，分别加蒸馏水至1.0 ml，再分别加入5%苯酚溶液1.0 ml, 摇匀，然后加浓H2SO4 5.0 ml，充分摇匀，置40℃水浴中恒温30 min[4]，取出冷却至室温。另以蒸馏水同上操作为空白对照，在490 nm处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程: A = 0.010 4C +0.070 33，r2=0.999 6。葡萄糖含量在1.038～6.228 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
       2.4 精密度实验 精密吸取标准品溶液1.0ml 6份，同“2.3”项下操作，结果显示吸光度的RSD=1.27%。
       2.5 北五味子藤茎多糖的提取与精制称取55℃干燥的北五味子藤茎400 g，用清水洗净，加水4 000 ml，微沸煎煮1 h，过滤，滤渣加水4 000 ml，超声30 min后继续煎煮1h，过滤，合并提取液，加热浓缩至400 ml。加入乙醇使溶液中乙醇含量为80%，放置12 h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤。得到棕色粗多糖。将粗多糖溶于水，用氯仿∶正丁醇=4∶1除去蛋白，加入0.1%活性炭，置于40℃的水浴锅中搅拌40 min[5]，抽滤, 滤液加入乙醇使溶液含乙醇达80%, 静置过夜, 抽滤, 残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥，即得精制北五味子藤茎多糖。
       2.6 换算因子测定精确称取60℃干燥恒重的北五味子藤茎多糖233 mg，置100 ml容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液0.20 ml，加水至1.00 ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD。式中W为多糖重量(μg)，C为测试液中据标准曲线计算得到的单糖浓度(μg·ml-1)，D为多糖的稀释因子。测得f=0.629(n=6)。
       2.7 样品含量的测定精密称取不同品种的北五味子藤茎粉各100 mg，置于索氏提取器中用80%乙醇回流2 h，抽滤，弃去滤液，残渣挥发至干，继续以蒸馏水煎煮1 h, 煎煮2次，抽滤, 滤液反复洗至100 ml容量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精密吸取样品液1.0 ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量(以粗多糖计)：多糖含量(%)=CDf×100/W。式中：C为样品溶液的葡萄糖的浓度(μg·ml-1)，D为样品溶液的稀释因子，f为换算因子，W为样品的重量(μg)。结果见表1。
       2.8 回收率测定精密吸取样品液0.5 ml (6份)再分别精密加入不同量的标准溶液，依样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值为100.26%，RSD=1.55%。
       2.9 稳定性实验将供试品溶液完成显色后，每隔30 min测吸光度1次，连测4次。结果表明2 h内稳定性良好，以A值计算，RSD=1. 36% (n=4)。表1 不同品种北五味子多糖含量测定结果
       3 讨论
       多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子聚合物,是构成生命的分子基础之一,是自然界含量最丰富的生物聚合物。人们陆续发现,多糖不仅作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，还在抗肿瘤、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗辐射等方面具有广泛的药理作用[6]。多糖的测定方法很多，本实验使用热水浸提法，再以80%乙醇提取以除去单糖、寡聚糖、苷类及生物碱等醇溶成分，再用水提醇沉法分离多糖成分，并以苯酚-硫酸法测定其含量。通过回收率实验和稳定性实验可知，实验结果表明，北五味子藤茎多糖平均含量为3.58%。其中抚松2号一年生含量最高为4.44%，黄果一年生的含量最低为2.46%，除黄果外，其它品种的一年生的多糖含量都高于两年生的含量。但其化学组成、理化性质及药理活性还有待于进一步研究。
       【参考文献】
         　[1] 刘继永，王英平，刘洪章.五味子化学成分及药理研究进展[J]. 特产研究，2005，3:49.
       
       [2] 睢大员，高普军，吕忠志，等. 北五味子粗多糖保肝作用的药理研究[J].吉林中医药，1995，1:37.
       
       [3] 应国清，俞志明，单剑峰，等. 北五味子有效组分的研究进展[J].河南中医， 2005， 25(6): 84.
       
       [4] 谭晓虹，王治宝，李如章.北五味子多糖的提取和含量测定[J].时珍国医国药，2007， 18 (6):1463.
       
       [5] 范荣军，田 洛，郭 涛，等. 五味子多糖提取及活性炭脱色工艺研究[J].中草药， 2006， 37: 217.
       
       [6] 邓小云，丁登峰，戴美红，等. 植物多糖药理作用研究进展[J].中医药导报， 2006， 12(9): 86.