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       【摘要】 
       目的探讨不同性别及去花对薯蓣皂苷元含量的影响。方法采用高效液相色谱法测定不同时期穿龙薯蓣根茎中薯蓣皂苷元的含量。结果与结论雌性植株薯蓣皂苷元的含量显著高于雄性，雌性去花后含量明显降低，与雄性植株接近。雌性、雌性去花和雄性三者具有相似的季节积累规律。
       【关键词】  穿龙薯蓣; 性别; 薯蓣皂苷元
       穿龙薯蓣为薯蓣科植物穿龙薯蓣(穿山龙)Dioscorea nipponica Makino的干燥根茎，分布于东北、华北、西北(除新疆)及河南、湖北、山东、江苏、安徽、浙江、江西、四川等地。穿山龙的根状茎含有薯蓣皂苷元，其结构与甾体激素类药物相近，为合成各种类型的避孕药品和甾体激素类药物的重要原料。世界上合成甾体激素类药物大部分是以薯蓣皂苷元为原料的，而我国几乎全部是以其为原料。穿龙薯蓣为雄雌异株，对板栗、石刁柏、银杏等许多雌雄异株植物研究表明其生理代谢表现出明显的差异，以致影响体内的化学成分含量和质量[1～3]，植物性别可采用激素进行调控，在生产中也有一定的应用[4，5]。另外，疏花、打顶等阻断植物生殖生长的措施不仅会提高产量，也会改变活性成分积累[5，6]。为此，本文以薯蓣皂苷元含量为指标，对不同性别穿龙薯蓣及雌性去花的质量差异及其季节积累规律进行研究，为穿龙薯蓣的质量控制及资源的合理利用提供依据。
       1 材料与仪器
       1.1 材料2007年春季将播种于铁力林业局宝马林场的二年生种苗移栽于黑龙江中医药大学药用植物园内，将雌性穿龙薯蓣分为两部分，其中一部分随时摘除花蕾，从2008年5月下旬起，每隔2周分别对雄性穿龙薯蓣、去花雌性穿龙薯蓣和不去花的根茎进行取样，阴干。
       1.2 试药薯蓣皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱级, 美国迪马(DIK-MA)公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);甲醇(分析级)。
       1.3 仪器LC-2010A型自动进样高效液相色谱仪，KDC-160HR 高速冷冻离心机,AS3120-B 超声震荡仪。
       2 方法与结果
       2.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18(200mm×4.6mm);流动相为甲醇-水(94∶6)，流速为1.0 ml/min，柱温40℃，检测波长203 nm，进样量10 μl。
       2.2 对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品约5 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并制成每毫升含0.5 mg的溶液。
       2.3 供试品溶液的制备[7]精密称定穿山龙药材粉末约0.5 g，置50 ml锥形瓶中，准确加入甲醇5 ml，超声提取30 min，取上清液离心15 min(3 000 r·min-1);再量取2 ml上清液于10 ml试管中，回收甲醇至干，加入2 mol/L盐酸0.6 ml，90℃加热水解3 h，放冷，向其中加7～8滴过饱和碳酸钠溶液;用氯仿萃取3次，第1次加入氯仿5 ml，后两次加入3 ml，每次萃取20 min，合并3次萃取液，蒸干氯仿，残渣加甲醇使溶解，定容于5 ml容量瓶中，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。
       2.4 线性关系考察精密称取经干燥的对照品5.31 mg，用色谱甲醇溶解并定容至10 ml，配制成浓度为0.531 mg/ml的对照品溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过后，分别吸取2.0，4.0，8.0，10.0，12.0，16.0 μl，依次进样，测得薯蓣皂苷元的峰面积。以进样量(ug)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，薯蓣皂苷元在1.02～8.16 μg范围内线性关系良好。回归方程：Y=623 277X+65 304,r=0.999 7。
       2.5 精密度实验精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定其峰面积，经计算RSD为1.63%，表明仪器精密度良好。
       2.6 稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在(0，6，12，24，48 h)精密吸取10 L注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，计算RSD为1.82%(n=5)。结果表明，供试品溶液在72 h内稳定。
       2.7 重复性实验取8月1日采集的同一批雌性样品,精密称取5份,按“2.3”项下操作,在上述色谱条件测定薯蓣皂苷元的含量,RSD分别为2.99%(n=5)。
       2.8 回收率实验精密称取5份8月1日采集的同一批雌性样品药材粉末0.2 g,分别加入一定量的对照品,按“2.3”项下操作。在上述色谱条件下测定,得出薯蓣皂苷元平均回收率分别为98.7%，RSD分别为1.7%。
       3 讨论
       大量研究表明，在逆境生境中雄性植株生长良好，雄性个体比例较大。相反，雌性在较适宜的生境中生长良好，数量占优势，主要是由于不同性别的植物对逆境的耐受程度不同所致[8]。栝楼雄株的光合色素,可溶性蛋白质的量,超氧化物岐化酶、过氧化物酶活高于雌株,而雌株的丙二醛、可溶性糖、紫外吸收物的量高于雄株,差异达显著性水平[9]，可见雌性植株更容易受到环境胁迫的影响。生物在生长发育非最适条件的次分布区个体生长发育不良或频率较低，逆境生态能促进道地药材的质量形成[10]，植物在逆境条件下次生代谢产物增多，这是一种较为普遍的现象，这种现象往往是受某些或某个因子的限制所致，导致其道地产区在空间上位于物种整个分布的边缘[11]，因此，雌性植株的代谢更易受环境的干扰，次生代谢产物含量升高。穿龙薯蓣也表现出相同的规律，雌性植株薯蓣皂苷元的含量显著高于雄性。但雌性去花后含量有降低的趋势(见图1)，可能与去除花后，植株生殖消耗较少，增强了逆境的耐受能力。图1 雄、雌及去花雌株薯蓣皂苷元季节变化规律穿龙薯蓣雌性、雌性去花和雄性三者具有相似的季节积累规律，各生长发育含量变化不大。
       【参考文献】
         　　[1] 池静端,白秀峰,刘爱茹,等.HPLC法测定银杏叶中6种黄酮类成分的含量[J].药学学报,1997,32(6)：625.
       
       [2] 王克霞,寿森炎,吴 蓉. 雌雄芦笋嫩茎营养价值的比较研究[J].北方园艺,2004，5：52.
       
       [3] 张须学,李海霞,刘延泽.HPLC法研究雄、雌虎杖不同部位化学成分的变化[J].中草药,2006，37(8)：1258.
       
       [4] 田砚亭,张秀海. 银杏性别分化阶段的早期鉴定及其激素调控[J].河北林果研究,1998,13(3)：199.
       
       [5] 孙 晖,杨 舸,孟祥才,等.打顶对北柴胡皂苷类成分季节积累规律的研究[J].中药现代研究与实践,2008,22(2)：10.
       
       [6] 孟祥才,孙晖,杨 舸,等.打顶对北柴胡产量和质量影响[J].中药材,2008,31(3)：336.
       
       [7] 李 谦,高向涛,赵文垒,等.盐酸催化薯蓣皂苷水解过程的优化研究[J].中药材,2008,31(7)：1059.
       
       [8] 胥 晓,杨 帆,尹春英,等.雌雄异株植物对环境胁迫响应的性别差异研究进展[J].应用生态学报, 2007,18(11)：2626.
       
       [9] 李 珊,程 舟,李 彦,等.雌雄栝楼植株内含物比较研究[J].中草药,2008,39(2)：260.
       
       [10] 黄璐琦.分子生药学，第2版 [M].北京:北京医科大学出版社,2006:9.
       
       [11] 黄璐琦,陈美兰,肖培根.中药材道地性研究的现代生物学基础及模式假说[J].中国中药杂志,2004,29(6)：494.