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       【摘要】 
       目的观察乌头类生物碱(双酯型生物碱与单酯型生物碱)对慢性心力衰竭(CHF)模型大鼠心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响。方法采用腹主动脉缩窄法，制备慢性心力衰竭大鼠模型，8周后，用16导生理记录仪采集并分析心率(HR)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩压峰值(LVSP)、左心室内压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)等心功能指标。心力衰竭模型成功后，给药组灌胃给予生物碱2周，测定心肌组织SOD活力、MDA含量。结果造模组SOD值明显低于假手术组，MDA值显著高于假手术组(P<0.05)。各给药组SOD值降低明显，MDA值升高显著(P<0.05)。结论乌头类生物碱能明显降低大鼠心肌匀浆中SOD的活性，同时增加氧化产物MDA的含量，提示乌头类生物碱对心力衰竭大鼠的心肌毒性机制与心肌氧化损伤有关。
       【关键词】  乌头类生物碱; 超氧化物歧化酶; 丙二醛; 毒性机制
       Abstract：ObjectiveTo observe the effects of diester-diterpenoid alkaloids and monester-diterpenoid alkaloids on myocardial SOD activity and MDA content in congestive heart failure rats. MethodsThe rat model of chronic heart failure was established by Abdominal Aortic Coarctation, and after eight weeks, the cardiac function indices, including heart rate(HR)， left ventricular end-diastolic pressure(LVEDP)，left ventricular systolic pressure(LVSP)，the maximal/ minimal derivative of left ventricular pressure(±dp/dtmax)were analyzed with BioPac System. After the model of heart failure succeeded, the rats were intragastric administered alkaloids for two weeks and the activity of SOD and the content of MDA in myocardial tissue were measured. ResultsThe activity of SOD in model group were significantly lower than that of sham-operated group(P<0.05)，the content of MDA in model group was significantly higher than that of sham-operation group(P<0.05), aconitum alkaloids could significantly reduce the activity of SOD in myocardial homogenate, the content of MDA.Conclusion The effects of aconitum alkaloids on cardiac toxicity is related to the oxidative damage of myocardium .
       Key words：Aconitum alkaloids; SOD; MDA; Toxic mechanism
       乌头类生物碱对心脏的毒性较大，已有研究证实[1]，乌头类生物碱对心肌的毒性机制可能是抑制心肌三羧酸循环和呼吸链的氧化磷酸化作用。本文旨在通过观察大鼠心功能及心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量变化情况，探讨乌头类生物碱对心衰大鼠心肌的毒性机制。
       1 材料与仪器
       1.1 动物 SD大鼠120只，雌雄各半，体质量240～260 g，吉林大学实验动物中心提供，合格证号：吉2008-0005。
       1.2 药品与试剂 生物碱(长春应用化学研究所提供);SOD、MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
       1.3 仪器 GL-21B台式低温高速离心机(上海飞鸽仪器) TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司) 16道生理记录仪MP—150系统(美国Biopac公司)。
       2 方法
       2.1 造模与取材 参照文献[2，3]，采用腹主动脉缩窄法制作慢性心衰大鼠模型。大鼠用1%戊巴比妥钠溶液0.35 ml/100 g腹腔注射麻醉后，绑于鼠台上，用碘酒擦拭待剪开的皮肤，在剑突下腹正中开2～3 cm口，分层打开腹腔，将脏器挤压在大鼠的右侧以便找寻腹主动脉，在肾动脉分支以上钝性游离腹主动脉，穿过4号手术线并系一活扣，将7号注射器针头平行置于腹主动脉上，用4号手术丝线将腹主动脉和注射器一同结扎，松紧适中，然后缓慢将注射器撤出，给青霉素1支(8万单位)，关腹，分层缝合。使大鼠腹主动脉直径缩窄为0.7 mm。假手术组开腹后将手术丝线穿过腹主动脉，除不缩窄腹主动脉以外，其他操作与手术组完全相同。正常喂养8周，检测血液动力学指标，以确定慢性心衰模型是否成功。将成模大鼠随机分成3组：双酯型生物碱组、单酯型生物碱组、模型组，每组10只。给各组生物碱药物，给药剂量按1/10 LD50计算，连续给药14 d，末次给药12 h后，取部分心肌组织制成10%匀浆测定组织中SOD活性和MDA含量。
       2.2 检测指标
       2.2.1 血流动力学检测 参照文献[4]略有改进，20%乌拉坦0.6 ml/100 g腹腔注射麻醉，将动物固定在手术台上，仰卧位固定四肢，于颈部腹侧偏右纵向切开皮肤在胸锁乳突肌内侧分离右颈总动脉1.5 cm，动脉夹夹住近心端经颈动脉朝远心端方向注入肝素钠生理盐水，结扎远心端然后再经颈动脉插入已准备好的充满肝素的左室导管，松紧度应以切口处不漏血，导管又能自由进出为度。左手用镊子夹住颈总动脉及导管，右手将导管插入左室腔，感到导管随心脏搏动而明显抖动时，则应减慢插进速度(这时通常已插入4 cm左右)。另一端连接16导换能器，同步测量血流动力学指标：左室内压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室最大上升/下降速率(±dp/dtmax)四肢皮下埋入针式电极观察Ⅱ导联心电图及心率(HR)。插管手术完成后，稳定15 min，分别于15，20，25 min时各测定血流动力学指标1次，取3次测定结果的平均值作为实验值。
       2.2.2 生化指标测定 按试剂盒说明书操作。
       2.3 统计学分析 数据用±s表示，采用SPSS10.0统计软件包分析。
       3 结果
       3.1 血流动力学检测结果腹主动脉结扎8周后，模型组各项指标与假手术组比较有明显差异HR、lvedp明显升高(P<0.001)，LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax明显降低(P<0.01或P<0.001)。说明模型成功。结果见表1。表1 各实验组大鼠血流动力学检测结
       3.2 乌头类生物碱对心衰大鼠心肌组织中SOD、MDA的影响大鼠心肌组织匀浆抗氧化能力检测结果表明，模型组大鼠心肌组织中SOD活性显著降低，MDA含量均显著升高。双酯型生物碱组、单酯型生物碱组均能降低SOD活性、升高MDA含量，与模型组比较有显著性差别(P<0.05)。结果见表2。表2 各给药组大鼠心肌组织SOD、MDA的含量
       4 讨论
       本实验采用腹主动脉缩窄法致压力超负荷型大鼠心衰模型，该方法直接增加心脏后负荷，与临床相关性好，是研究心衰病理改变、血流动力学改变以及心血管药理学较为理想的动物模型[5]。本研究通过血流动力学检测显示所有心衰模型均较假手术组有不同程度改变，HR、LVEDP显著升高(P<0.001)，±dp/dtmax、 LVSP显著降低(P<0.01)。
       近年来研究表明乌头类生物碱虽具有强心作用，但同时对心肌组织具有损伤作用，可能机制与体内脂质过氧化活动有关[6]。SOD是存在于生物体内的一种抗氧化酶，它能特异性清除超氧阴离子，催化超氧化自由基分解成H2O2，进而在过氧化酶的作用下分解成H2O和氧分子。MDA是过氧化脂质的分解产物，它可引起蛋白质变性和交联，使DNA损伤、酶及激素失活，损害细胞及细胞膜。大鼠心力衰竭时，心肌组织中SOD活力下降，MDA含量增高，表明氧自由基通过脂质过氧化反应参与了心力衰竭的发病过程。给予乌头类生物碱后，心肌组织中SOD活力下降明显，MDA含量增高明显说明体内氧化反应活动剧烈，生物碱的心肌毒性作用可能与体内脂质过氧化活动增强有关。由于体内脂质过氧化活动增强，很容易造成体内脂质过氧化产物自由基的堆积，产生进一步的损伤，而细胞的线粒体是最容易受到自由基攻击的。本实验研究表明乌头总生物碱能明显降低大鼠心肌匀浆中SOD的活性，同时增加氧化产物MDA的含量，提示其毒性机制与心肌氧化损伤有关。
       【参考文献】
         　　[1] 雷怀成，易建华，刘 涛.乌头碱中毒肝细胞凋亡的观察[J].卫生毒理学杂志，2004，18：199.
       
       [2] 徐叔云，卞如濂，陈 修，等.药理实验方法学，第2版[M].北京：人民卫生出版社，1989：978.
       
       [3] 汪 谦，等.现代医学实验方法，第1版[M].北京：人民卫生出版社，1998：914.
       
       [4] 张兴平，陈庆伟.生脉注射液对慢性心力衰竭大鼠血流动力学的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2007，5(11)：1086.
       
       [5] 赵英强，孙兰军，徐 强，等.慢性充血性心力衰竭大鼠动物模型的制备[J].天津中医药，2004，21(4)：318.
       
       [6] O"Connel JB,Bristow MR.Economic impact of herat failure in the United States:time for a different approach[J].Joumal of Clinical Cardiology,2000,22(3):6.