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       【摘要】 
       目的建立活血注射液中黄芪药材指纹图谱的标准。方法Beckman 高效液相色谱仪(168型二极管阵列检测器)，PRONTOSIL C18 柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);流动相为乙腈和水，梯度洗脱，检测波长265 nm，流速1 ml·min-1。结果测定了10个不同产地的黄芪样品，共获得10个共有峰，其中7号峰为芒柄花苷，并将其作为参照峰;对不同产地黄芪药材的指纹图谱相似度进行比较，均在0.90以上。结论该方法可以用于活血注射液中黄芪药材的质量控制。
       【关键词】  活血注射液; 黄芪; 指纹图谱; 质量控制
       活血注射液为天津中医药大学第一附属医院研制的中药注射液，主治急性缺血性脑血管病。为了更好的控制活血注射液质量，我们对其君药——黄芪中有效成分(黄酮类成分)进行了指纹图谱的研究。此外，通过对不同产地黄芪药材进行指纹图谱比较，以期为筛选活血注射液中黄芪主产地提供依据。
       1 仪器与试药
       Beckman 高效液相色谱仪(125型高压输液泵，168型二极管阵列检测器)。乙腈(色谱纯);重蒸馏水(自制);其它试剂均为分析纯。芒柄花苷对照品(购自克罗玛公司)。不同产地黄芪药材均来源于豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao的干燥根(黄芪药材具体产地见表1)。表1 不同产地黄芪药材
       2 方法与结果
       2.1 黄芪药材指纹图谱方法的建立[1，2]
       2.1.1 色谱条件PRONTOSIL C18柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm),流动相为(A)10%乙腈-(B)90%乙腈。梯度洗脱程序见表2。柱温:30℃,流速：1ml·min-1，进样量：20μl，检测波长：265 nm。表2 梯度洗脱条件表
       2.1.2 对照品溶液的制备精密称取芒柄花苷对照品，用适量甲醇使溶解，制成浓度为0.2 mg·ml-1的对照品溶液。
       2.1.3 供试品溶液的制备称取黄芪粗粉2.0 g，精密称定，加入甲醇50 ml，索氏提取4h,滤液回收溶剂，水浴蒸干，残渣加热水20 ml使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，30 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液提取2次，30 ml/次，弃去氨试液，将正丁醇液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液备用。
       2.1.4 样品测定精密吸取供试品溶液 20 μl,注入液相色谱仪,按“2.1.1”项中色谱条件测定，记录 70 min 色谱图。以芒柄花苷的色谱峰(s)的保留时间和峰面积为 1,计算其他各峰的相对保留时间和相对峰面积比值。
       2.2 黄芪药材指纹图谱通过10个不同产地的黄芪样品指纹图谱的比较，生成了活血注射液中黄芪药材的标准指纹图谱，共获得10个共有色谱峰。其中S(7)峰为芒柄花苷，并将其作为参照峰。10批黄芪药材指纹图谱叠加图见图1。生成的对照指纹图谱见图2。图1 10批黄芪药材指纹图谱叠加图图2 生成的黄芪药材对照指纹图谱(S：芒柄花苷)
       2.3 相似度的计算采用中国药典委员会出版的“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”(版本2004A)进行相似度计算，各产地黄芪指纹图谱与对照指纹图谱比较。结果见表3。结果表明，各批药材的相似度均在0.90以上。
       3 讨论
       本实验分别对乙腈-水、甲醇-水不同的梯度洗脱条件进行摸索，通过对色谱峰的数目和分离效果等因素进行综合考察，最后得到一个较好的梯度洗脱条件。在此条件下色谱峰数目适中，分离效果较佳。
       本实验对黄芪样品在200～400 nm的波长范围内进行波长的选择，芒柄花苷的最大吸收波长为250nm，但在该波长下其他色谱峰的含量较低，色谱峰的数目较少。通过对不同波长的选择发现，在265 nm检测时，可兼顾色谱峰数、分离度、并且避免了图谱中某一成分过高，其他成分特征不明显的情况，所以选择265 nm作为检测波长。表3 不同产地黄芪药材的相似度《中国药典》规定黄芪有两个品种，分别为豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪的干燥根。为了保证药材质量的稳定，根据前期的调研情况，我们固定了黄芪的品种，即豆科植物蒙古黄芪的干燥根。
       【参考文献】
         　[1] 胡芳弟，赵健雄，封士兰，等.黄芪的高效液相色谱指纹图谱及主成分含量测定[J].中药材，2004，27(11)：831.
       
       [2] 关延彬，李永吉，管庆霞，等.复方黄芪注射剂中黄酮部分指纹图谱的研究[J].中药材，2006，29(2)：187.