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       【摘要】 
       目的研究D101大孔吸附树脂纯化人参总皂苷的工艺条件，为人参总皂苷的工业化生产提供参考。方法以人参总皂苷的吸附率、纯化率为指标，考察D101大孔吸附树脂对人参总皂苷的吸附和洗脱条件。结果浓度为0.8 g生药/ml的红参供试品溶液最大上样体积12.5 ml，上样流速1 ml/min;用6倍柱体积的蒸馏水进行平衡、3倍柱体积 70%乙醇洗脱树脂柱，洗脱速度1 ml/min，纯化效果较好。结论D101大孔吸附树脂能有效富集并纯化人参总皂苷。
       【关键词】  大孔吸附树脂; 人参总皂苷; 纯化
       大孔吸附树脂是不含交换基团、具有大孔结构的高分子吸附剂，在水溶液中对有机物吸附力强，吸附容量大[1]。近十余年来，大孔吸附树脂逐渐被应用于中草药化学成分的提取分离和中药新药的研制开发中，既可除去大量杂质，又可使有效成分富集，尤其对皂苷类成分的富集纯化有较好的效果[2]。红参是五加科植物人参Panax ginseng C.A. Mey. 的栽培品经蒸制后的干燥根及根茎，人参皂苷是其主要有效成分。红参性味甘温，补气补血，是复方胃乃安中的主药之一。本文用D101大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷，对其整个工艺过程进行优化，为中成药“胃乃安胶囊”的二次开发研究提供科学依据。
       1 仪器与材料
       1.1 仪器BS224S电子天平(北京赛多得斯仪器系统有限公司)，HH-2型恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)，UV-2102C型紫外-可见分光光度计[尤尼柯(上海)仪器有限公司]。
       1.2 材料红参药材由广州中一药业有限公司鉴定并提供(批号080501(03)，检字号08101741)。人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所，批号为110754-200421)，D101型大孔吸附树脂(上海摩速科学器材有限公司)。
       1.3 试剂香草醛、高氯酸、冰醋酸、乙醇、α-萘酚、浓硫酸，均为分析纯。
       2 方法
       2.1 标准曲线的制备分别取人参皂苷Re标准品溶液(质量浓度为0.5 mg·ml-1)100，200，250 μl和300 μl，加入香草醛-冰醋酸、高氯酸进行显色反应，以空白溶液做参比[3]，将显色体系在450～650 nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长。　　精密吸取体积为40，80，120，160，200和240 μl的人参皂苷Re标准品溶液，显色后在选定波长处测定吸收值，制作人参总皂苷标准曲线。
       2.2 供试品溶液的制备称取一定量的红参置于圆底烧瓶中，加入6倍水冷凝回流提取2次，1.5h/次，5 000 r/min离心5 min，取上清液水浴浓缩至一定浓度，作为供试品溶液。
       2.3 大孔吸附树脂的预处理D101大孔吸附树脂用无水乙醇浸泡12 h，水洗至无醇味，湿法装柱(1.6 cm×30 cm)。树脂柱体积32 ml，树脂湿重32.57 g，备用。
       2.4 纯化工艺的优化[2～6]
       2.4.1 泄漏曲线的考察取浓度为0.2 g生药/ml的红参供试品溶液100 ml上柱，上样流速1 ml/min，流出液10 ml/份，共收集10份，测定上柱液和流出液人参总皂苷含量，考察泄漏曲线，确定样品液的最大上样体积。
       2.4.2 吸附速度的考察根据泄漏曲线，取0.2 g生药/ml药液的最大上样体积上柱，吸附流速分别为1，2，4 ml/min，收集流出液，测定人参总皂苷的含量，计算吸附率，确定吸附流速。
       2.4.3 上样浓度的考察取药液上柱，浓度分别为0.2，0.4，0.6，0.8 g生药/ml，均为最大上样体积，收集流出液，测定人参总皂苷的含量，确定上样浓度。
       2.4.4 水平衡倍量考察取0.2 g生药/ml药液上柱，流速1 ml/min，用蒸馏水平衡，流出液每1个柱体积收集1管，取样进行Molish反应，观察液体颜色。
       2.4.5 洗脱溶剂浓度的考察取0.2 g生药/ml药液上柱，蒸馏水平衡树脂，依次用30%，50%，70%和90%乙醇洗脱，分别收集洗脱液，测定人参总皂苷含量，确定洗脱剂浓度。
       2.4.6 洗脱溶剂用量的考察取0.8 g生药/ml药液上柱，先蒸馏水平衡至流出液近无色，再用6倍柱体积的70%乙醇洗脱，每半个柱体积收集1管。测定各管中人参总皂苷含量，确定洗脱剂的用量。
       2.4.7 乙醇洗脱流速考察取0.8 g生药/ml药液上柱，乙醇洗脱流速分别为1,2,4 ml/min，收集醇洗脱液，测定人参总皂苷纯化率，确定洗脱流速。
       3 结果
       3.1 标准曲线的制备显色后扫描结果表明，不同含量的标准品溶液在563 nm处均显示最大吸收，且空白无干扰，选563 nm为测定波长。回归方程为Y=6.005 7X-0.023 4，R2=0.999 6，表明人参皂苷Re在20～120 μg范围内呈良好线性关系。
       3.2 泄漏曲线的考察从测定结果和泄漏曲线(图1)可知，上样药液为50 ml时，泄漏曲线进入平台期，说明D101型大孔吸附树脂对人参总皂苷的吸附量逐渐趋向饱和，此时人参总皂苷开始明显泄漏，故0.2 g生药/ml药液的最大上样量为50 ml。
       3.3 吸附速度的考察吸附速度考察结果如表1。当吸附流速为1 ml/min时，D101型大孔吸附树脂对人参总皂苷的吸附率最大，为 87.45%，所以本实验确定最佳吸附流速为1 ml/min。
       3.4 上样浓度的考察结果表明，当红参供试品溶液的浓度为0.8 g生药/ml时，D101型大孔吸附树脂对人参总皂苷吸附率最大，达 96.94%，故最佳上样浓度为0.8 g生药/ml。结果见表2。
       3.5 水洗脱倍量考察蒸馏水平衡至6倍柱体积时，流出液变澄清，且Molish反应呈阴性，如图2所示，说明糖醛类物质已被冲洗干净，所以选择用6倍蒸馏水平衡树脂柱。图1 泄漏曲线表1 吸附速度考察表2 上样浓度考察
       3.6 洗脱溶剂浓度的考察洗脱溶剂浓度考察的结果表明，50%和 70%乙醇洗脱出大部分人参总皂苷，30%，50%，70%乙醇洗脱下来的人参总皂苷总量占所有洗脱下来的总皂苷的97.64%，故选用乙醇浓度为70%。结果见表3。图2 水洗液Molish反应表3 洗脱剂浓度考察
       3.7 洗脱溶剂用量的考察实验结果如图3，洗脱曲线显示，人参总皂苷主要集中在前面6管，占全部醇洗脱液中总皂苷的 97.08% ,所以选用3倍柱体积 70%乙醇进行洗脱。图3 洗脱剂用量考察
       3.8 乙醇洗脱流速考察乙醇洗脱速度越小，人参总皂苷的纯化率越高，洗脱流速为1 ml/min时纯化率为68.11%，高于其他流速的纯化率，选用1 ml/min的洗脱速度。结果见表4。表4 乙醇洗脱流速考察
       4 讨论
       本文较系统地考察了D101型大孔吸附树脂分离纯化红参人参总皂苷的工艺条件和参数，得到的最佳纯化工艺为：浓度0.8 g生药/ml的红参供试品溶液最大上样体积12.5 ml，上样流速1 ml/min，人参皂苷的吸附率可以达到96%;用6倍柱体积的蒸馏水平衡树脂，再用70%乙醇洗脱3倍柱体积，洗脱速度为1 ml/min，纯化率在 68%以上。由实验结果可知，D101型大孔吸附树脂富集和纯化人参总皂苷的容量大、效果好，且工艺简便，生产连续化程度高，适宜于工业化生产人参总皂苷的分离纯化。
       【参考文献】
         　　[1] 陈业高.植物化学成分[M].北京:化学工业出版社，2004:84.
       
       [2] 岳 敏.大孔吸附树脂在富集分离中药有效部位工艺中的应用[D].北京：首都师范大学硕士学位论文，2004:1，15，47.
       
       [3] 李义志，毛春芹，陆兔林，等.不同产地红参中总皂苷及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量比较[J].中国实用医药，2008，3(28):1.
       
       [4] 蔡 雄，刘中秋，王培训，等.大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷工艺[J].中成药，2001，23(9):631.
       
       [5] 张崇喜，郑友兰，张春红，等.大孔树脂吸附人参总皂苷工艺及再生使用的研究[J].中国药学杂志，2003，38(9):661.
       
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