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       【摘要】 
       目的对抗眩晕方药半仿生提取法(简称SBE法)和水提取法(简称WE法)两种方法的提取液进行比较。方法以泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸以及大黄素与大黄酚之和、总生物碱、干浸膏含量为指标，利用高效液相色谱法、紫外分光光度法测定其含量。结果SBE液各指标成分含量均高于WE液，二者反相液相色谱图，SBE液多数共有峰的峰面积积分值均高于WE液。结论抗眩晕方药两种提取液中，以SBE法明显优于WE法。
       【关键词】  抗眩晕; 半仿生提取法; 水提取法
       抗眩晕方药为我院治疗梅尼埃氏病的特色制剂，根据半仿生提取理论，在优选其最优提取条件的基础上，以泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸等为指标，对半仿生提取法与水提取法两种提取液进行了成分比较研究。
       1 仪器与药品
       LC-10A型高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器， AUTO SCIENCE AT-330 柱温箱，AGT C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);岛津UV-160A紫外分光光度仪;RE-52型旋转蒸发仪(天津第一玻璃厂);KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂);PHS-3C型酸度计(浙江箫山科学仪器厂);试剂均为色谱纯，水为娃哈哈饮用纯净水。泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪、阿魏酸、大黄酚、大黄素、盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定所)。泽泻、白术、川芎、益母草、钩藤、决明子药材均购自天津市中药饮片厂。
       2 方法与结果
       2.1 供试液的制备
       2.1.1 水提取液按处方比例称取泽泻12.30 g，白术6.16 g，川芎10.26 g，益母草10.26 g，决明子6.16 g，置圆底烧瓶内，按常规水提取法用1 000 W电热套加热回流提取3次(加水量分别为10，8，6倍，煎煮时间分别为2.0，1.5，1.5h)，提取液用4层纱布过滤，60℃减压蒸至1∶1，以水定容至110 ml，得WE液。
       2.1.2 半仿生提取液按照“2.1.1”项下方法，用10%HCl调第一煎pH值为2.0，用10%NaOH分别调第二煎、第三煎pH值为7.5，8.5，依法制得SBE液。
       2.2 泽泻醇B乙酸酯的含量测定[1，2]
       2.2.1 色谱条件色谱柱为AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为乙腈水(85∶15);检测波长：208 nm;流速1.0 ml·min-1;柱温25℃;进样量20 μl。
       2.2.2 对照品溶液的制备精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品0.70 mg，用甲醇溶解并稀释至10 ml，即得70 μg·ml-1的对照品溶液。
       2.2.3 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各5.4 ml于25 ml容量瓶中，加15 ml甲醇超声30 min，以甲醇定容至25 ml，过滤，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
       2.2.4 样品含量测定 将供试品溶液按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，以外标法计算样品含量。结果见表1。
       2.3 川芎嗪和阿魏酸的含量测定[3，4]
       2.3.1 色谱条件色谱柱为AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇乙腈1%冰乙酸(1∶1∶5);检测波长280 nm;流速0.8ml·min-1;柱温25℃;进样量20 μl。
       2.3.2 对照品溶液的制备 分别精密称取川芎嗪对照品0.60 mg、阿魏酸对照品5.10 mg，用甲醇溶解并稀释至10 ml，即得对照品溶液的混合溶液(每毫升含川芎嗪60 μg，含阿魏酸510 μg)。表1 两种方法提取液中泽泻醇B乙酸酯含量
       2.3.3 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各5.4 ml，加25%乙醇80 ml超声30 min，取40 ml于分液漏斗中，用二氯甲烷萃取3次，每次40 ml，收集二氯甲烷液，以0.1 mol·L-1盐酸甲醇液调pH1.2，挥干，用甲醇定容至10 ml，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
       2.3.4 样品含量测定将供试品溶液按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，以外标法计算样品含量。结果见表2～3。表2 两种方法提取液中川芎嗪含量表3 两种方法提取液中阿魏酸含量
       2.4 大黄素、大黄酚之和含量测定[5，6]
       2.4.1 色谱条件色谱柱：AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相：甲醇-0.1%磷酸(85∶15);检测波长：254 nm;流速：1.0 ml·min-1;柱温：25℃;进样量20 μl。
       2.4.2 对照品溶液的配制分别精密称取大黄素对照品0.12 mg，大黄酚对照品0.26 mg，用甲醇溶解并稀释至10 ml，即得对照品溶液的混合溶液(每毫升含大黄素12 μg，含大黄酚26 μg)。
       2.4.3 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各25 ml于分液漏斗中，用氯仿萃取4次，每次30 ml，收集氯仿液，减压浓缩至干，残渣加无水乙醇醋酸乙酯(2∶1)溶解并定容至10 ml，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
       2.4.4 样品含量测定将供试品溶液按“2.4.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，以外标法计算样品含量。结果见表4。
       2.5 总生物碱的含量测定[7，8]
       2.5.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸水苏碱对照品适量，用0.1 mol·L-1盐酸溶液溶解并稀释，得到盐酸水苏碱浓度为0.216 mg·ml-1的对照品溶液。表4 两种方法提取液中大黄素和大黄酚含量之和
       2.5.2 供试品溶液的制备精密吸取“2.1”项下的提取液各30 ml旋转蒸发至干，加0.1 mol·L-1盐酸溶液10 ml使溶解，离心，抽滤，分2次(共10 ml)洗涤离心的残渣，再离心并抽滤，合并两次滤液用0.1 mol·L-1盐酸溶液定容至25 ml，精密吸取10 ml于烧杯中，加活性炭0.5 g于沸水浴中加热0.5 min，边加热边搅拌，滤至25 ml容量瓶中，加2%新配制的雷氏盐2 ml ，再用0.1 mol·L-1盐酸溶液定容至25 ml，在冰水浴中放置1 h，过滤，取续滤液进行测定。取对照品溶液10 ml，同上提取作为对照品溶液;以0.1 mol·L-1盐酸溶液10 ml同上提取作空白溶液。
       2.5.3 样品含量测定将上述样品溶液、对照品溶液、空白溶液利用紫外分光光度法在525 nm波长处进行测定，总生物碱含量以盐酸水苏碱计算。结果见表5。表5 两种方法提取液中总生物碱含量
       2.6 干浸膏的含量测定[9]按照《中国药典》Ⅰ部附录X.A浸出物测定法，取“2.1”项下的提取液各5.4 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘干3 h，移至干燥器中，冷却30 min，即刻精密称重，计算干浸膏的含量。结果见表6。表6 两种方法提取液中干浸膏含量
       2.7 WE液与SBE液的多成分反相液相色谱精密吸取“2.1”项下的提取液各5 ml，加醋酸乙酯萃取3次，每次20 ml，合并醋酸乙酯液，挥干，残渣加甲醇定容至10 ml，微孔滤膜滤过后进样20 μl，进行色谱分析。采用AGT C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为A：甲醇，B：0.1%甲酸水溶液;梯度洗脱条件：B：80%～35%(0～110 min)，35%(110～130 min);检测波长为280 nm;流速0.8 ml·min-1;柱温25℃;进样量20 μl。两种提取液色谱图见图1，各吸收峰面积积分值见表7。　　表7 两种方法提取液色谱图中吸收峰面积积分值图1 两种提取液色谱图
       3 讨论
       以泽泻醇B乙酸酯、川芎嗪和阿魏酸及大黄素大黄酚之和、总生物碱、干浸膏含量为指标，对抗眩晕方药两种提取液成分进行比较，结果，SBE法明显优于WE法。抗眩晕方药SBE法与WE法多成分反相液相色谱图表明，SBE液检出15个吸收峰，而WE液只检出9个吸收峰，SBE液色谱图中除7号峰面积积分值低于WE液外，其它峰面积积分值均高于WE液。
       本文及多种制剂研究报道提示[10，11]，SBE法具有许多的优越性，在中药方药的提取过程中，有着广阔的应用前景。
       【参考文献】
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       [6] 余建清，雷嘉川，马俊玲，等.不同炮制方法对决明子中蒽醌类成分的影响[J].中医药学报，2000，28(6):35.
       
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