文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的探讨柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。方法血小板悬液与柚皮素孵育5 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用1 min，用NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜观测血小板聚集情况。结果柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集有抑制作用，当柚皮素的浓度分别为80，160，320和640 μmol/L时，对血小板聚集的抑制作用随浓度的加大而增强。结论柚皮素具有抗血小板聚集的作用，而且作用的强度与柚皮素浓度正相关。
       【关键词】  柚皮素; 血小板聚集; 凝血酶
       柚皮素(naringenin，NGEN)，是一种从柑橘类水果、普洱茶籽、长白瑞香等植物中提取的天然苦味化合物[1]。近年来，对柚皮素的研究日益增多，发现其具有多种药理活性[2]。而柚皮素是否对血小板聚集也起作用，我们采用体外血小板聚集法，利用凝血酶为诱导剂，用荧光倒置显微镜观察柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响。现将结果报道如下。
       1 材料与仪器
       1.1 动物大白兔4只，♂♀兼用，体质量(2.0±0.2)kg，由广东医学院动物中心提供。
       1.2 药品和试剂柚皮素、凝血酶、N-2-羟乙基哌嗪-N"-2-乙磺酸(Hepes)购自Sigma公司。其余为国产分析纯或生化纯试剂。
       1.3 仪器NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜，德国。
       2 方法
       参照文献[3]：兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol/L 柠檬酸钠，111 mmol/L葡萄糖，53 mmol/L 柠檬酸) 0.15体积比抗凝，800r/min离心10 min，离心2次，取上清，3 000 r/min离心15 min。沉淀中加Tyrode-Hepes缓冲液(140 mmol/L 氯化钠， 5 mmol/L 氯化钾，1 mmol/L氯化镁， 10 mmol/L N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸，10mmol/L 葡萄糖，pH 7.4)调节至血小板数为3×1011～4×1011/L。血小板聚集用NIKON TE2000-E荧光倒置显微镜来观测。血小板悬液(0.2 ml)与药物孵育 5 min，然后用凝血酶(500 U/L)作用1 min，观测聚集情况。
       3 结果
       显微镜下空白对照观测到血小板松散(见图1)， 凝血酶(500 U/L)诱导的血小板聚集，显微镜下观测到聚集粘连成一片(见图2)，用柚皮素作用后，随着药物浓度的增加，血小板没有聚集集合粘连(见图3～6)。
       4 讨论
       生物体在正常状态下，凝血与抗凝血是一个动态平衡过程，在这个动态平衡过程中，血小板的活性大小及数量起着重要作用[4]。研究表明，血小板的黏附，聚集在血栓形成过程中具有重要作用，是引起血栓形成的主要原因[5]。被激活的血小板具有与细胞黏附性蛋白结合的活性，在其存在下，可形成牢固的黏附和聚集块，导致血栓形成[6]。因此，抑制血小板聚集的异常发生，改变血液循环状态，可以抑制血栓的形成和促进血栓的溶解，对血栓性心脑血管疾病的防治有重要意义也是有效防治缺血性心脏病的手段之一。为了寻找抑制血小板聚集的药物，国内许多学者开展中药特别是活血化淤药物对血小板聚集影响的研究。
       研究血小板聚集情况的方法，通常是采用血小板聚集仪来检测的，然后通过计算其聚集率来观察血小板聚集情况，而本实验采用荧光倒置显微镜直接观察柚皮素对凝血酶诱导的兔血小板聚集的影响，结果明了，方法新颖。图1 空白对照 图2 凝血酶(500 U/L)诱导的兔血小板聚集图3 80 μmol/L 图4 160 μmol/L柚皮素对凝血酶(500 U/L) 柚皮素对凝血酶(500 U/L)　　诱导兔血小板聚集的影响 诱导兔血小板聚集的影响图5 320 μmol/L 图6 640 μmol/L柚皮素对凝血酶(500 U/L) 柚皮素对凝血酶(500 U/L)诱导兔血小板聚集的影响 诱导兔血小板聚集的影响据文献报道，柚皮素在降血脂、镇静、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌、抗动脉粥样硬化等方面具有较强的生物活性[2]，但对体外抑制血小板聚集的研究尚未见报道。本文实验结果表明，柚皮素具有抑制凝血酶诱导的血小板聚集的作用，随着柚皮素浓度的增大，对血小板聚集的抑制也增加，具有明显的抗凝血作用。柚皮素抑制抗血小板聚集的机制则有待于进一步的研究。
       【参考文献】
         　[1] 冯颖倩，左学兰，李瑞芳，等.柚皮素对阿霉素损伤的正常血细胞的保护作用[J].中国实验血液学杂志，2008，16(4):790.
       
       [2] 杨宏亮，田 衍，李沛波，等.柚皮苷及柚皮素的生物活性研究[J].中药材，2007，30(6)：752.
       
       [3] Liu W，Song ZhJ，Liang NC，et al.Inhibitory effects of sodium quercetin monosulfate on pig platelet aggregation induced by thrombin[J]. Acta Pharmacol Sin 1999，20(7):623.
       
       [4] Songa YM， Tangb XX，Chen XG， et al .Effects of scorpion venom bioactive polypolypeptides on platelet aggregation and thrombosis and plasma 6-keto-PGF1 alpha and TXB2 in rabbits and rats[J].Toxicon，2005，46(2):230.
       
       [5] 王振义，李家增，阮长耿.血栓与止血基础理论与临床，第2版[M].上海:上海科技出版社，1996：378.
       
       [6] 韩纪举，赵晓民，焦 鹏，等.白花丹参对小鼠血小板黏附功能及血液流变学的影响[J].中药材，2007，30(6)：699.