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       【摘要】 
       目的研究苦豆子总碱(total alkali Sophora alopecuroids L, TASa)舒张家兔离体肺动脉血管的作用机制。方法采用离体恒温灌流浴槽，以去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)预收缩后，给予TASa(2.5，5.0，10，20 mg/L)观察其舒张血管的量效关系;将标本分为对照组、TASa组、TASa+吲哚美辛(10-5 mol/L)、TASa+普萘洛尔(10-5 mol/L)、TASa+左旋硝基精氨酸(10-4 mol/L)和TASa+去内皮细胞6组探讨TASa舒张血管的机制;用TASa(20 mg/L)温育标本后，观察TASa对NA (10-8～10-5 mol/L)和KCl(6.3～100 mmol/L)量效收缩曲线的影响。结果TASa能舒张肺动脉血管，有量效依赖性(r=0.75， P<0.01);去内皮、左旋硝基精氨酸、吲哚美辛和普萘洛尔对TASa舒张血管的作用无明显影响;TASa能压低NA和KCl的量效收缩曲线。结论TASa可能是拮抗Ca2+通道，降低胞浆Ca2+而使血管舒张。
       【关键词】  苦豆子总碱; 肺动脉; 内皮细胞; 钙离子
       苦豆子Sophora alopecuroides L.为豆科槐属植物，味苦性寒，有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等作用[1]。苦豆子总碱(Total alkali Sophora alopecuroids L., TASa)是从豆科植物苦豆子的干燥全草和种子提取的总生物碱，主要有苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱等，其总碱具有清热解毒、祛风燥湿作用[2，3]。静脉注射氧化苦参碱、槐果碱均可使麻醉大鼠和犬产生快速、可靠的降压效果，槐胺碱对麻醉猫、兔和大鼠有降压作用，并有明显的剂量依赖关系[4]。为探讨TASa降低血压的机制，本实验采用离体恒温灌流浴槽，观察TASa对去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)预收缩血管张力的影响，并探讨其作用机制。
       1 材料与仪器
       1.1 动物清洁级健康家兔12只，体质量2.5～3.0 kg，雌雄不拘，由兰州生物制品研究所提供，合格证号医动字第14-004号。
       1.2 药物与试剂TASa购于兰州大学第一附属医院，批号：甘卫药灭制准字(97)022-02，苦豆子总碱≥95%。用生理盐水配制成5，10，20 g/L备用，用NaHCO3配制pH 7.4;乙酰胆碱acetylcholine (Ach)和普萘洛尔propranolol (Prop,均为北京第二制药厂产品);左旋硝基精氨酸Nω-nitro-L-arginine (L-NNA)和吲哚美辛indomethacin (Indo,均为Sigma公司产品);去甲肾上腺素noradrenaline(NA，上海禾丰制药有限公司);Krebs-Henseleit (K-H)液的成分等其他试剂均为化学分析纯。
       1.3 仪器六套离体恒温灌流肌槽(兰州大学化学系玻璃仪器厂研制);IBM电脑两台，内置Biolap410(BL-410)智能型生物信号处理系统(成都泰盟电子有限公司研制);张力传感器(JH-2，中国北京航天医学工程研究所)。
       2 方法
       2.1 标本制备猛击家兔头部致昏后，迅速取出肺动脉，放置于盛有K-H液的培养皿中，并持续通入95%O2和5%CO2混合气体，剔去周围结缔组织后制成长2.5～3.0 mm肺动脉环[5]，置于37 ℃恒温的灌流浴槽中，持续通入95%O2和5%CO2混合气体，经张力换能器将肺动脉环的张力变化输入配有BL-410系统的电脑进行记录和处理，给予2 g的前负荷。每20 min更换一次K-H液(37 ℃)，温育平衡1.5～2.0 h，待肺动脉环稳定后加入NA(10-6 mol/L)检验血管环的反应性，收缩良好的用于实验。
       检验血管内皮的完整性时，待肺动脉环稳定后加入NA(10-6 mol/L)使血管环收缩达最大坪值，再加入Ach(10-5 mol/L)，若其舒张率大于30%，认为是内皮完整的[6]。在观察去除内皮的血管环时，用棉签在肺动脉环内壁轻轻地来回滚动，可去除内皮细胞，用Ach(10-5 mol/L)检验其舒张率小于10%，认为是去内皮细胞(Denuded endothelium, Denude) [6]。
       2.2 分组及处理
       2.2.1 TASa对NA预收缩血管张力的影响记录静息肺动脉血管环张力后，用KCl(60 mmol/L)刺激达坪值，然后用K-H液冲洗，重复3次。待重新稳定后，分别加入NA(10-6 mol/L)使肺动脉环收缩达坪值(以此为100%效应)后开始实验。对照组加入等量生理盐水;TASa组是累积加入TASa(2.5，5.0，10，20 mg/L);TASa+吲哚美辛，TASa+普萘洛尔，TASa+左旋硝基精氨酸，TASa+去内皮细胞4组先分别加入Indo(10-5 mol/L)，Prop(10-5 mol/L)，L-NNA(10-4 mol/L)温育标本15 min和去血管内皮细胞(Denude)后，加入NA(10-6 mol/L)使血管环收缩达坪值，累积加入TASa(2.5，5.0，10，20 mg/L)测各组的血管张力并计算舒张(%)。
       2.2.2 TASa对NA和KCl量效曲线的影响肺动脉环在去除内皮细胞的情况下，向浴槽分别累积加入NA (10-8～10-5mol/L)或KCl(6.3～100 mmol/L)后，测其收缩张力(g)，此为对照组;冲洗后加入TASa(20 mg/L)温育15 min后，再做NA和KCl 的量效曲线，方法同对照组。
       2.3 观测指标血管舒张率(%)=(正常效应值-药物效应值)/正常效应值;血管收缩张力(g)=效应值-前负荷值;亲和力指数即pD2[7]=-logKD=log(1/KD)。
       2.4 统计学分析所有数据均以±s表示，采用SPSS.11.0软件进行方差分析或t检验，以P<0.05为有统计学意义。
       3 结果
       3.1 TASa对NA预收缩肺动脉环的影响TASa可显著舒张内皮完好的肺动脉环，并有剂量依赖关系(r=0.75，P<0.01);用L-NNA，Indo，Prop温育或去内皮后，对TASa舒张血管作用无明显影响(表1)。
       3.2 TASa对NA和KCl 量效曲线的影响TASa能明显抑制NA和KCl 对血管环的收缩作用，且亲和力指数(pD2)分别由温育前的(7.13±1.56)和(1.30±0.54)降为温育后的(6.07±1.78)和(1.12±0.95)。见图1。表1 阻断剂对TASa舒张血管作用的影响图1 TASa对NA和KCl量效曲线的影响
       4 讨论
       血管内皮细胞释放的NO迅速进入血管平滑肌细胞内，通过可溶性鸟苷酸环化酶受体(soluble guanylyl cyclase receptor)激活血管平滑肌内的鸟苷酸环化酶，使cGMP浓度升高，导致肌质网Ca2+调蛋白和三磷酸肌醇受体磷酸化，抑制肌质网内Ca2+的释放，降低胞内Ca2+，引起血管扩张[8，9]。本实验用NOS抑制剂L-NNA或去除内皮细胞后，对TASa舒张血管作用无明显影响，提示TASa舒张血管作用与内皮细胞释放的NO无关。但周颖等[4]研究表明复方苦豆子能够降低高血压大鼠的血压，与血清NO合成与释放有关。与本实验的结果有所不同，可能是复方苦豆子的成分复杂和作用途径及选用的实验对象不同所致，还有待于进一步的研究。
       前列环素(Prostacyclin)简称PGI2，是内皮细胞合成的另一种舒血管物质。PGI2活化平滑肌细胞膜的腺苷酸环化酶，促进ATP分解，于是细胞内cAMP含量升高，肌质网摄取的Ca2+增加，胞内Ca2+减少，抑制肌球蛋白的磷酸化，致使平滑肌舒张。血管平滑肌细胞的β肾上腺素能受体(β-AR)也参与血管舒张。其主要是通过升高胞内cAMP含量，关闭L型钙通道，使Ca2+内流减少，降低胞内Ca2+而舒张平滑肌[10]。本实验用前列环素抑制酶吲哚美辛和β肾上腺素能受体阻断剂普萘洛尔温育后，对TASa舒张血管作用无明显影响，说明TASa舒张血管效应与前列腺素的释放和β-肾上腺素能受体无关。
       细胞外K+浓度升高，使钾通道受到抑制[11]，引起细胞膜去极化，从而使PDC开放，细胞外Ca2+内流，Ca2+使肌球蛋白轻链磷酸化，粗、细肌丝发生相对滑动，导致血管收缩。本实验通过TASa温育无内皮的血管环后，能压低KCl 和NA量效曲线，说明TASa能非竞争性的拮抗PDC，减少Ca2+的内流导致血管舒张。但周颖等[4]实验提示复方苦豆子对心脏的防治作用也可能与钙拮抗有关，但苦豆子拮抗心肌钙通道和血管平滑肌的是否为同一种钙通道，还有待于进一步的研究。
       本实验结果表明TASa舒张血管的作用可能是通过拮抗平滑细胞膜的Ca2+通道，从而降低细胞内的Ca2+而导致血管舒张;而与内皮细胞释放的NO和前列腺素以及β-肾上腺素能受体无关。
       【参考文献】
         [1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科技出版社,2001:1293.
       
       [2] 牟新利，王武宝，巴 杭，等.中药苦豆子化学成分及生理活性的研究进展[J].新疆师范大学学报(自然科学版)，2005，1:45.
       
       [3] 张琳娜，白 洁.苦豆子药理作用的研究进展[J].宁夏医学院学报， 2004，3:214.
       
       [4] 周 颖，陈 虹，闫明俞.复方苦豆子对肾性高血压大鼠心室肌钙含量及血浆AngⅡ的影响[J].中国新药杂志，2007，12:937.
       
       [5] 张团笑，牛彩琴，胡建民，等.原花青素舒张家兔主动脉和降低动脉血压的研究[J].中国中药杂志，2008，33(14):1720.
       
       [6] 岳剑红，汤军，张宏.异丙酚对大鼠离体主动脉的舒张作用[J].解放军医学杂志2001，26(7):519.
       
       [7] 徐端正，赵定义.药理-受体参数pD2、pA2、pD"2估计[J].上海第一医学院学报，1985，12(5):342.
       
       [8] Qi Y M，Yang D J，Duan X.Endomorphins inhibit contractile responses of rat thoracic aorta rings induced by phenylephrine and angiotensinⅡ in vitro[J]. J Acta Pharmacol Sin，2002，23 (1): 40.
       
       [9] Shan L M， Wang H.Pharmacological characteristics of the endothelial target for acetylcholine induced vascular relaxation[J].Life Sci，2002，11:1285.
       
       [10] 刘正湘.实用心血管受体学[M].北京:科学出版社，2001:126.
       
       [11] 姜雨鸽，汪 海.血管平滑肌钾通道及其调节因素[J].中国药理学通报，2002，5:494.