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       【摘要】 
       目的研究羊耳蒜所含化学成分，为开发新药建立理论基础。方法采用气相色谱一质谱联用(GC—MS)法对国际濒危植物羊耳蒜超声波提取法所得乙醚提取物进行分析。结果羊耳蒜提取物共检测出22个峰中现已鉴定出15个化合物，主要是生物碱、脂肪酸及小分子的酚性物质。结论羊耳蒜种含有有效成分生物碱具有开发研究价值。
       【关键词】  濒危植物; 羊耳蒜; 气相色谱-质谱联用; 超声波提取法
       羊耳兰属，兰科，约250种，广泛分布于全球热带与亚热带地区，少数种类也见于北温带，我国有45种，约有19种产于台湾，其余以西南为最多。由于生态的破坏和过度的采掘，其在全球现已处于濒危阶段，已被国际贸易公约规定的保护野生兰科植物的一种。羊耳蒜，兰科羊耳兰属植物羊耳蒜Liparis japonica(Miq.) Maxim.，以带根全草入药，夏秋采收，洗净晒干。在土家医药学中全草有活血调经、止血、止痛、强心、镇静的功效[1]，能治疗崩漏，白带，产后腹痛等病症，并用于外伤急救。目前国内外还未见对羊耳蒜的化学成分研究相关报道[2]，为此本课题组对羊耳蒜的中药化学成分进行的研究。本实验用超声细胞粉碎机进行提取，用气相色谱-质谱联用分析其中化学成分，用NIST谱图库检索鉴定化合物。用峰面积归一化法计算各峰的相对含量。
       1 材料与仪器
       1.1 仪器采用美国Agilent GC6890N/MS5975i气相色谱-质谱-计算机(GC-MS-DS)。;AW 120型电子分析天平(新疆嘉颖科技有限公司，精度0.1 mg);JY96-II超声细胞粉碎机(宁波新芝生科技股份有限公司);旋转蒸发器RE-52(上海亚荣生化仪器厂);飞鹤离心机Anke TGL-16G等。
       1.2 材料羊耳蒜(采于湖北咸丰县坪坝营，湖北民族学院医学院刘杰书鉴定，为羊耳蒜);乙醚、无水硫酸钠等试剂均为优级纯。
       2 方法
       2.1 色谱条件色谱柱为HP-5MS弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);升温程序：从60℃开始，保温2 min，以5℃·min-1升温到160℃，保温1·min-1，再以10℃·min-1升温到240℃，保温2 min。汽化室温度260℃;载气：高纯氦气;载气流量10 ml·min-1;分流比20∶1，进样量0.1 μl。
       2.2 质谱条件质谱的电离方式为EI，灯丝电流0.6 mA;电子能量70 eV，倍增器电压1 023 V，离子源200℃，扫描周期0.5 s，溶剂延迟3.0 min，扫描范围50～550 amu。
       2.3 供试品制备将羊耳蒜干全草在60℃ 烘箱烘至衡重后用粉碎机粉碎120目，精密称取干粉末2 g置50 ml烧杯中，加20 ml乙醚，置于超声细胞粉碎机500 W处提取15 min提取液，用离心机离心除杂，离心液用旋转蒸发器回收乙醇，得浸膏，加入石油醚除色素并将沉淀物用乙醚溶解，乙醚液检测成分，转移至5 ml量瓶中，加乙醚至刻度，摇匀，即得。
       2.4 样品测定精确吸取供试品溶液1 ，注入气相色谱仪中，对羊耳蒜进行GC-MS分析，得到羊耳蒜的GC-MS总离子流图，见图1。启动P6890MS化学工作站，利用NIST05- Wiley275质谱库对各色谱峰进行检索，根据质谱数据、相对保留时间和有关参考文献，确认其中各化学成分。通过Shimadzu GC-MS solution数据处理系统，按照峰面积归一法进行定量分析，得出羊耳蒜中各化学成分的相对质量分数。
       3 结果
       供试品溶液经GC-MS联用仪分析鉴定，在确定各对照组分质谱数据和扫描峰号后，用NIST谱库进行检索，并核对标准质谱图及有关资料，从中分离、鉴定出15个化合物。结果见表1及图1。表1 羊耳蒜乙醚提取物化学成分及相对百分含量
       4 讨论
       羊耳蒜是土家族医药特色药物之一，其临床疗效在长期医疗实践中，效果显著，从乙醚提取液共检测出22个峰中现已鉴定出15个化合物，还有7个未鉴定出来并且其提取液挥干加氨水液溶解用酸调pH至酸性加雷氏盐均产生红色沉淀，羊耳酸含有季胺性生物碱[3]，本实验现已对羊耳蒜进行驯化成功,在对其进行组织培养过程中，为拯救濒危植物、储备物种资源作进一步的科学研究起到积极作用，将为以后开发新药提供理论依据及资源。
       【参考文献】
         　[1] 方志先，赵 晖，赵敬华.土家族药物志，下册[M].北京：中国医药科技出版社，2006： 796.
       
       [2] 宋立人.中华本草，8卷[M].上海:上海科学技术出版社, 1999： 736.
       
       [3] 肖崇厚.中药化学[M].上海:上海科学技术出版社,2007：92.