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       【摘要】 
       目的对三七种子的脂溶性部位进行化学成分研究。方法采用硅胶柱进行分离纯化，经理化性质和波谱数据分析鉴定化学结构。结果分离得到8个化合物，分别鉴定为羽扇豆-20-烯-3β,16β-二醇-3-阿魏酸酯(Ⅰ)、三棕榈酸甘油酯(Ⅱ)、人参炔醇(Ⅲ)、β-谷甾醇(Ⅳ)、胡萝卜苷(Ⅴ)、羽扇豆醇(Ⅵ)、16β-羟基羽扇豆醇(Ⅶ)、人参皂苷Rh4(Ⅷ)。结论化合物Ⅰ为首次从天然产物中获得，化合物Ⅱ为首次从该种植物中分离得到。
       【关键词】  三七; 种子; 脂溶性成分
       Studies on the Lipophilic Constituents of Seeds of Panax Notoginseng
       SONG Jianping1,CUI Xiuming2*,ZENG Jiang2,CHEN Jijun3,ZHANG Xuemei3,MA Yunbao3
       (1. Wenshan Normal College, Wenshan, Yunnan 663000, China; 2. Wenshan Academy for Panax Notoginseng, Wenshan, Yunman 663000, China; 3. Kunming Plant Institute, China Academy for Sciences, Kunming, Yunan 650204, China)
       Abstract：Objective To study the chemical constituents of seeds of Panax notoginseng. MethodsIsolation and purification were carried out on repeated silica gel column chromatography. The structures of the compounds were identified by physicochemical properties and spectral analysis. ResultsEight compounds were isolated and identified as Lup-2-ene-3β,16β-diol-3-ferulate (Ⅰ), hexadecanoic acid glycerin ester(Ⅱ), panaxynol(Ⅲ)， β-sitosterol(Ⅳ)，daucosterol(Ⅴ), Lupeol(Ⅵ), 16β-Hydroxylupeol(Ⅶ)，Ginsenoside Rh4(Ⅷ). ConclusionCompound Ⅰ was obtained from natural products for the first time. Compound Ⅱ was isolated from this plant for the first time.
       Key words： Seeds of Panax notoginseng; Seeds; Lipophilic constituents
       三七Panax notoginseng (Burk.)F.H.Chen为五加科人参属植物，主要分布于我国的云南、广西，是我国特有的名贵中药材，具有化淤止血、活血定痛之功效。传统主要应用于人体内外各种出血之症及跌打损伤、瘀滞肿痛。三七的化学成分与药理研究已经比较深入，研究表明三七含皂苷、黄酮、三七素等活性物质。药理研究表明对防治心脑血管疾病有显著作用，还具有降血脂、降血糖、降血压、抗炎症、抗疲劳、耐缺氧、抗衰老和提高机体免疫力等活性(崔秀明.中药三七的道地性研究.中国药科大学2005博士论文)。目前对三七的根、茎、叶的研究已有大量报道，三七种子的化学成分研究报道较少且不深入。本文从产自云南文山的三七种子中分离得到8种化合物，分别鉴定为羽扇豆-20-烯-3β,16β-二醇-3-阿魏酸酯(Ⅰ)、三棕榈酸甘油酯(Ⅱ)、人参炔醇(Ⅲ)、β-谷甾醇(Ⅳ)、胡萝卜苷(Ⅴ)、羽扇豆醇(Ⅵ)、16β-羟基羽扇豆醇(Ⅶ)、人参皂苷Rh4(Ⅷ)。其中化合物Ⅰ为首次从天然产物中获得，化合物Ⅱ为首次从该种植物中分离得到。
       1 仪器与材料
       三七种子由文山州三七研究院药物研究所提供。熔点用XRC-I型显微熔点仪测定(温度计未校正);旋光用JASCO-20旋光仪测定;质谱用VG Auto Spec-3000型质谱仪测定;NMR用Bruker AV-400超导核磁共振仪测定，C5D5N为溶剂，TMS内标。青岛海洋化工厂生产的硅胶;TLC用青岛化工厂生产的硅胶G预制薄板。展开剂：①氯仿∶甲醇 (10∶0～8.5∶1.5);②石油醚∶丙酮(7∶3 ～ 9∶1);③石油醚∶醋酸乙酯(7∶3 ～ 9∶1)。显色剂：10%的H2SO4-EtOH溶液。
       2 方法与结果
       2.1 提取与分离采自文山的三七种子24.5 kg，用70%的乙醇回流提取，回收溶剂得乙醇提取物7.8 kg。乙醇提取物用少量水溶解后，用氯仿萃取3次，得氯仿提取物186 g，水层再用正丁醇萃取3次，剩余水部分挥干的3.5 kg提取物，正丁醇部分用1∶1的饱和食盐水萃取1次(水层弃去)，正丁醇部分回流蒸干得提取物520g，然后用少量水溶解通过D101大孔吸附树脂柱层析，先用水洗脱得到挥干物80 g，然后用70%EtOH洗脱得到三七总皂苷350 g，再用95%EtOH洗脱得到挥干物45 g。氯仿提取物186g经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(10∶0～9∶1)梯度洗脱得到7个流分，各流分分别反复经正相硅胶柱层析,反相柱层析(Rp-8, Rp-18, MCI CHP-20P), 葡聚糖柱层析(sephadex LH-20)，目前得到8个化合物。化合物Ⅰ(200 mg),Ⅱ(10 mg), Ⅲ(20 mg), Ⅳ(5.0 g) , Ⅴ(50 mg), Ⅵ(100 mg),Ⅶ(150 mg), Ⅸ(1 g)。
       2.2 结构鉴定
       2.2.1 化合物Ⅰ白色粉末 m.p. 101～104℃，[α]14.6 D =+24.59°(c=0. 67 , CHCl3)。UVCHCl3 max(logε=4.18) 320，295，240。 IR (νKBrmax, cm-1): 3 449, 1 668, 979。1H NMR (C5D5N, 400 MHz):3.61(1H, dd, J=10.8, 5.2 Hz, H-3), 4.59(1H, dd, J=10.9, 5.4 Hz, H-16), 2.50 (1H, m, H-19), 0.92(3H, s, H-23), 0.88(3H, s, H-24), 0.89(3H, s, H-25), 1.05(3H, s, H-26), 1.00(3H, s, H-27), 0.80( 3H, s, H-28), 4.61(1H, m, H-29), 4.71 (1H, m, H-29), 1.25(3H, s, H-30), 6.27(1H, d, J=16.0Hz, H-2’), 6.90(1H, d, J=8.2Hz, H-8’), 7.56(1H, d, J=16.0Hz, H-3’), 7.03(1H, dd, J=8.0, 1.9Hz, H-9’), 7.08(1H, d, J=2.0Hz, H-5’), 3.92(3H, s, H-10’)，13C NMR (C5D5N, 100 MHz) 。见表1。
       IR 显示有羟基(3 449 cm-1)，双键(1 632 cm-1)，羰基(1 688 cm-1)的信号，UV显示320 nm有强吸收，说明有一个大的共轭体系。化合物Ⅰ经5%H2SO4水解，通过纸层析与标准品对照，显示有16β-羟基羽扇豆醇和阿魏酸存在。负离子FAB-MS给出准分子离子峰 m/z 617 (M-H)-，负离子HR-FAB-MS给出精确准分子离子峰 m/z 617.4214 (M-H)-，推定分子式为C40H58O5。
       在1H NMR谱中，δH 0.80，0.88，0.89，0.92，1.00，1.05，1.25， 3.92 (各3H，s) 说明分子中有8个甲基，δH 4.60(1H，br.s )，4.71(1H，s)显示有两个烯氢质子，同时δH 6.27 (1H, d ), 7.56 (1H, d ) 且J= 16.0 Hz, 说明有一个反式双键的存在。13C NMR(DEPT)谱给出了40个碳原子信号，显示有8个甲基，10个亚甲基，12个次甲基，10个季碳。其中δc 167.1为一个酯羰基碳原子信号，亚甲基δC109.0为一个端基双键碳原子信号。比较化合物Ⅰ与16β-羟基羽扇豆醇的碳谱数据，发现除侧链部分外，二者极为相近。
       分析化合物Ⅰ的HMBC图谱，H-29(δH 4.71，4.63)和H-30(δH 1.25)与C-20(δc 149.9)相关，H-18(δH 2.50)和和H-21(δH 1.95)与C-20(δc 149.9)相关，说明化合物1的双键位于C20(29)位。另外，C-23(δC 16.6)、C-24(δC 27.9)和C-1(δC 38.4)与H-3(δH 4.60)相关，C-1(δC 38.4)与H-3(δH 4.60)相关，C-9’(δC 167.1)与H-3(δH 4.60)相关，说明化合物的酯羰基与16β-羟基羽扇豆醇的C-3位相连。综合上述数据，推定化合物Ⅰ结构为：羽扇豆-20-烯-3β,16β-二醇-3-阿魏酸酯(Lup-2-ene-3β,16β-diol-3-ferulate)。结构见图1。
       图1 化合物Ⅰ结构图
       2.2.2 化合物Ⅱ 在常温下呈淡黄色液体。经多种溶剂系统层析均呈一个斑点。IR (νKBrmax, cm-1): 1 740(-COOH), 1 155(C-O-C), 715(强峰，n≥4)。化合物2与KHSO4共热放出甘油醛的刺激味，不能使高锰酸钾及溴水褪色，说明无双键及还原基团。13C NMR (CDCl3, 100 MHz ) δH: 173(酯羰基)，172.6(甘油部分β-碳接羰基，-CH-OOC-)，69(d，CH-O-), 62.5(t, -CH2-O-)，29.8(强峰，直链长链脂肪羟特征峰)，14.1(CH3)。化合物2经5%KOH水解，中和，经GC层析，保留时间(t=3 min 27s)与三棕榈酸甘油酯一致。FD-MS：M+ 804，以上数据表明化合物Ⅱ为三棕榈酸甘油酯。
       2.2.3 化合物Ⅲ红色油状物，[α]14.6 D= - 28.8° (c=1.59, CHCl3 )。 分子式 C17H24O，IR (νKBrmax, cm-1): 3 380 (-OH ),2 257(C≡C) , 1 640 (C= C)。1H NMR (CDCl3, 400 MHz ) δ: 0.88 (3H, t, J= 6.9 Hz,H-17) , 1.25～1.35 (10H, m , H-12～H-16) , 2.02 (2H, dt, J= 6.7 Hz, H-11) , 3.04 (2H, dd, J= 0.7,6.9 Hz, H-8) , 4.92 (1H, t, J= 5.4 Hz, H-3), 5.24(1H, dt, Jd= 10.2 Hz, J t= 1.1 Hz, Ha-1) , 5.38 (1H,dtt, Jd= 10.4 Hz, J t= 6.9, 1.3 Hz, H-9) , 5.47 (1H,dt, Jd= 16.8 Hz, J t= 11 Hz, Hb-1) , 5.51 (1H, dtt, Jd=10.5 Hz, Jt= 7.4, 1.3 Hz, H-10) , 5.94 ( 1H,ddd, J= 17.1, 10.2, 5.4 Hz, H-2)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ: 14.2 (C-17) , 17.8 (C-8) , 22.7 (C-16) , 27.3 (C-11) , 29.2 (C-14) , 29.3 (C-12) , 29.3 (C-13) , 31.9(C-15) , 63.6 (C-3) , 64.4 (C-6) , 71.7 (C-5) , 74.3(C-4) , 80.4 (C-7) , 117.1 (C-1) , 122.0 (C-9) , 133.2(C-10) , 136.2 (C-2)。以上数据与文献报道的3(R)-十七碳-1, 9 (Z ) -二烯-4,6-二炔-3-醇即人参炔醇[1]基本一致。
       2.2.4 化合物Ⅳ白色针状结晶(丙酮)，C29H50O, m.p.:138～140℃, MW 414; EI - MS m/z(%):414 [M ] + (100) ,396(27),381(18), 367(3), 354(5),329 [M - 85] + (20),303(34) , 289 (5) , 273[M - SC ]+ (15) , 255(15),231 [M - SC - 42 ]+(12) ,213(16),145(17) ,109(14) , 69(25) 。1H NMR (CDCl3 ,500 MHz) δ: 5.30 (1H, d, J= 5.2 Hz, H - 6) , 3.50 (1H, m, H - 3) , 0.98 (3H, s, H - 19) , 0.91 (3H, d, J= 6.5 Hz, H - 21) , 0.83(3H, d, J = 1.8 Hz, H - 29) , 0.81 (3H, d, J= 4.0 Hz, H - 27 ) , 0.80 ( 3H, s, H - 26),0.67 (3H, s, H - 18) ;13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ:19.8q, 19.4q, 19.0q, 18.8q, 12.0q, 11.9q, 21.1t, 23.1t, 24.3t, 26.1t, 28.3t, 31.9t, 34.0t, 37.3t, 39.8t, 42.3t, 42.3t, 121.7d, 71.8d, 56.8d, 56.1d, 50.1d, 45.9d, 36.1d, 29.2d, 140.8s, 36.5s, 31.6s.以上数据与标准样品β-谷甾醇基本一致。
       2.2.5 化合物Ⅴ白色无定型粉末， C35H60O6, m.p.：288～289℃，[α]23 D = -40.83。(c=0.63, 吡啶); IR (νKBrmax, cm-1): 3 400(OH), 2 490, 2 930, 2 850(CH3, CH2), 1628(C=C), 1 375, 1 365(-CH3及偕二甲基)，1 150，1 068，1 015(C-O). MW576; EIMS m/z 414(苷元，6)，396(100)， 381(7)，329(2)， 303(5)， 255(12)， 231(3)， 187(3)， 161(15)，145(21)， 133(12)， 119(10)， 107(17)， 95(22); 1H NMR(C5D5N, 500 MHz) δ: 5.33(2H, d, J=2Hz, H-1, H-6), 5.05(1H, d, J=7.4Hz, H-1), 3.94(1H, m, H-3); 13CNMR(C5D5N, 100 MHz):苷元部分：δ 140.8, 121.7, 78.4, 56.7, 56.0, 50.1, 45.9, 42.3, 39.8, 39.2, 37.3, 36.7, 36.2, 34.0, 32.0, 31.9, 30.0, 29.3, 28.3, 26.2, 24.3, 23.2, 21.0, 19.8, 19.2, 19.0, 18.8, 11.9, 11.8; 葡萄糖部分：102.4, 78.3, 77.9, 75.1, 71.5, 62.7. 以上数据与标准样品胡萝卜苷基本一致。
       2.2.6 化合物Ⅵ白色针晶(石油醚-醋酸乙酯) , mp.208～210 ℃。[α]20 D + 25.8°( c=0. 77 , CHCl3) 。IR (νKBrmax, cm-1): 3408 (-OH) ,2 943 , 2 854 , 1 637 (末端双键) , 1 458 , 1 381 , 1 038 , 880 (末端双键). 1H NMR (C5D5N, 400 MHz):3.17(1H, dd, J=10.8, 5.2, H-3), 2.39 (1H, m, H-19), 0.97 (3H, s, H-23), 0.73 (3H, s, H-24), 0.83 (3H, s, H-25), 1.03 (3H, s, H-26), 0.95 (3H, s, H-27), 0.79( 3H, s, H-28), 4.69 (1H, m, H-29),4.57 (1H, m, H-29),1.68 (3H, s, H-30). 13C NMR (C5D5N, 100 MHz)见表1，以上数据与文献相符羽扇豆醇[2]基本一致。
       2.2.7 化合物Ⅶ针状结晶(Me2CO) 分子式： C30H50O2 分子量：442 mp. ： 218～219℃旋光：[α]20 D +23°(c=1.18,CHCl3) 1H NMR (C5D5N, 400 MHz):3.45(1H, dd, J=10.8, 5.2, H-3), 3.93(1H, dd, J=10.9, 5.4, H-16), 2.65 (1H, m, H-19),1.08 (3H, s, H-23), 0.87(3H, s, H-24), 1.03(3H, s, H-25), 1.15 (3H, s, H-26), 1.08(3H, s, H-27), 0.79( 3H, s, H-28), 4.75(1H, m, H-29),4.91 (1H, m, H-29),1.75(3H, s, H-30) 13C NMR (C5D5N, 100 MHz)。见表1。以上数据与文献相符16β-羟基羽扇豆醇[3]基本一致。
       2.2.8 化合物 Ⅷ白色粉末, m.p. 131～132℃, [α]14 D=+40.0 (c=0.20, MeOH); 负离子FAB-MS m/z(%): 457([M-H]-, 100); 1H NMR (C5D5N, 400 MHz,): δH 5.35(1H，br.t, J = 7.4 Hz, H-22), δH 5.01(1H，br.t, J = 7.4 Hz, H-24), δH 4.91(1H，d, J = 7.7 Hz, H-1′), δH 2.08(3H, s, H-29), 1.80 (3H, s, H-21), 1.61(3H, s, H-27), 1.66(3H, s, H-26), 1.56(3H, s, H-30), 1.22(3H, s, H-28), 1.03(3H, s, H-18), 0.81(3H, s, H-19), 13C NMR (C5D5N, 100 MHz)。见表1。以上数据与文献报道的人参皂苷Rh4[4]基本一致。表1 化合物Ⅰ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ的13C NMR数据
       3 讨论
       在分离化合物Ⅰ的过程中不易得到其纯品，多为顺反两种异构体的混合物，(Z)构型在高温时易发生构型转换，所以本实验最终得到化合物为(E)构型体。
       【参考文献】
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