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       【摘要】 
       目的确定大黄多糖的最佳提取条件。方法以大黄多糖的含量为指标，以提取温度、提取时间、提取次数、料液比为因素，利用单因素实验确定因素水平，正交实验法进行实验设计，对水提取法提取大黄多糖的工艺进行系统研究。结果大黄多糖的最佳工艺条件为：提取时间3 h，提取温度95℃，料液比1∶20。结论该方法实验结果可作为提取大黄多糖的工艺制定的依据。
       【关键词】  大黄; 多糖; 提取工艺; 正交实验
       大黄为廖科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.，唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Balf或药用大黄Rheum officinale Baill的干燥根及根茎，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。近年来，经大量实验证实大黄多糖不仅具有抗衰延年[1]、降血糖[2]、治疗胃溃疡性结肠炎[3]、改善血脂[4]、抗保护神经[5]等作用，并且还可以通过提高机体免疫力达到抗肿瘤的作用[6]。因此，大黄多糖作为中药和生物药物的重要成分，毒性低，性质稳定，营养价值高，同时具有多方面的生理活性，无论是进行保健食品还是药品的开发和利用，均具有广阔的应用前景。目前对大黄多糖的药理研究较多，而对其提取工艺研究较少，特别是大黄多糖的提取工艺优化研究笔者未见国内外文献报道。本实验以大黄多糖的含量为指标，采用单因素考察和正交实验法进行实验设计,对传统的水提取法提取大黄多糖的工艺进行系统研究,为大规模工业生产大黄多糖提供可靠依据。
       1 仪器与试药
       1.1 仪器 U1901双光束紫外可见分光光度计(北京普西通用仪器责任有限公司)，电子天平BS224S(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。
       1.2 药品大黄(购于长春药材公司)、苯酚、葡萄糖、浓硫酸、乙醇、乙醚、丙酮等，均为分析纯试剂。
       2 方法
       2.1 大黄多糖样品液的制备精密称取干燥至恒重的大黄2.5 g，加水提取，提取液浓缩后定容于100 ml的容量瓶，室温冷却后，吸取5 ml提取液，加入5倍体积95%的乙醇，静置过夜，离心(3 000 r/min)，所得沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，得粗多糖，加蒸馏水定容于100 ml容量瓶中得大黄多糖样品液供测定用。
       2.2 多糖的测定方法大黄多糖的测定以葡萄糖为标准品，采用硫酸-苯酚比色法。
       2.2.1 标准样品溶液的配制精密称取14.71 mg干燥至恒重的无水葡萄糖，加入100 ml容量瓶中，用水溶解至刻度，使成147.1 μg/ml即得。
       2.2.2 标准曲线的制备[7]分别精密吸取上述标准样品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml至10 ml容量瓶中，然后依次加入1.8，1.6，1.4，1.2，1.0 ml蒸馏水，再各加1.0 ml 6%苯酚试剂，混匀，精密加入5ml浓硫酸，振摇后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，立即转入冷水浴中冷却至室温，以蒸馏水为空白，在490 nm波长处测定吸收度，即得标准曲线，以浓度C对吸收度A回归方程：A=0.381 8C + 0.017 4，r=0.995 2。
       2.2.3 大黄多糖样品液的测定精密吸取大黄样品液1.0 ml，按“2.2.2”标准曲线的制备项下的方法操作。
       3 结果与分析
       3.1 单因素实验结果
       3.1.1 提取次数对多糖得率的影响见图1。
       图1 提取次数对多糖得率的影响
       由图1可知，提取次数2次与3次、4次、5次相比，样品多糖的得率相差不大，所以考虑节省时间和能源，选择2次较为合适。
       3.1.2 提取时间对多糖得率的影响由图2可知，多糖得率开始时随着提取时间的延长上升较大，当达到3 h以后，再延长时间，多糖得率则变化不大。
       图2 提取时间对多糖得率的影响
       图3 提取温度对多糖得率的影响
       3.1.3 提取温度对多糖得率的影响由图3可知，多糖得率开始时随着提取温度上升提高显著，当达到95℃以后，温度提高对多糖得率的影响显著性不是很明显。
       3.1.4 料液比对多糖得率的影响由图4可知，多糖得率开始时随着料液比的增大而变大， 料液比为1∶20时，多糖得率达到最高点，而后，随着料液比增大，多糖得率反而下降。
       图4 料液比对多糖得率的影响
       3.2 大黄多糖提取条件的优化在单因素考察的基础上，以提取时间、提取温度和料液比为因素，作如下3因素水平的正交实验。选择正交表L9(34)，因素-水平设计如表1。　表1 因素水平
       3.3 实验结果结果见表2～3。
       4 结论
       极差R反映了各因素对指标的影响大小，由RC 试验表3 正交实验方差分析度，浸提时间，料液比;均值K因素i反映了该因素水平i对指标的影响，指标值越大越好，由k1A
       【参考文献】
         　[1] 苗明三，苗艳艳.大黄多糖对衰老模型小鼠胸腺、脾脏影响的病理观察[J].中华实用中西医杂志，2004，17(4)：146.
       
       [2] 李道中.掌叶大黄多糖对高血糖小鼠及正常小鼠的降糖作用[J].中国医院药学杂志，2007，27(3)：309.
       
       [3] 张 蓉，王志鹏，刘 莉，等.唐古特大黄多糖对小鼠溃疡性结肠炎细胞因子的影响[J].中国临床药理学与治疗学，2006，11(9)：995.
       
       [4] 戴 英，马建民，徐 颖，等.大黄多糖对糖尿病小鼠血清脂质等几项指标的作用[J].上海实验动物科学，2004，24(2)：945.
       
       [5] 王志鹏，刘 莉，梅其炳，等.唐古特大黄多糖对大鼠实验性颅脑外伤的保护作用[J].中国中药杂志，2003，28(10)：974.
       
       [6] 常海兰，殷 凤，祝寿芬，等.五台大黄多糖(RRP)对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能的影响[J].山西预防医学，2002，11(2)：113.
       
       [7] 倪受东，严德江，徐先祥.大黄多糖的提取及含量测定[J].中国药业. 2007，16(13)：10.