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       【摘要】 
       目的研究电针对局灶性脑缺血(MCAO)大鼠海马CA1区微循环血流量的影响。方法应用激光多普勒微循环血流分析仪，实时监测栓线法栓塞大脑中动脉所致局灶性脑缺血大鼠电针人中、内关、曲池、足三里前后大鼠脑海马CA1区微循环血流量的变化。结果电针人中、内关对MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量无明显影响;电针曲池、足三里可使MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量降低，与电针前相比具有显著性差异(P<0.05)。结论电针曲池、足三里可使MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量明显下降。
       【关键词】  电针; 局灶性脑缺血; 海马; 微循环
       The Effects of Electroacupuncture on the Microcirculatory Blood Flow in Hippocampus of Focal Cerebral Ischemia Rats
       HAN Bingbing1,WANG Shijun2*， JIANG Jiqiang3
       (1.College of Basic Medical Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355，China; 2. School of Acupuncture and Massage, Shandong University of TCM, Jinan 250355, China; 3. Wendeng Second Hospital, Wendeng, Shangdong 264411, China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of electroacupuncture on the microcirculation in the hippocampal CA1 region of focal cerebral ischemia rats. MethodsFocal cerebral ischemia in rats were produced with middle cerebral artery occlusion (MCAO). The real time microcirculatory blood flow was observed with a laser doppler blood flow monitor in the hippocampal CA1 region of MCAO rats after electroacupuncture on Renzhong(DU26), Neiguan (PC6) and Quchi (LI11), Zusanli(ST36). ResultsThe microcirculatory blood flow of the right lateral hippocampus showed no remarkable change in Renzhong, Neiguan group after electroacupuncture. The microcirculatory blood flow of the right lateral hippocampus was decreased greatly in Quchi, Zusanli group after electroacupuncture (P<0.05).Conclusion Electroacupuncture on Quchi, Zusanli can decrease the microcirculatory blood flow in the hippocampal CA1 region of MCAO rats.
       Key words：Electroacupuncture ; MCAO; Hippocampus; Microcirculatory blood flow
       针刺治疗缺血性中风(缺血性脑血管疾病)疗效显著，然而机制尚不明了。我们以往的研究证实[1]电针人中、内关可促进大鼠海马CA1区微循环血流量;电针曲池、足三里可降低大鼠海马CA1区微循环血流量。本实验进一步研究电针对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区微循环血流量的影响，从微循环角度深入探讨针刺治疗脑缺血性疾病的机理。
       1 材料与仪器
       1.1 动物雄性Wistar大鼠，12周龄，32只，体质量(250±20)g，由山东大学医学部实验动物中心提供，普通级，动物生产许可证号：SCXK(鲁)20030004。
       1.2 仪器江湾Ⅰ型C立体定位仪，上海川沙花木农机厂产品;激光多普勒微循环分析仪，英国MOOR公司产品;G6805-2A电针治疗仪，上海华谊医用仪器厂产品;自制大鼠固定器、恒温箱。
       2 方法
       2.1 尼龙线的制备根据本实验室操作经验，选用直径为0.2 mm的尼龙线，经砂纸处理使头端变钝、细，每段截取长度25 mm, 浸泡于0.1%的新洁尔灭溶液中消毒待用。
       2.2 模型制作采用大脑中动脉栓塞法制成局灶性脑缺血模型。大鼠麻醉后，仰卧位固定，颈部正中切口，逐层分离出右侧颈总动脉，沿颈总动脉向上分离出颈内动脉和颈外动脉，穿线结扎颈总动脉近心端后，提起颈总动脉，在距离颈内和颈外动脉的分叉处远端约3 mm处剪一小口，用处理过的尼龙线沿剪口插入颈内动脉19～21 mm，即将大脑中动脉起始部阻塞，结扎入端。假手术对照组穿入尼龙线长为10 mm，其余操作与模型组完全相同。
       2.3 动物分组除假手术对照组外，其余大鼠术后清醒即刻参考Zea Longa5分制评分标准评分(0分，无神经损伤症状;1分，不能伸展对侧前爪;2分，向外侧转圈;3分，向对侧倾倒;4分，不能自发行走，意识丧失)，并按照评分情况，将大鼠进行随机配伍分为3组：①模型组;②人中内关针刺组;③曲池足三里针刺组。各组样本含量均为8。
       2.4 针刺方法曲池、足三里组取左侧曲池、足三里，人中内关组取人中及左侧内关，电针频率为4～16 Hz，波型为间断疏密波, 刺激强度为1V, 时间为30 min，于15 min时交换电极，1次/d。以上两组均在模型复制成功后第2天开始针刺，连续针刺2 d。假手术对照组及模型组除不针刺外，亦经过抓取、固定等过程。
       2.5 微循环监测方法各组大鼠均于第2天针刺时监测右侧海马CA1区微循环。大鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，俯卧位固定于脑立体定位仪上，头皮正中切口，以前囟和矢状缝的交点作为中点，在向后4 mm，右侧旁开2 mm处用10号针头钻一孔，将探头通过立体定位仪经此孔垂直入脑2 mm，置于海马CA1区，即可应用激光多普勒微循环血流仪实时检测微循环的血流量。大鼠稳定10min后开始电针，记录电针前5 min，电针1，10，20，30 min，停针后20，40，60 min的微循环血流量，以观察时间1 min内的平均微循环血流量作为该观察时间的微循环血流量。
       2.6 统计学处理实验数据以±s表示，同时间不同组采用单因素方差分析，同组不同时间采用配伍组方差分析，以P<0.05为差异具显著性。
       3 结果
       结果显示，与同时间点假手术组相比较，模型组、人中内关组及曲池足三里组大鼠海马CA1区微循环血流量在各时间点均降低，大部分时间点有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。
       模型组大鼠海马CA1区微循环血流量在电针30 min后与电针前相比明显下降(P<0.05)。人中内关组大鼠海马CA1区微循环血流量电针后呈升高趋势，至电针30 min时升至最高，然后缓慢下降，至停针后60 min时比同组电针前升高15%，但电针后各时间点与电针前相比不具有显著性差异。曲池足三里组大鼠海马CA1区微循环血流量在电针10 min后明显下降,与电针前相比具有显著性差异(P<0.05)。结果见表1。表1 电针对MCAO大鼠海马CA1区微循环血流量的影响与同时间假手术对照组比较，*P<0.01;与同时间假手术对照组相比较，&P<0.05 ; 与同组电针前相比较，#P<0.05; n=8
       4 讨论
       研究脑血流的方法较多。目前激光多普勒血流计 (laser doppler blood flow monitor ，LDF)逐渐发展成为神经科学研究的重要工具。LDF原理是采用单色的内聚激光，以一可传递的光学纤维传递到生理组织。从移动的物体上反射的激光会出现多普勒效应，即频移。而周围静止结构反射的激光频率不变。反射光信号通过光学纤维传入探测器，由探测器通过探测频移，测定红细胞的速度。
       LDF以多普勒效应为检测基础，无需吸入或注射任何药物，不用等候检测时机，可随时进行检测。瞬时测量时间为0.1 s，可以迅速反馈血流变化，具有简单、连续、实时、微创等特点。但是影响LDF测量值的因素较多，如组织牵拉、探头移位、光导纤维的摆动、呼吸幅度的改变等均可产生赝像波，实验中应予以重视。
       传统治疗中风病也多采用“治痿独取阳明”的疗法，故实验另外选取曲池、足三里进行针刺。据报道在正常和高血压状态下，针刺曲池、足三里能显著降低大鼠血压[2]。针刺大鼠足三里能够诱发支配穴位的特异性外周神经放电，推测该神经信号可能通过躯体心血管反射参与调节体内的血压变化[3]。电针足三里能够减少延髓头端腹外侧区内谷氨酸释放量，降低应激性高血压大鼠的血压[4]。而电针曲池穴可抑制两肾一夹高血压大鼠血压的升高，其降压机制可能与其综合抑制肾素一血管紧张素系统有关[5]。本实验结果显示电针曲池、足三里可使MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量降低，推测可能与上述神经体液调节机制相关。
       本实验所选用的“人中”和“内关” 两穴是“醒脑开窍” 针法中的两个主要穴位，人中穴也称水沟穴,为督脉腧穴,具有醒神开窍、回阳救逆等功能。内关是心包经穴，具有宁心安神的作用。据报道电针人中、内关能抑制急性脑缺血模型大鼠血清NO、NOS、ET-1的过度升高从而调节微血管舒缩[6]，本实验结果显示电针人中、内关对MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量无明显影响，推测不同穴位对微循环的调节效应有一定差异，计划在以后的实验中，尝试改变脑缺血造模方法，改进针刺时机，延长微循环监测时间来进一步证实电针人中、内关对脑缺血大鼠海马微循环血流量的影响。
       【参考文献】
         　[1] 王世军，吴富东，韩冰冰，等. 电针对大鼠海马CA1区微循环的影响[J].中国微循环，2005，9(5)：308.
       
       [2] 胡和平，朱兵，孙国杰，等.针刺不同腧穴对大鼠血压的影响[J].湖北中医杂志，2008，30(4)：5.
       
       [3] LI Wei-min，CHEN Ying-bo，WANG Zhi-jun.Peripheral Nerve Discharge Elicited by Manual Acupuncture at Zusanli(ST 36)Regulates Blood Pressure in Anesthetized Rats[J].J Acupuncture Tuina，2008，6：281.
       
       [4] WANG Yan-rong，WANG Jin，LI Li，et al. Relationship Between the Central Hypotensive Effect of Acupuncture or Melatonin and the Changes of Medullary Amino Acid Neurotransmitter[J].Journal ofAcupuncture and Tuina Science，2007，5(5):274.
       
       [5] 钱春艳，陈邦国，魏 丹，等.电针曲池穴对高血压模型大鼠血压及血管紧张素Ⅱ的影响[J].湖北中医学院学报，2008，10(3)：5.
       
       [6] 樊 凌，常小荣，严 洁，等.电针对急性脑缺血大鼠血清NO、NOS、ET-1的影响[J].湖南中医药大学学报，2008，28(1)：67.