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       【摘要】 
       目的建立络气郁滞证大鼠动物模型并进行评价。方法对大鼠慢性束缚6周建立络气郁滞证模型，观察模型大鼠的精神、饮食量、体质量、蔗糖水摄取量，血清皮质酮(CORT)、血浆内皮素(ET)，血清5羟色胺(5-HT)、NO以及主动脉组织内皮细胞超微结构的变化。结果络气郁滞证模型表现为精神萎靡，反应迟钝，摄食量减少，体质量增长缓慢，蔗糖水摄取量、摄食量及体重均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01);模型组大鼠血浆ET升高、血清CORT升高，5-HT、NO降低(P<0.05或P<0.01);内皮细胞超微结构发生明显改变。结论利用慢性束缚法6周，通过观测大鼠体质量、摄食量、蔗糖水摄取量、CORT、ET、NO、5-HT的变化，初步建立络气郁滞证大鼠动物模型，制作方法简单，评价指标客观，为脉络血管系统病的研究提供良好的实验基础。
       【关键词】  络气郁滞证; 动物模型
       Establishment and Evaluation of Rat Animal Model with Collateral Qi Stasis
       WU Xiangchun1，2, LAI Jing3, WU Yingling1*, JIA Zhenhua1, WANG Hongtao1, ZHANG Qiuyan1
       (1.Department of Collateral Theory, Combination of TCM with Western Medicine Academy of Heibei, Shijiazhuang 050035， China; 2.Hebei Ying-ling Hospital, Shijiazhuang 050091, China; 3.The Third Hospital of Shijiazhuang 050017, China )
       Abstract：ObjectiveTo establish and evaluate the rat animal model with collateral qi stasis. MethodsTo establish animal model with collateral qi stasis in 6 weeks by chronic constraint. To observe the changes of consciousness, appetite, body weight, the intake of cane sugar water, and the levels of CORT, ET, NO, 5-HT. The ultramicrostructure change of aorta was observed by transmission electron microscope. ResultsThe animal model rats showed deprementia, dull,no appetite，increasing slow of body weight，the cane sugar water intake was lowered significantly (P<0.01 or P<0.05), the levels of CORT,HCY,ET were increased significantly(P<0.01 or P<0.05)，and the levels of 5-HT,NO were lowered significantly (P<0.01 or P<0.05). The ultramicrostructure of aorta changed obviously.ConclusionThe animal model with collateral qi stasis is established with chronic constraint. The method has been succeed through observation the changes of body weight, cane sugar water intake, appetite, CORT，ET，NO，5-HT, and ultramicrostructure of aorta. The method is easy and the evaluated indexes are objective, which provide the good experiment foundation for the study of vessel-collateral and vascular system disorders.
       Key words：Stasis of collateral qi; Animal model
       络气郁滞、络气虚滞引起的络脉自稳状态功能异常与血管内皮功能障碍具有内在一致性，均为“脉络-血管系统病”的始动因素并贯穿病变全过程，成为运用络病理论研究血管病变的切入点[1]。高同型半胱氨酸血症是内皮功能障碍的独立危险因素，而应激是引起高同型半胱氨酸血症的主要原因。我们以慢性束缚法建立络气郁滞证大鼠动物模型，进行络气郁滞证候的研究。
       1 材料与仪器
       1.1 动物及分组健康雄性Wistar大鼠20只，体质量200～230 g，购于北京维通利华实验动物中心，大鼠5只/笼，饲养在河北以岭医药研究院药理实验室，按体重随机分为两组，即正常对照组和络气郁滞模型组。正常饲料饮食。
       1.2 仪器束缚盒：参照朱清静等[2] 、唐已婷等[3]方法选择合适的大鼠固定盒，该筒呈管状，长约25 cm，筒口外径7 cm，内径5 cm，筒内前端置一直径小于筒的内径，并可以前后调节的圆嘴的塑料口，其口为通气口，后端为开关闸门。尾悬挂架由大鼠实验架改装而成。
       2 方法
       2.1 动物造模方法络气郁滞模型组：参照吴淑庆等[4，5]的方法，实验开始时即给予束缚法，将大鼠放入束缚盒内，调节前端活动部位到合适的位置，使大鼠不产生强烈反抗的紧张程度。每天 6 h(9:00～15:00)，连续6周。
       2.2 观察指标
       2.2.1 行为学观察 ①一般情况的监测：称每日摄食量，最后计算总摄食量;每周记录体质量1次;观察模型动物精神、活动情况等。 ②尾悬挂：参照唐已婷等[3]的方法，于实验末测定不动时间、挣扎次数。③1%蔗糖水摄取量测定：参照熊振芳等[6]、金光亮等[7]的方法，在实验前先对所有的大鼠进行1%蔗糖水摄取训练，即先用蔗糖水喂养48 h，随后断水24 h，再于晨8～9时的1 h内测量每只大鼠摄取蔗糖水的量，以此作为每只大鼠蔗糖水摄取量的基线，在实验末于晨8～9时测1h内的蔗糖水摄取量。
       2.2.2 内皮功能的检测采用硝酸还原酶法检测血清NO含量，试剂盒由南京建成生物试剂公司提供。放免法检测血浆ET含量，试剂盒由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。
       2.2.3 神经递质的测定放免法测定皮质酮(CORT)，试剂盒由北京北方生物技术研究所提供;酶法测定五羟色胺(5-HT)，试剂盒由RapidBio Lab. California USA提供。
       2.2.4 循环酶法测定血清同型半胱氨酸(HCY)试剂盒由北京九强生物技术有限公司提供。
       2.2.5 主动脉组织内皮细胞超微结构实验结束后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，颈总动脉取血后，仔细分离并截取一小段胸主动脉，迅速浸入电镜液中，修成1 mm×1 mm×1 mm大小组织块，置4%戊二醛固定液中4℃保存(由河北医科大学基础医学院电镜室协助完成)。
       2.3 统计学处理所有数据用±s表示。采用SPSS13.0统计软件包进行t检验分析。
       3 结果
       3.1 大鼠行为学结果
       3.1.1 精神初期络气郁滞模型组大鼠表现为打斗、撕咬、尖叫等情绪过激行为，随着造模时间的推移，上述过激行为逐渐减少，精神萎靡，胡须下垂，贴边，扎堆，反应迟钝，毛色失去光泽。
       3.1.2 日摄食量和总摄食量的变化分别选择第10，30，40天的日摄食量和总摄食量进行比较，络气郁滞组低于正常对照组，具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。见表1。　表1 两组大鼠摄食量的比较与正常组比较，*P<0.05，**P<0.05
       3.1.3 两组大鼠体质量变化两组大鼠体质量在实验前未见有明显差异;在实验末，络气郁滞组(317.18 ±28.69)g 低于对照组(361.80 ±31.33)g，有显著性差异(P<0.01)。
       3.1.4 1 %蔗糖水摄取量的变化实验前两组1%蔗糖水摄取量无明显差异;实验末络气郁滞组较正常组显著降低，有显著性差异(P<0.01)。见表2。表2 实验前后两组蔗糖水摄取量的变化比较与正常组比较，**P<0.01;n=10
       3.1.5 尾悬挂实验络气郁滞组较对照组不动时间明显增加，挣扎次数明显减少，具有显著性差异(P<0.01)。见表3。表3 两组之间大鼠尾悬挂实验比较与正常组比较，**P<0.01;n=10
       3.2 血清HCY的变化络气郁滞组血清HCY水平(12.72±1.33)μmol/L较正常组(10.18±1.68 )μmol/L显著增高，具有统计学差异(P<0.01)。
       3.3 大鼠血清5-HT、CORT的变化络气郁滞组5-HT较正常组明显下降，CORT明显增高，有显著性差异(P<0.01)。见表4。表4 两组之间5-HT、CORT的变化比较与正常组比较，**P<0.01;n=10
       3.4 大鼠内皮功能的变化络气郁滞组较正常组ET增高、NO降低(P<0.05或P<0.01)。见表5。表5 两组间ET、NO比较与正常组比较，*P<0.05，**P<0.05;n=10
       3.5 主动脉组织超微结构改变正常对照组血管内皮细胞形态规则，连接紧密，基底膜完整，细胞核及细胞器存在，线粒体结构无异常。络气郁滞组，内皮细胞线粒体大部分嵴和部分膜融合或消失，粗面内质网扩张，脱颗粒明显，吞饮小泡数量明显减少。
       4 讨论
       大量研究资料表明，应激在心血管发病机制中起着重要作用。高同型半胱氨酸血症是内皮功能障碍的独立危险因素，而应激是引起高同型半胱氨酸血症的重要原因[8]，Allan等用模拟心理应激的束缚应激持续1 h可显著升高大鼠血浆Hcy水平，但游泳和冷刺激虽然都能导致HPA轴的激活，但不能升高大鼠血浆Hcy的水平[9]。有研究证实知识分子血浆同型半胱氨酸水平普遍增高[10]。本研究采用慢性束缚应激方法建立络气郁滞证动物模型，结果显示，络气郁滞证大鼠日摄食量明显减少，体质量增长缓慢，尾悬挂实验不动时间延长，挣扎次数减少，蔗糖水摄取量减少;模型大鼠应激激素CORT水平升高，使HPA轴兴奋;模型大鼠5-HT降低;ET增高，NO明显下降，血清HCY增高，主动脉组织内皮细胞超微结构发生明显改变。表明慢性束缚可明显影响动物的摄食量、体质量及行为学的改变，损伤血管内皮功能，显示出络气郁滞证候因素可以造成血管内皮的损伤，是导致血管内皮功能障碍的重要危险因素，在血管病变发生发展过程中发挥重要作用。
       本研究结合相关疾病(内皮功能障碍)和相关证(络气郁滞)的现代认识，初步建立了基本符合中医络病理论的络气郁滞证大鼠动物模型，以摄食量、体质量、蔗糖水摄取量、尾悬挂试验、CORT、5-HT、 ET、NO等作为评价指标，制作方法简单，评价指标客观，为脉络-血管系统病的研究提供实验基础。
       【参考文献】
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