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       【摘要】 
       目的建立小承气汤中肉桂酸和大黄酸的HPLC含量测定方法。方法采用Apollo C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈和0.011%冰乙酸溶液，梯度洗脱，时间20 min，流速1 ml/min，检测波长为254 nm。结果肉桂酸和大黄酸的线性范围分别为0.07～0.40 μg和0.48～1.92 μg，精密度为0.22% 和 0.19%，平均回收率分别为97.3%和96.9%。结论建立的方法简便、灵敏、准确，可用于小承气汤的质量控制。
       【关键词】  高效液相色谱； 小承气汤； 肉桂酸； 大黄酸
       Determination of the Contents of Cinnamic Acid and Rhein in Xiaochengqi Decoction by HPLC
       LI Kang, CHEN Runli, BI Yongguang, DAI Jingjing, WANG Yuanyuan
       1. College of Pharmacology, Guangdong Pharmacological University, Guangzhou 510006, China; 2. Futian Center for Disease Control and Prevention, Shenzhen 518040, China; 3. College of Clinical Medicine, Guangdong Pharmacological University, Guangzhou, 510006, China
       Abstract：ObjectiveTo establish an RP-HPLC method for determination of cinnamic acid and rhein in Xiaochengqi Decoction. MethodsApollo C18 column （150 mm×4.6 mm，5 μm）was used with the mobile phase of acetonitrile and 0.011% acetic acid aqueous solution in gradient mode. The flow rate was 1.0ml/min, and the detection wavelength was set at 254nm. ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.07～0.40 μg (r=0.999 2) for the cinnamic acid and 0.48～1.92 μg for the rhein (r=0.999 2). The inner-day RSD was 0.22% and 0.19%, and the average recovery was 97.3% and 96.9%, respectively.ConclusionThis method is accurate, simple and sensitive, and can be used for the quality control of Xiaochengqi Decoction.
       Key words：HPLC;   Xiaochengqi Decoction;   Cinnamic acid;   Rhein
        小承气汤出自《伤寒论》，为治疗阳明腑实证泻下法的代表方剂，可以治疗粘连性肠梗阻、肠麻痹、慢性胃炎等［1］。其处方为：大黄12 g，厚朴6 g，枳实9 g［2］。水煎服。有关小承气汤的含量测定方法较少，胡晓静等［3］测定了小承气汤中大黄酸和厚朴酚的含量；裴刚等［4］测定了小承气汤中番泻苷A的含量；李丽华等［5］测定了小承气汤胶囊中大黄素的含量。大黄为方中主药，而其酸性成分肉桂酸和大黄酸的含量还未同时测定过。作者采用高效液相色谱方法测定了6批小承气汤中肉桂酸和大黄酸的含量，为小承气汤质量控制的深入研究奠定基础。
       1  仪器与材料
          
       HP 1100高效液相色谱仪（在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱及紫外检测器，美国惠普公司）；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；水为超纯水（18.2兆欧）；冰乙酸（分析纯）；FA2104 万分之一电子天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂）；TY-CZ1006超声波清洗仪（常州天亿电子设备有限公司）。肉桂酸和大黄酸对照品购自中国药品生物制品检定所。生大黄、厚朴（姜制）和枳实（麸炒）各6批次购自广州致信药业公司。
       2  方法与结果
       2.1  供试品溶液及阴性对照溶液的制备称取6个批次各药材，生大黄约0.500 0 g，厚朴约0.250 0 g，枳实约0.375 0 g，组成6个处方，加10倍量的水煎煮1 h，过滤，残渣再加8倍量的水煎煮0.5 h，合并水提取液，减压浓缩至10 ml，置于分液漏斗，放凉，加浓盐酸两滴酸化，加入醋酸乙酯5 ml，萃取2次，合并萃取液于蒸发皿，80℃水浴挥干，放凉，残渣加入甲醇溶解，定量转移至10 ml量瓶，甲醇定容至刻度，摇匀。经0.45 μl微孔滤膜过滤，取续滤液备用。
        按本品处方及制法制备大黄空缺对照样品。
       2.2  色谱条件色谱柱Apollo C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流速1 ml/min，检测波长为254 nm，进样量10 μl，流动相A为乙腈，B为0.011%冰乙酸溶液，梯度洗脱，0～15 min，流动相A 25%～40%，流动相B 75%～60%；15～18 min，流动相A 40%～42%,流动相B 60%～58%；18～20 min，流动相A 42%～25%，流动相B 58%～75%。
       2.3  系统适应性实验在上述色谱条件下，主色谱峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数以肉桂酸和大黄酸计不低于4 800和5 100。对照品、样品及阴性对照色谱见图1。
       2.4  标准曲线的绘制精密称取肉桂酸对照品4.17 mg，以甲醇溶解，定容至25 ml量瓶，得肉桂酸储备液。精密吸取1 ml，用甲醇稀释至5 ml量瓶。在上述色谱条件下，分别进样2，5，7，10，12 μl，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，得到标准曲线Y=6 411.4X-19.394（r=0.999 2），线性范围为0.07～0.40μg。
        精密称取大黄酸对照品0.96 mg，以甲醇溶解，定容至10 ml量瓶，得大黄酸储备液。在上述色谱条件下，分别进样5，9，13，6，20 μl，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，得到标准曲线Y=2 704.5X-52.013（r=0.999 2），线性范围为0.48～1.92 μg。
       2.5  精密度实验和重复性实验取小承气汤样品1，按照上述色谱条件重复进样6次，计算肉桂酸和大黄酸峰面积，其相对标准偏差为0.22%和0.19%，表明色谱系统精密度良好。
        取样品1小承气汤药材按照上述供试品溶液制备方法制备6个样品，按照上述色谱条件进样分析。肉桂酸和大黄酸峰面积相对标准偏差为0.81%和0.71%，表明方法重复性良好。
       2.6  稳定性实验取样品1小承气汤药材按照上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液，放置0，2，4，8，12，24 h后，按照上述色谱条件进样分析。肉桂酸和大黄酸峰面积相对标准偏差为0.58%和0.65%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
       2.7  加样回收率实验精密量取小承气汤样品1溶液3份，分别精密加入橙皮苷和肉桂酸对照品溶液适量，按照上述色谱条件进样，得肉桂酸和大黄酸平均加样回收率为97.3%和96.9%，RSD分别为1.3%和2.9%。
       2.8  样品测定按照上述供试品溶液制备方法和色谱条件进样10μl。结果见表1。表1  小承气汤中肉桂酸和大黄酸含量测定结果（略）
       3  讨论
        肉桂酸的最大紫外吸收为278 nm，大黄酸最大紫外吸收为254 nm，但在上述色谱条件下，278 nm处干扰峰较多，故选用254 nm作为检测波长。肉桂酸和大黄酸化学结构中含有-COOH，故流动相加入冰乙酸，比较1%，0.1%，0.01%乙酸水溶液，发现酸的百分比对大黄酸的影响较大，保留时间随酸的增加而增加，而大黄药材中一些其它酸性成分对肉桂酸干扰也较大，比较得到0.01%的乙酸水溶液分离效果较好，最后细调为0.011%乙酸水溶液。在本文色谱条件下，能完全分离这两个成分。等度洗脱很难将两个化学成分同时分离，故采用梯度洗脱。从测定结果来看，样品间肉桂酸和大黄酸含量差别较大，可能是因为药材来源不一致，或者炮制加工方法还不统一，这也是中药现代化亟需解决的根本问题。此方法为小承气汤的质量控制深入研究奠定了基础。
       【参考文献】
         　［1］吴照平，王全德.加味小承气汤临床应用［J］. 陕西中医，1984，5（4）：25.
       
       ［2］彭怀仁. 中华名医方剂大全［M］. 北京：金盾出版社，1990：58.
       
       ［3］胡晓静，高轶哲，李 飞，等. HPLC测定了小承气汤中大黄酸和厚朴酚的含量［J］. 沈阳药科大学学报，2007，24（1）：26.
       
       ［4］裴 刚，郭锦明. RP-HPLC测定小承气汤中番泻苷A的含量［J］. 中国民族民间医药，2008，17（2）：14.
       
       ［5］李丽华，窦玉红，李国川. 高效液相法测定小承气汤胶囊中大黄素的含量［J］. 河北中医药学报，2008，23（3）：41.