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       【摘要】 
       目的对广地龙的不同炮制品，蛤粉制广地龙、黄酒制广地龙、白酒制广地龙、醋制广地龙、净制广地龙进行止咳、化痰、平喘药效学比较，以供临床应用参考。方法采用枸橼酸雾法，比较各种炮制广地龙的止咳作用；采用酚红祛痰法，比较各种炮制广地龙的祛痰作用；采用药物引喘法，比较各种炮制广地龙平喘作用。结果蛤粉制广地龙化痰、止咳、平喘作用效果最好，其次是黄酒制广地龙。结论蛤粉和黄酒炮制广地龙止咳、化痰、平喘药效好，保留黄嘌呤、次黄嘌呤等成分最多。
       【关键词】  广地龙； 平喘； 化痰； 止咳； 黄嘌呤
       广地龙是钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspegillum（E．Pettier)的干燥体，主要产于广东；性寒、味咸，具清热定惊、通络、平喘、利尿等功效。现代研究表明，地龙有活血化瘀、溶栓降压、抗肿瘤、平喘止咳、消炎止痛等作用。广地龙不同炮制品在化学成分、药理作用方面都有很大区别［1］。根据近年来研究，广地龙平喘有效成分黄嘌呤、次黄嘌呤在水中溶解度较大，导致广地龙炮制品的内在质量差异较大［2］ 。在平喘功效上，临床有广泛的应用，据报道：对气管炎及支气管哮喘病的治疗，用地龙制成的复方制剂，有效率84．9％。单味地龙制成注射液，治疗支气管哮喘及哮喘型气管炎，取得78％的疗效，临床检验表明其可抑菌、控制炎症，又能修复气管粘膜上皮［3］。本研究是用药理实验方法，对蛤粉制广地龙、黄酒制广地龙、白酒制广地龙、醋制广地龙、净制广地龙的平喘化痰止咳作用进行比较。
       1  材料
       1.1  动物昆明种小鼠，体质量18～22 g；豚鼠，体质量200～250 g，雌雄各半；均由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：2006005。
       1.2  药物试剂实验用广地龙为博罗先锋药业广地龙GAP基地提供，经广东药学院药用植物与中药鉴定学教研室老师鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspegillum（E．Pettier)，炮制品由中药化学实验室加工。黄酒制广地龙，白酒制广地龙，醋制广地龙，蛤粉制广地龙（蛤粉∶广地龙=1∶2 ），净制广地龙。各种炮制药材各取 2 g，浸泡12h后，在80℃恒温水浴4h，过滤后，取滤液在80 ℃恒温水浴浓缩到 l g／ml。乙酰胆碱，枸橼酸，酚红，氯化氨，氨茶碱，急支糖浆等购自医药公司。
       1.3  仪器DK- S26数控电热恒温水浴( 上海精宏实验设备有限公司), WH2000超声波喷雾器(上海医疗仪器厂)，FA2104S电子天平；WH2000超声波喷雾器(汕头医疗仪器设备厂)；岛津UV-240型可见紫外分光光度计。
       2  方法
       2.1  平喘乙酰胆碱引喘试验［4］选取体质量200～250 g豚鼠，分别置喷雾容器内，用超声波雾化器以相同强度喷入含 l  mg／ml氯化乙酰胆碱溶液，喷雾15 s，豚鼠经过一段潜伏期，产生哮喘。超过60 s不产生哮喘的不予选用。然后随机分为7组，每组8只，分别为阴性对照组(生理盐水10 ml／kg)，阳性药氨茶碱对照组( 0.25 g／kg)和黄酒制广地龙组( 0.33 g／kg)、白酒制广地龙组( 0.39 g／kg)、醋制广地龙组( 0.34 g/ kg)、蛤粉制广地龙组( 0.30 g／kg)、净制广地龙( 0.32 g/ kg)。阳性药腹腔注射氨茶碱1 ml／kg。生理盐水组及广地龙各组均灌胃给药，给药体积为10 ml／kg。给药30 min后，分别放入喷雾装置内按预选同样条件分别喷入氯化乙酰胆碱溶液，记录喷雾开始至哮喘症状出现的时间作为潜伏时间，观察3 min(180 s)，无哮喘的引喘潜伏期以180 s计算。
       2.2  化痰（用酚红祛痰法）［4］取小鼠70只, 称重，随机分为7组，每组10只，雌雄兼有，分别为阴性对照组(生理盐水 20 ml／kg)，阳性药氯化氨对照组( 0.04 g／kg)和黄酒制广地龙组( 1.32 g／kg)、白酒制广地龙组( 1.56 g／kg)、醋制广地龙组( 1.22 g/ kg)、蛤粉制广地龙组( 1.20 g／kg)、净制广地龙( 3.96 g/ kg)。各组小鼠灌胃给药体积均为 20 ml／kg。给药后0.5 h小鼠腹腔注射2.5％酚红生理盐水 0.5 ml，注射后1 h脱颈处死，分离气管，将7号针针头小心插入气管内约0.3 cm，结扎固定后，用 1 ml注射器吸取5％NaHCO3溶液1 ml灌洗呼吸道，灌洗3次，将每次灌洗液注入试管中，置一定时间，使杂质沉淀，取上清透明液体用UV-240型可见紫外分光光度计在545 nin处测定OD值。
       2.3  止咳(用枸橼酸喷雾引咳)［4］取小鼠70只，称重，随机分为7组，每组10只，雌雄兼用，分别为阴性对照组(生理盐水 20 ml／kg)，阳性药急支糖浆对照组(3 ml／kg)和黄酒制广地龙组( 1.32 g／kg)、白酒制广地龙组( 1.56 g／kg)、醋制广地龙组( 1.22 g/ kg)、蛤粉制广地龙组( 1.20 g／kg)、净制广地龙( 3.96 g/ kg)。各组灌胃给药体积均为 20 ml／kg。给药后l h将各组小鼠分别置喷雾容器内，用超声波雾化器以均衡强度喷入15 % 枸橼酸气雾，喷雾15 s后，立即观察动物咳嗽潜伏期(在吸入枸橼酸气雾后至发生咳嗽所需时间)，并记录 3 min内的咳嗽次数。
       2.4  统计学处理两组间均数用非配对t检验，数据以±s表示，P<0.05为统计学上差异有统计学意义。
       3  结果
       3.1  平喘作用蛤粉制、黄酒制、醋制广地龙使动物引喘潜伏期显著延长( P<0.001或P<0.01)，净制广地龙使动物引喘潜伏期延长( P<0．05)。结果见表1。表1  各种炮制品平喘潜伏期测定结果(略)
       3.2  化痰作用蛤粉制、黄酒制、醋制广地龙使动物的气管酚红排泌量非常明显提高(P<0．001,P<0.01)。结果见表2。表2  各种炮制品对气管酚红排泌的结果(略)
       与阴性对照组比较，**P<0.01，***P<0．001；n=103.3  止咳作用蛤粉制、黄酒制广地龙非常明显使动物的咳嗽潜伏期延长(P<0.001), 醋制广地龙明显使动物的咳嗽潜伏期延长(P<0.01)；蛤粉制、黄酒制、醋制广地龙非常明显使动物的咳嗽次数减少(P<0.001)，白酒制广地龙使动物的咳嗽次数减少(P<0.05)。见表3。表3  各种炮制品对止咳作用结果(略)
       4  讨论
          
       实验结果表明，平喘作用比较：蛤粉制广地龙>黄酒制广地龙>醋制广地龙>净制广地龙>白酒制广地龙；化痰作用比较：蛤粉制广地龙>黄酒制广地龙>醋制广地龙，净制广地龙和白酒制广地龙无化痰效果；止咳作用比较：蛤粉制广地龙、黄酒制广地龙和醋制广地龙>白酒制广地龙，净制广地龙无止咳效果；本课题其它实验研究报道：HPLC法测定广地龙不同炮制品中次黄嘌呤的含量，发现其含量高低顺序为蛤粉制广地龙>黄酒制广地龙>白酒制广地龙>醋制广地龙>净制广地龙［2］；黄嘌呤与次黄嘌呤是平喘止咳成分［5］，它们在蛤粉制广地龙中含量最高［1］；我们的实验结果证明蛤粉制广地龙平喘化痰止咳药效最好，说明这种炮制品黄嘌呤等质量最佳，这与理论和实践一致；而蛤粉含碳酸钙、甲壳质等，也有化痰止咳平喘作用，用它炮制广地龙其药效有协同作用，可提高疗效；因此，临床上用广地龙治疗哮喘，应使用蛤粉制广地龙疗效最佳。
       【参考文献】
         　［1］李钟，黄艳玲，李文姗. 炮制对广地龙次黄嘌呤和肌苷含量的影响［J］.中药材,2009，32（1）：32.
       
       ［2］李钟，李文姗，黄艳玲.广地龙饮片炮制工艺研究［J］.中医药导报,2008，14(7):82.
       
       ［3］李廷利,李玉萍,冯翰. 地龙的化学成分与临床应用概况［J］.黑龙江医药，2006，19(4):303.
       
       ［4］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学，第3版［M］．北京：人民卫生出版社，2003：1165．
       
       ［5］王筠默，王恒芬，梅全喜．中药研究与临床应用［M］.上海：上海中医药大学出版社，2006：245．