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       【摘要】 
       目的探讨中医综合疗法对双肾脂肪细胞形态及血清高密度脂蛋白水平的影响作用。方法从80只SD大鼠中选取体重相近大鼠70只，随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组、针灸治疗组、埋线治疗组、中药治疗组、综合治疗组，每组10只。采用营养肥胖造模方法复制肥胖模型大鼠，干预前、后，检测各组大鼠双肾脂肪细胞形态变化及血清高密度脂蛋白含量。结果①形态观察结果：模型对照组双肾脂肪细胞体积大于正常对照组，综合疗法组与模型治疗组比较，细胞形态缩小，脂肪细胞数减少；②血清高密度脂蛋白检测结果：模型对照组血清高密度脂蛋白低于正常对照组（P<0.01），综合治疗组血清高密度脂蛋白水平明显高于模型治疗组（P<0.01），与针灸治疗组及穴位埋线治疗组有明显统计学意义（P<0.05）。结论中医综合治疗较其他治疗方法比较具有更好减肥降脂功效，其减肥作用可能与升高血清高密度脂蛋白，降低血清总胆固醇和甘油三酯水平有关。
       【关键词】  肥胖； 中医综合疗法； 脂肪细胞； 形态； 高密度脂蛋白
       Effect of Chinese Medical Combined Therapy on High Density Lipoprotein and Lipocyte"s Morpha of Obese Rats
       TANG Hong zhen
       (Ruikang Affiliated Hospital of Guangxi University of TCM,Guangxi Nanning 530001,China)
       Abstract：ObjectiveTo explore the effect of Chinese medical combined therapy on high density lipoprotein and lipocyte morpha of obese rats.Methods70 rats, which had the similar weight from the 80 rats, were divided into normal, model,positive medical,acupuncture, catgut-embedding-therapy, Chinese-medical, combined treatment groups, and rorats each group. The model of alimentary obesity was established,and the blood High Density Lipoprotein and lipocyte"s morpha were compared before and after treatment.ResultsVolume of the kidney adipose tissue in model group was bigger than that of normal group.Compared with the combined-treatment group and model group,lipocyte"s morpha dwindled and the number of lipocyte reduced in combined-treatment group. Serum high density lipoprotein in model group was higher than that in normal group (P＜0.01).Serum high density lipoprotein in combined-treatment group is higher than it in the normal group(P＜0.05).ConclusionChinese medical combined treatment has a good effect on adiposity,its mechanism maybe related to the increase of serum high density lipoprotein and the decrease of serum total cholesterol and triglyceride.
       Key words：Adiposity;  Chinese medical combined treatment;  Lipocyte;  Morpha;  High-density lipoprotein
         
       随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，肥胖病证的发病率日益增高。据《纽约时报》报道，在过去30年间，美国2～5岁儿童和12～19岁青少年的肥胖症发病率均增长了2倍以上，6岁至11岁年龄段的孩子肥胖症发病率增长了3倍。由于肥胖病症是心脑血管疾病的重要危险因素，而高密度脂蛋白异常是导致冠心病发病的重要原因，因此，深入探讨肥胖病证高密度脂蛋白的变化，对阐释肥胖病证产生心脑血管疾病的机理及临床寻找有效减肥方法均具有重要意义。本实验以肥胖患者血清高密度脂蛋白变化为切入点，综合国内外研究现状，首次探讨中医综合疗法对肥胖大鼠脂肪组织及血清高密度脂蛋白的影响，现报道如下。
       1  材料
         
       SPF级雄性SD大鼠80只，日龄45 d左右，体质量(110±20)g，购于中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心［许可证号: SCXK(津)2005-0001］；奥利司他由北京贝科里（化学）科技有限公司提供。高脂饲料配方：基础饲料100 g加奶粉10 g，猪油10 g，鸡蛋1个，浓鱼肝油10滴(含维生素A 17000U、维生素D 1700U)、新鲜黄豆芽250 g。
       2  方法
       2.1  分组及模型制备采用营养性肥胖造模方法复制肥胖模型大鼠。从80只大鼠中选取体重相近大鼠70只，随机分成正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组、针灸治疗组、埋线治疗组、中药治疗组、综合治疗组，每组10只。正常对照组普通饲料喂养，其余各组按照高脂饲料配方喂养。大鼠供应饲料的量为第1～2周内每天每只鼠饲喂13 g，以后隔1周每只每天增加2 g，至第6周末，称量体质量，模型对照大鼠的体重大于正常对照组的平均体重的20%，为模型复制成功。
       2.2  干预方法①空白对照组：2 ml/d蒸馏水，灌胃，1次/d；②阳性药物对照组：60 mg/kg/d奥利司他，灌胃，1次/d；③针灸治疗组：取后三里（相当“足三里”）、中脘、水分和气海（取穴部位参照华兴邦等研制的“大鼠穴位图谱”，平补平泻法捻转1 min，10 min/次，1次/d；④埋线治疗组：取后三里、中脘、水分和气海，1次/周；⑤中药治疗组：灌服健脾化痰药（山楂、白术、陈皮、茯苓、丹参、决明子、大黄、泽泻等），生药浓度1 g/ml，灌胃，200 mg/kg/d；⑥中医综合减肥法治疗组：针灸、埋线、中药配合治疗，治疗方法同上。以上各组40 d为1疗程，共治疗1个疗程。所有大鼠正常饮水。
       2.3  观察指标及检测方法
       2.3.1  脂肪组织HE染色大鼠处死后，冰盘上取双肾区相同部位脂肪组织若干，放置于组织支承器，OCT包埋剂包埋，速放于冷冻台上，制成15 μm厚的冰冻切片。室温晾干后，切片入蒸馏水浸泡2 min；入苏木精浸泡5 min；自来水洗两次后放入体积分数为0.01的盐酸乙醇中分色；水洗后水浸泡5 min；伊红30 s；水洗后依次放入体积分数分别为75%，85%，95%的酒精、无水乙醇1、无水乙醇2中浸泡5 min；入二甲苯甲、二甲苯乙各浸泡5 min，最后中性树胶封固。
       2.3.2  血清高密度脂蛋白检测分别在实验开始时（随机分组后）及用药结束后，在空腹状态下于尾静脉取血，离心，分离血清，-20℃保存。采用全自动生化分析仪（Olympus.Au2700）测定血清高密度脂蛋白（HDL）含量。
       2.4  数据处理采用SPSS11.5 进行统计学分析，计量资料用±s表示，组间比较采用one-way ANONA单因素方差分析（先行方差齐性检验，再进行方差分析，后进行样本均数间的多重比较，P<0.05为有明显统计学意义）。
       3  结果
       3.1  统计学描述实验第3周模型组死亡1只，实验第4周综合治疗组死亡1只，解剖无特殊发现，死亡原因不明。进入结果分析68只，模型组9只，综合治疗组9只，其余各组均10只。
       3.2  干预治疗前后各组大鼠双肾脂肪组织形态变化模型对照组大鼠可见棕色脂肪细胞血管周围有许多白色脂肪细胞分布；正常对照组及各组干预前镜下可见棕色脂肪细胞，血管周围未见到明显白色脂肪细胞；各治疗组棕色脂肪细胞，血管周围见白色脂肪细胞较模型组减少，细胞形状变小；综合治疗组与其他治疗组比较，白色脂肪细胞少，细胞形态亦较小。结果见图1。
       3.3  干预治疗前后各组大鼠血清高密度脂蛋白变化干预前，各组大鼠之间血清高密度脂蛋白比较，无明显统计学差异（P>0.05）；干预后，模型对照组大鼠血清高密度脂蛋白明显低于正常对照组（P<0.01）；阳性药物对照组、中药治疗组血清高密度脂蛋白，均明显高于模型对照组（P<0.05）；综合治疗组与模型组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；综合治疗组与针灸治疗组及中药治疗组的血清高密度脂蛋白比较，差异有统计学意义（P<0.05）；中药治疗组、阳性对照组与针灸治疗组及埋线治疗组的血清高密度脂蛋白比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结果见表1。表1  干预前后各组大鼠脂肪细胞计数及血清高密度脂蛋白变化(略)
       4  讨论
         
       中医认为肥胖是由于过食肥甘厚味，久坐少动导致人体脏气不平，痰、浊等病理产物蓄积于体内而成，因此调理脏腑气机、祛痰化浊可作为肥胖病症的有效治疗方法。中医综合疗法，通过针刺足三里、中脘、水分和气海等穴位针刺及埋线方法进行刺激，调理气血运动，疏通脾胃经络，可以达到调节人体脏气的作用，在此基础上配合自拟减肥方（山楂、白术、陈皮、茯苓、丹参、决明子、大黄、泽泻等）调理脾胃，祛化痰浊，全套方法综合应用，经络与脏腑共调，内外结合，从整体到局部疏通人体脏腑气机，祛痰化浊，防治人体肥胖。前期研究发现，中医综合疗法具有抑制肥胖大鼠食欲，降低肥胖大鼠能量摄入，减轻大鼠体重的作用（相关论文待发表）。本次研究进一步发现，模型组大鼠脂肪细胞形态、脂肪细胞数大于正常对照组，综合治疗组与模型对照组比较，形态减少、脂肪细胞亦减少。由此可见，中医综合疗法具有较好的减肥降脂功效。
       
       高密度脂蛋白（HDL）是血清蛋白之一，它对肥胖的影响作用主要表现在：①促进胆固醇的逆转运：HDL将蓄积于末梢组织的游离胆固醇与血液循环中脂蛋白或与某些大分子结合而运送到各组织细胞，通过胆固醇逆转（RCR）促进组织细胞内胆固醇的清除，减少脂质在血管壁的沉积，使血管壁上多余的胆固醇逆向转运至肝脏，经过肝脏的处理，胆固醇变成胆酸盐排出体外［1］；②抗氧化作用：HDL含有的屏氧酶(Paraoxonase，PON)、血小板激活因子一乙酰水解酶(PAF－AH)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)等酶参与防止低密度脂蛋白（LDL）衍生的氧化磷脂的生成，并对氧化磷脂具有灭活作用。Nissen等［2］研究表明，冠心病患者每周注射一次人工合成的HDL，5周后其动脉瘤斑块体积平均缩小4.3％；③抗炎作用：Vaisar等［3］用蛋白质组学方法发现人血浆HDL的48个蛋白中，有23个与免疫炎症有关，22个与脂质转运和脂蛋白代谢相关；Park等［4］研究表明，HDL能减少细胞因子释放和粘附分子表达，抑制白细胞迁移至动脉壁，参与机制的免疫和炎症反应；④HDL还可以接受LDL在氧化过程中释放的有细胞毒性的溶血卵磷脂，从而避免细胞受损；另外HDL还具有保护内皮细胞、抗血栓、促纤溶等作用［5］。以上这些综合作用的结果体现了HDL的影响脂肪代谢及肥胖病症引起心脑血管疾病高发的原因。近年来，HDL在对肥胖病证的作用影响研究已引起医学研究者的关注，有关升高HDL为新治疗靶点研究也取得初步成果［6］，但目前有关中医药对肥胖病证HDL的研究鲜见。本实验以此为契机，探讨中医综合疗法的减肥功效及对肥胖病证血清HDL的影响作用，实验结果发现，营养性肥胖可导致血清HDL降低，中医综合疗法可有效升高血清HDL水平，且其效果明显优于单纯针灸、穴位埋线、及中西药治疗。本实验前期研究发现，中医综合疗法可降低血清总胆固醇（TC）和甘油三酯水平（TG）（另文发表），综合以上研究结果，推断，中医综合疗法具有较好的减肥降脂功效，其减肥途径可能通过升高HDL，从而降低血清TC、TG水平而实现，具体机制有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］Von Fckardstein A，Hersberger M，Rohrer L．Current understanding of the metabolism and biological actions of HDL［J］．Curr Opin Clin Nutr Metab Care，2005，8：147.
       
       ［2］Nissen SE，Tsunoda T，Tuzcu EM，et a1．Effect of recombinant apoA-I Milano on coronary atherosclerosis in patients with acute coronary syndromes：a randomized controlled trial［J］．JAMA，2003，290：2292．
       
       ［3］Vaisar T, Pennathur S, Green S, et al. Shotgun proteornics protease Inhibition and complement activation in the anti-inflammatory properties of HDL［J］. J Clin Invest, 2007, 117(3):746.
       
       ［4］Park SH, Park JH, Kang JS, et al. Involvement of transcription factors in plasma HDL protection against TNF-alpha-induced vascular cell adhesion molecule-1 expression［J］. Int J Biochem Cell Bid, 2003, 35(2):168.
       
       ［5］Sasahara T，Yamashita T，Sviridov D, et al. Altered properties of high density lipoprotein subfractions in obese subjects［J］. J Lipid Res, 1997，38(3): 600.
       
       ［6］Whitney EJ，Krasuski RA，Personius BE，et al．Targeting eholesterol treatment toward increasing high--density lipoprotein levels［J］．Ann Intem Med，2005,142：146．