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       【摘要】 
       目的探讨二苯乙烯苷（TSG）对糖尿病大鼠血脂和炎症因子的影响。方法将Wistar大鼠分为正常对照组（A组，10只），糖尿病高脂饮食组（B组，10只），糖尿病高脂饮食+TSG低剂量［10 mg/（kg·d）］干预组（C组，10只），糖尿病高脂饮食+TSG高剂量［20 mg/（kg·d）］干预组（D组，10只）。16周后，颈动脉取血，检测血脂、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和一氧化氮（NO）水平，肝组织中总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）以及肝脏指数，血清中炎症因子白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及C反应蛋白（CRP）水平。结果TSG能显著降低血浆TG、TC、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）、IL-6、TNF-α、CRP水平以及肝脏指数，并升高高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）水平，呈剂量依赖性。TSG干预后明显升高血清SOD活性和NO水平，降低肝脏MDA含量。结论 TSG对糖尿病大鼠具有保护作用，其机制可能与其调节血脂、抗氧化和抗炎作用有关。
       【关键词】  二苯乙烯苷； 糖尿病； 血脂； 白细胞介素-6； 肿瘤坏死因子-α； C反应蛋白
       中药何首乌属蓼科，系多年生落叶藤本药用植物，我国何首乌资源丰富，不仅为中药材提供原料，目前食品加工、保健品、化妆品对何首乌的需求量逐年增加。何首乌的活性成分含有二苯乙烯苷类、蒽醌类、磷脂类、大黄素等多种功能成分，具有抗衰老、增强免疫力、抗菌、抗氧化、抗动脉粥样硬化和保护心血管等多项生物学效应［1，2］。其中水溶性成分TSG在何首乌中含量很高，是其主要的生物学活性成分。本研究采用高脂饲料喂养，同时腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病（T2DM）模型，初步研究TSG对糖尿病大鼠脂质和炎症因子的调节作用，为何首乌药食兼用提供了良好的实验依据。
       1  材料与仪器
          
       TG和TC测定试剂盒（北京中生北控生物科技股份有限公司）；SOD、 MDA和NO测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；大鼠IL-6、TNF-α试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；TSG（北京中国药品生物制品鉴定所，纯度98%，批号Z080912-3）；链脲佐菌素（美国Sigma公司）。日立7600-020型全自动生化分析仪检测（日本日立公司）。
       2  方法
       2.1  糖尿病模型大鼠的制备与处理将50只Wistar大鼠体质量180～210 g基础饲料（蛋白质22%，脂肪10%，碳水化合物60%，其他8%）喂养适应环境1周。分为正常对照组（A组，10只），予以基础饲料喂养。其余40只参照文献［3］建立2型糖尿病模型：尾静脉注射链脲佐菌素（25 mg·kg-1溶于0.1 mol·L-1的枸橼酸钠缓冲液，pH4.4）。2周后行葡萄糖耐量试验，选糖耐量曲线面积大于对照均数加2倍标准差大鼠改喂高脂饮食（蛋白质13%，脂肪40%，碳水化合物40%，其他7%），并监测体质量、饮食和饮水量。8周后再行葡萄糖耐量试验，符合标准0 min血糖≥7.0 mmol/L或120 min≥11.0 mmol/L的大鼠即为2型糖尿病大鼠（共34只）。造模成功后取血糖较高的30只随机分为3组：糖尿病高脂饮食模型组（B组，10只），糖尿病高脂饮食+TSG低剂量（10 mg/kg）干预组（C组，10只），糖尿病高脂饮食+TSG高剂量（20 mg/kg）干预组（D组，10只），继续给予高脂饮食，C组和D组每天给予TSG腹腔注射剂量分别为10 mg·kg和20 mg·kg。所有动物继续喂养8周后处死，经颈动脉取血，解剖，称取肝脏质量，计算肝脏指数；分离血清测定TG、TC、LDL-C、HDL-C、SOD、MDA和NO；取新鲜肝脏左叶前缘部分（约300 g），加入异丙醇制成10%肝组织匀浆，匀浆液4℃放置48 h后，3 500 r/min离心，取上清液按试剂盒说明书测定TG和TC。
       2.2  血脂和炎症因子的测定生化分析仪测定血清TG、TC、LDL-C、HDL-C及CRP。肝脏TG和TC按照试剂盒说明操作。ELISA法测定血清IL-6、TNF-α水平。
       2.3  SOD活性和MDA含量、蛋白含量测定血清SOD活性采用黄嘌呤氧化法测定，MDA含量采用TBA法测定，紫外-可见分光光度计测定，操作步骤按说书进行。
       2.4  统计学处理采用SPSS12.0统计软件包进行统计学处理，率的比较用χ2检验，计量数据采用±s，进行方差分析和Student-t检验，以P<0.05为显著性标准。
       3  结果
       3.1  TSG对大鼠血脂水平的影响与正常对照组相比，模型组大鼠血清TG、TC、LDL-C含量明显升高，血清HDL-C含量明显降低。高剂量TSG干预组能明显减低血清TG、TC、LDL-C含量（P<0.05），显著提高血清HDL-C含量（P<0.05），而TSG低剂量干预组虽能降低血清LDL、TC含量及提高血清HDL-C含量，但其差异无统计学意义（P﹥0.05），TSG低剂量干预组降低血清TG含量，与糖尿病模型组比较差异有统计学意义。结果见表1。表1  TSG对实验性糖尿病大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C含量的影响（略）
       3.2   TSG对糖尿病大鼠炎症因子的影响 
        
       与正常对照组相比，模型组大鼠血清IL-6、TNF-α、CRP水平明显升高，其差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。TSG高剂量干预组能明显降低血清IL-6、TNF-α、CRP含量，并具有统计学意义（P<0.05），而TSG低剂量干预组虽能降低IL-6、TNF-α、CRP含量，但无统计学意义（P﹥0.05）。结果见表2。表2  TSG对实验性糖尿病大鼠血清IL-6、TNF-α、CRP含量的影响（略）
       3.3   TSG对糖尿病大鼠血清SOD、MDA和NO的影响  
       与正常对照相比，糖尿病模型组大鼠SOD和NO水平明显降低（P<0.01），MDA含量明显上升（P<0.01）。二苯乙烯苷各剂量组对上述指标均有明显的改善作用，以高剂量干预组效果更明显（P<0.05）。结果见表3。表3  TSG对血清SOD、MDA和NO的影响（略）
       3.4   TSG对糖尿病大鼠肝脏指数及肝组织脂质的影响与对照组相比，模型组大鼠肝组织TC和TG均明显升高（P<0.01），肝脏指数明显升高（P<0.05）。与模型组相比，高剂量TSG能明显降低肝组织中TC和TG水平（P<0.01），明显降低肝脏指数（P<0.05）。结果见表4。表4  对糖尿病大鼠肝脏指数和肝组织TC和TG的影响（略）
       4  讨论
          
       TSG为何首乌中发挥降血脂的主要水溶性成分。本实验研究采用高脂饮食加小剂量链脲佐菌素尾静脉注射的方法成功制造了2型糖尿病大鼠模型，具有高血糖和高血脂等代谢紊乱特征。大量流行病学研究已证实，血脂的异常可导致血液流变学的异常改变。以高甘油三酯、低高密度脂蛋白为特征的脂质代谢紊乱是糖尿病血管并发症的高危因素［4，5］。我们的实验结果显示TSG对糖尿病大鼠有明显降低TC、TG和LDL-C的作用，推测可能通过抑制外源性TG和TC的消化吸收发挥作用。糖尿病模型组大鼠体积增大，颜色呈浅黄，肝脏指数明显升高、肝储积脂质增加。TSG对肝脏指数和肝储脂有明显降低作用，提示其具有保肝作用。高脂血症中血管内皮细胞功能受损，内皮细胞释放NO减少，抑制血管舒张，促进血小板聚集［6］。本研究结果表明TSG能明显升高糖尿病大鼠模型的血清NO水平，有效降低血清MDA， 升高SOD活性。可见TSG在阻止血脂升高的同时有减少脂质过氧化反应的作用，从而降低高脂血症时超氧自由基对血管内皮的损伤，有利于过氧化脂质的分解和代谢，保护血管内皮功能。
       
       大量临床和实验证明炎症参与糖尿病的发生发展的全过程，因此提出糖尿病是一种慢性低度炎症性疾病［7］，抗炎治疗以延缓糖尿病及其并发症的进展已经成为一个新的方法。炎症是T2DM胰岛素抵抗起源的触发因素［8］，各种刺激应激导致细胞因子如：TNF-α、CRP、IL-6分泌增加，并且通过抑制胰岛素受体和IRS-1酪氨酸磷酸化加重胰岛素抵抗促进巨噬细胞转移抑因子-前炎症细胞的产生［9］。CRP是预测心脑血管疾病的标志物，是致动脉粥样硬化的一个危险因子［10］。脂肪细胞分泌的TNF-α、IL-6是刺激肝脏合成CRP的主要细胞因子，与慢性高血糖所致血管内皮细胞功能障碍密切相关。因此，T2DM的血管并发症可能与炎症反应有关［7，11，12］，研究TSG对2型糖尿病患者血清炎症因子的调节作用对预防糖尿病血管并发症有十分重要的临床意义。我们的研究发现，糖尿病大鼠血清TNF-α、CRP、IL-6均明显高于正常对照组，大剂量TSG干预后能显著性降低血清TNF-α、CRP、IL-6水平，提示TSG可能通过调节炎症因子水平而预防糖尿病血管并发症的发生。
       
       综上所述，本研究表明TSG具有改善糖尿病大鼠脂质代谢紊乱的血脂水平、降低肝脂储积、调节氧化应激、抑制炎症因子的作用。鉴于TSG来源广泛，且应用安全，因此它在调节血脂、糖尿病血管并发症防治方面的应用前景非常广阔。
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