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       【摘要】 
       目的通过加味当归补血汤（简称中药）对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响，探讨中药在肿瘤转移中的作用及其机制。方法昆明种小鼠随机分为空白组、模型组和中药组，空白组为健康小鼠，给予生理盐水灌胃；模型组和中药组为H22荷瘤小鼠动物模型，分别给予中药（中药组）和生理盐水（模型组）灌胃，喂养10 d和20 d后，检测各组小鼠全血粘度、血小板最大聚集率、T细胞亚群，计算抑瘤率、胸腺及脾脏指数。结果中药组小鼠的血液黏度（高切变、低切变）、血小板最大聚集率均较模型组降低，差异有显著性（P＜0.05），灌胃20 d时血小板最大聚集率变化更明显（P＜0.01）；而胸腺和脾脏指数、T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+)，中药组较模型组均增高（P＜0.05）；中药组的抑瘤率高达32.6%。结论加味当归补血汤对荷瘤小鼠具有改善血液流变学及增强免疫功能的作用，这可能是其抑制肿瘤生长和转移的机制之一。
       【关键词】  加味当归补血汤； H22荷瘤小鼠； 血液流变学； 免疫功能
       肿瘤的发生发展与血液流变学及机体免疫状态密切相关。恶性肿瘤患者血液呈高凝状态，血流缓慢，脱落的肿瘤细胞不易被冲刷而附壁，产生的血栓也易产生涡流，为分散的癌细胞提供了整合、黏附机会。人体的免疫系统能监视机体内出现的突变细胞及早期肿瘤，并予以清除，T淋巴细胞亚群在人体细胞免疫反应中有着重要的作用。研究显示加味当归补血汤用来辅助放化疗，具有升白、保肝、提高免疫功能的作用［1～3］。本实验通过观察加味当归补血汤对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响，探讨中药在肿瘤生长和转移中的作用及其机制。
       1  材料与仪器
       1.1  动物及药品健康昆明种小鼠60只，4～6周龄，雄性，体质量18～22 g，由山东鲁抗实验动物中心提供（合格证书号：SDXK鲁20070145）。加味当归补血汤（黄芪、当归、灵芝、鸡血藤、补骨脂等），相当于生药1.5 g/ml，由山东省肿瘤医院制剂中心生产，批号：070318。大鼠抗小鼠T细胞表面标记单克隆抗体（抗CD3、抗CD4）购于steroetc公司。
       1.2 仪器 
       LBY-NJ6型旋转式血液粘度计，LBY-NJ2型血小板聚集仪，F-820血液分析仪，BECKMAN流式细胞分析仪。
       1.3  瘤细胞株小鼠肝癌H22细胞株，由山东省肿瘤医院基础研究中心提供。
       2  方法
       2.1  荷瘤小鼠模型建立取小鼠肝癌H22细胞株制成细胞悬液，计数活细胞数后培养传代两次，将培养液离心得到肿瘤细胞。将肿瘤细胞稀释成2×107/ml浓度后接种到小鼠腹腔内，0.2 ml/只，瘤株在动物体内传代2次后，选择接种8 d腹部明显膨大的小鼠，抽取腹水，镜下进行细胞分类计数，瘤细胞数>95%，腹水用无菌PBS液稀释至2×107/ml，接种于小鼠背部近中线处，共40只，0.2 ml/只。
       2.2  分组及给药肿瘤接种24 h后随机分为两组，荷瘤H22小鼠20只（模型组），加味当归补血汤组20只（中药组）；另外未造模的20只健康小鼠为空白对照组（空白组）。给予空白组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水0.5 ml/只，中药组给予加味当归补血汤灌胃0.5 ml/只。给药后分别于10 d，20 d每组各取10只小鼠，末次给药前禁食16 h，自由饮水，称重。
       2.3  观察指标眶后静脉丛取血，肝素抗凝，腹腔注射麻醉，剥取肿瘤称重。测定各组小鼠全血黏度，包括低切变率和高切变率，测定血小板最大聚集率；按说明书操作应用流式细胞分析仪测定T细胞亚群（CD3+，CD4+）。取脾脏和胸腺称重，计算脾脏指数及胸腺指数。脏器指数和抑瘤率计数公式：脏器指数(mg/g)=脏器重量(mg)/体质量(g)；抑瘤率=(模型组平均瘤重-中药组平均瘤重)/模型组平均瘤重×100%。
       2.4  统计学处理采用SPSS11.5软件进行分析，计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有显著性意义。
       3  结果
       　　
       3.1  中药对荷瘤小鼠血液流变学的影响结果见表1。表1显示分组给药10 d和20 d后，中药组全血黏度（高切、低切）和血小板最大聚集率均较模型组降低（P＜0.05），20 d时血小板最大聚集率变化更明显（P＜0.01）；而模型组较空白组全血黏度和血小板最大聚集率升高（P＜0.05）；中药组和空白组各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。表1  各组小鼠血液流变学的变化(略)
       3.2  中药对荷瘤小鼠免疫功能的影响结果见表2。结果显示灌胃20 d后，中药组T细胞亚群（CD3+、CD4+）较模型组升高，差异有显著性（P＜0.05）；胸腺指数、脾脏指数中药组较模型组也升高（P＜0.05）；而中药组和空白组比较差异无统计学意义。灌胃10 d各项指标变化不明显（P＞0.05）。表2  各组小鼠免疫功能的变化（略）
       4  讨论
       　   
       全血黏度增高往往导致全身和局部微循环障碍，组织缺氧诱发肿瘤转移。在恶性肿瘤发生侵袭、转移过程中，脱落于血液循环中的肿瘤细胞能引起血小板聚集，血小板的聚集可促进肿瘤细胞向血管内皮接近，并为穿过血管壁进入周围组织形成转移灶提供条件。全血黏度的高切变率主要反映红细胞的变形性，而低切变率则主要反映红细胞的聚集性。本研究显示模型组较空白组全血粘度（高切、低切）及红细胞最大聚集率均升高，说明恶性肿瘤普遍存在血液高凝状态。研究显示血管内凝血是肿瘤形成的前奏，对血栓形成通路任何形式的干预，都可有效地抑制肿瘤发展［4］。本结果显示中药的抑瘤率达32.6%，中药组小鼠的全血粘度、血小板最大聚集率均较模型组降低（P＜0.05），说明加味当归补血汤能降低肿瘤小鼠升高的血黏度，具有抑制肿瘤转移及改善血液流变学作用。
       机体的免疫应答能力与肿瘤的发生发展有密切的联系，免疫系统具有限制肿瘤细胞生长能力。肿瘤细胞进入血液循环后，只有极少数能够逃脱宿主免疫细胞如NK细胞、巨噬细胞的杀伤，到达远处组织形成新的转移灶。参与抗肿瘤的免疫细胞包括T细胞、NK细胞、巨噬细胞等。T淋巴细胞不仅是细胞免疫的主要效应细胞，而且是主要的免疫调节细胞，其免疫调节作用是通过其亚群细胞实现的。T细胞亚群可以反映整个机体免疫功能的状态，CD3+T细胞代表成熟淋巴细胞总数，CD4+T细胞具有增强和扩大免疫细胞的功能。CD4+T细胞往往协助B细胞进行分化和产生抗体，参与促进细胞介导的免疫应答［5］。胸腺和胰腺为机体免疫器官，是免疫细胞产生的场所，因此其指数也可反映机体免疫功能。本研究显示中药组T淋巴细胞亚群（CD3+，CD4+）、胸腺指数、脾脏指数均明显高于模型组。说明加味当归补血汤能提高机体免疫功能，增强免疫细胞对肿瘤的杀伤作用。
       
       加味当归补血汤是在补血汤的基础上添加灵芝、补骨脂、鸡血藤组成。黄芪、灵芝补气；当归养血活血。该方具有益气养阴、活血化淤的功效。中医认为，肿瘤的形成是机体正气不足而后邪气踞之所致,“正气虚”伴随着肿瘤发生、发展、治疗和预后的全过程。高凝状态属中医血淤证范畴。血液流变学所表现出来的浓、粘化是肿瘤血淤症本质的客观反映，因此淤血与血液流变学之间有着内在联系，化瘀治法与西医降低血粘度的治疗一致。
       
       现代药理研究表明当归、灵芝中的有效成分具有免疫增强、抗肿瘤的作用［6,7］。当归多糖(ASDP)是一种新型的生物反应调节剂，高浓度的ASDP能明显增强荷瘤小鼠中ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用和NK细胞对靶细胞(K562)的杀伤作用。此外当归中提取的果胶多糖能够增强机体B细胞和巨噬细胞的免疫功能，抑制肿瘤细胞的转移［8］ 。黄芪能扩张血管、改善血液循环，黄芪作用于肿瘤后能激活抗氧化解毒酶SOD，消除超氧离子发挥抗肿瘤作用［9，10］。
       
       肿瘤的发生发展是一个多环节、多步骤、复杂的级联过程，受多种因素调控。中药及其成分干预肿瘤转移的机制表现为多靶点、多效应作用。加味当归补血汤可以降低荷瘤小鼠血液粘度，降低血小板聚集率，升高CD3+、CD4+，对肿瘤细胞的转移具有抑制作用，其抗肿瘤机制可能是改善血液流变学、增强免疫功能，确切的作用机制和作用环节还有待深入的研究。
       【参考文献】
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       ［3］龚继勇，郑应馨，齐宝凤，等.当归补血口服液对S180荷瘤小鼠X射线治疗的增效作用［J］.中国现代医生，2008，46（12）：39.
       
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