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       【关键词】  高效液相色谱法
        摘要：目的：建立妇科止带胶囊中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱条件：Alltima C18柱，流动相为乙腈0.1%磷酸十二烷基磺酸钠(50∶50∶0.1)，检测波长为265 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为室温。结果：盐酸小檗碱在0.099 8～1.097 8 μg检测浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9，n=6)，平均回收率为101.31%(RSD=1.31%) 。结论：该方法快速简便，结果准确，可以用于妇科止带胶囊的质量控制。
        关键词：妇科止带胶囊；高效液相色谱法；盐酸小檗碱
        Determination of the Content of Berberine Hydrochloride in Fukezhidai Capsules by HPLC
        WANG Hui， LIU Liangyu, CHEN Meirong, ZENG Wenli, LAI Juanhua
        (Jiangxi Institute of  Materia Medica,  Nanchang Jiangxi, 330029,China)
        Abstract:Objective:To establish an HPLC method for determination of berberine hydrochloride in Fukezhidai capsules.Methods:Alltima C18 was used as the column ,and the mobile phase was acetonitrile0.1%H3PO4sodium laurylsulfonate (50∶50∶0.1) with a flow rate of 1 ml/min. The detection wavelength was 265 nm.Results:There was a good linearity at the range of 0.099 8～1.097 8 μg of berberine concentration (r=0.999 9，n=6).The average recovery was 101.31％ with RSD 1.31%(n=6).Conclusion: This method is simple， sensitive with good repeatability.
        Key words:Fukezhidai capsules;HPLC;Berberine hydrochloride
        妇科止带胶囊由黄柏、椿皮、五味子、龟版、茯苓、阿胶、山药7味药材加工制成，具有清热燥湿、收敛止带的功效，用于慢性子宫炎、子宫内膜炎、阴道黏膜炎等引起的湿热型赤白带症的治疗。黄柏为方中主药之一，善清下焦湿热。《神农本草经》谓其“主五脏肠胃中结热、黄疸、肠痔，止泄痢、女子漏下赤白、阴伤蚀疮”。因此选择其主要有效成分盐酸小檗碱作为质量控制指标。文献报道测定盐酸小檗碱的方法很多，有重量法［1］、滴定法［2］、酸性染料比色法［3］、 薄层扫描法［4～6］， 而近年来应用较多的是高效液相色谱法［7～10］。本实验采用HPLC法测定方中黄柏中盐酸小檗碱含量，取得满意的效果。现报道如下。
           1仪器与试药
        大连依利特Hypersil液相色谱，UV200紫外可变波长检测器，PⅡ200高压恒流泵，HW2000色谱工作站。
盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：07139605)，妇科止带胶囊(自制)，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。
           2实验方法
        2.1色谱条件 色谱柱：Alltima C18(250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈0.1%磷酸十二烷基磺酸钠(50∶50∶0.1)；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长265 nm。
        2.2供试品溶液的制备取本品粉末0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸乙醇(1∶100)25 ml，密塞，称定重量，超声处理15 min，取出，放冷，再称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
        2.3对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加稀乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。
        2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。（下转第1003页）
           3 结果
        3.1系统适用性实验分别取盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液、缺黄柏的阴性对照溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图1。从图中可见，盐酸小檗碱峰保留时间为9.8 min左右，阴性对照在相对应位置无干扰峰，并且盐酸小檗碱峰在上述色谱条件下与其他组分分离较好，理论板数以盐酸小檗碱峰记为8 851。
        图1妇科止带胶囊系统适用性HPLC图谱（略）
        3.2线性范围的考察精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加稀乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，摇匀，分别精密吸取1，3，5，7，9，11 μl，按上述色谱条件依次进样，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，盐酸小檗碱的进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=2 571 489.407X－3 007.690 7，r=0.999 9，结果表明盐酸小檗碱在0.099 8～1.097 8 μg范围内进样量与峰面积线性关系良好。
        3.3 精密度实验精密吸取对照品溶液5μl，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0.83%。
        3.4样品溶液稳定性实验 取同一份样品溶液于0，2，4，6，12，24 h分别测定，结果表明样品溶液在24 h内稳定。
        3.5重复性实验取同一批样品，照样品含量测定方法，重复测定6次，计算，结果 RSD为1.27%，表明本方法重复性较好。
        3.6加样回收率实验取已知含量的本品内容物适量，精密称定，精密加入一定量盐酸小檗碱对照品,照样品含量测定方法测定，计算回收率。结果平均回收率为101.31%，RSD为1.31%，见表1。
        3.7样品测定照样品含量测定方法，分别对10批样品进行测定，结果见表2。
        表1妇科止带胶囊加样回收实验结果样号（略）
        表2样品含量测定结果mg样品批号（略）
           4讨论
        4.1实验过程中，我们分别对超声提取时间，提取溶剂进行考察，结果表明，用盐酸乙醇(1∶100)超声处理15 min即可，且峰形较好，故确定本文供试品制备方法。
        4.2样品测定结果表明，不同批次的样品含量差异较大，这可能与不同来源的药材有关。据《中国药典》2000年版Ⅰ部收载，黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.或黄檗Phellodendron amurense Rupr.的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”，有文献报道［11］川黄柏中小檗碱含量高于关黄柏，笔者考察了不同产地黄柏中盐酸小檗碱含量，结果其含量在0.80%～2.35% 之间。为控制制剂质量，笔者建议生产企业应固定黄柏药材的基源和产地。
           参考文献：
        ［1］日本药局.方解说书［M］.第九改正，1976：D118.
        ［2］徐国钧，徐珞珊.常用中药材品种整理和质量研究・黄柏类专题研究，第1册［M］.福州：福建科学技术出版社，1994：587605.
        ［3］孔广英，于立佐，于海鹏，等.酸性染料比色法测定牛黄益金片中总生物碱的含量［J］.中成药，1992；14(1)：1214.
        ［4］刘美丽，冯汉林.高效薄层扫描法测定大叶刺黄柏各部位生物碱的含量［J］.中草药，1991，22(7)：308309.
        ［5］潘扬，王永珍，任仁安，等.二妙丸、三妙丸与四妙丸中小檗碱和防己碱含量测定［J］.中成药，1990，12(5)：1112.
        ［6］李季缓．薄层扫描法测定白头翁止痢片黄柏中盐酸小檗碱含量［J］.牡丹江医学院学报，2004，25(3)：4142.
        ［7］王玉杰，朱红，王大成，等. RPHPLC法测定中药材黄柏中小檗碱的含量［J］.中国中药杂志，1995，20(7)：425426.
        ［8］王兰霞，白亚明，张伯荣，等.消癃片中小檗碱的HPLC测定法及其在制剂加工过程中的动态分析［J］.中成药，1994，16(3)：1314.
        ［9］简淑娟，翁雪萍．HPLC法测定黄柏胶囊中盐酸小檗碱含量［J］.中国药事，2002，16(10)：632633.
        ［10］孙少仪．黄柏胶囊中小檗碱的含量测定［J］.中医药研究，2000，16(3)：4849.
        (江西省药物研究所，江西 南昌330029)
       反相高效液相色谱法测定牙痛药水中胡椒碱的含量
        袁子民　程岚　王静 司保国 李瑞海 赵琳
        摘要：目的：建立牙痛药水中胡椒碱的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DiamonsilTM (钻石)C18(5 μm，4.6 mm×150mm)，流动相为甲醇水(75∶25)，柱温为30℃，检测波长为343 nm。结果：胡椒碱的进样量在0.018 6～0.148 8 μg的范围内呈现良好线性关系(r＝0.999 8)，平均加样回收率为98.08%，RSD为1.75%。结论：采用反相高效液相色谱法测定胡椒碱含量，方法简便、灵敏、准确，可用于牙痛药水的质量控制。
        关键词：牙痛药水；胡椒碱；反相高效液相色谱法；含量测定
        牙痛药水收载于部颁标准(WS3B020990),由荜茇、高良姜、细辛、丁香、冰片五味药组成，具有止痛杀菌，防蛀等功效。荜茇为方中君药，其有效成分为胡椒碱，为控制、提高成品质量，本文采用反相高效液相色谱法，测定胡椒碱含量，方法准确、快速、重复性好，为控制产品质量提供了依据。
        1仪器与试药
LC―10AP高效液相色谱仪(大连江申)；色谱工作站(大连江申)。胡椒碱对照品(中国药品生物制品检定所，07759702)；甲醇为色谱纯，无水乙醇为分析纯，水为重蒸馏水；牙痛药水(市售)。
        2方法与结果
        2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilTM (钻石)C18(5μm，4.6 mm×150 mm)，流动相为甲醇水(75∶25)，柱温：30℃，检测波长为343 nm，流速1 ml/min。
        2.2对照品溶液的制备精密称取胡椒碱对照品7.44 mg置100 ml棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，再精密量取5 ml至50 ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，配制成每1 ml含7.44μg的对照品溶液。
        2.3供试品溶液的制备精密量取本品1.0 ml，置25 ml棕色量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0.45μm)，取滤液，作为供试品溶液。
        2.4阴性干扰实验按处方量取缺荜茇的其它药材，按制法制备阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品液各5 μl，按上述色谱条件测定，结果阴性对照品溶液在与胡椒碱相同保留时间处无色谱峰干扰(见图1～3)。
        2.5 线性关系考察 精密吸取浓度为7.44 μg・ml1的胡椒碱对照品溶液2.5，5.0，10.0，15.0，20.0 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，胡椒碱对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为Y＝258 705X＋27.628，r＝0.999 8。结果表明，胡椒碱进样量在0.018 6～0.148 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
        2.6 精密度实验精密吸取同一供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定色谱峰峰面积，结果表明，精密度良好，RSD＝1.41% (n＝5)。
        2.7重复性实验精密称取同一批样品各5份，分别按供试品溶液制备方法操作，精密吸取各供试品溶液5μl，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果样品平均含量为0.142 mg・ml1，RSD＝2.2%(n＝5)。
        2.8稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，按0，2，4，6，8时间间隔，分别进样，测定色谱峰面积。结果表明，样品溶液在8 h内保持稳定，RSD＝1.76% (n＝5)。
        2.9回收率实验精密量取已知含量的样品(批号040202，胡椒碱含量0.134 4 mg・ml1 0.5 ml，各5份，分别置25 ml棕色量瓶内，分别精密加入胡椒碱对照品溶液(7.44μg・ml1)10.0 ml，加无水乙醇至刻度按供试品溶液制备法制备，依法测定。结果见表1。
        图1对照品HPLC色谱图（略）
        图2样品HPLC色谱图（略）
        图3阴性HPLC色谱图（略）
        表1回收率实验测定结果（略）
        测定结果提示：本方法回收率在96.1%～99.9%之间，RSD为1.75%，符合有关规定。
        2.10样品含量测定取3批样品，按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5 μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。结果见表2。
        表2样品测定结果mg・ml（略）
        3讨论
        3.1胡椒碱见光易分解，故需置棕色瓶内保存。
        3.2实验中曾选用甲醇水(80∶20)为流动相，测定结果提示，供试品中待测组分与相邻组分分离度不佳，后经多次筛选，选用甲醇水75∶25)为流动相［1］，供试品色谱中待测组分分离度良好。在确立的色谱条件下，方法重复性良好。
        参考文献：
        ［1］石文宏，田春霞，盛惟.反相高效液相色谱法测定沙棘止咳胶囊中胡椒碱的含量［J］.时珍国医国药，2004，15(2)：8889.
        (1.辽宁中医学院药学院，辽宁 沈阳110032；2.沈阳药科大学，辽宁 沈阳110015；3.大连天宇制药有限公司，辽宁 大连116021)