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       【关键词】  丹酚酸B；,,高效液相色谱法；,,大孔树脂
       摘要：目的筛选分离丹酚酸B的最佳大孔树脂。方法以高效液相色谱（HPLC）测得丹酚酸B含量为指标，对10种不同型号的树脂分别进行吸附与解吸性能考察。结果大孔树脂的吸附与解吸性能有较大差异，HPD450，D101，X5，HPD800，D4020，HPD700对丹酚酸B均有较强的吸附与可洗脱性，D101为最佳吸附树脂。结论 大孔树脂分离丹酚酸B方法是可行的。
       　　关键词：丹酚酸B；  高效液相色谱法；  大孔树脂
       丹酚酸（salvianolic acids）是中药丹参Salvia miliiorrhiza Bge.中的主要活性成分，具有抗动脉粥样硬化、保护心肌细胞、防心脑缺血损伤、抗血小板凝聚、抗肝纤维化、改善记忆、抗肿瘤等作用［1，2］。丹参药材中水溶性成分提取，多以丹参素或原儿茶醛为指标［3，4］，但两者在药材中的含量均较低，只有丹酚酸B为丹酚酸中最主要的有效成分［5］。目前对丹酚酸分离多采用醋酸乙酯萃取法，但该种方法溶剂消耗大，并存在溶剂残留。大孔树脂吸附是目前用于许多有效成分分离的良好方法，成本低、效率高，但至今尚无筛选大孔树脂分离丹酚酸B的报道。本人就大孔树脂对丹参酚酸B的吸附与解吸性能进行综合考察，以期找到一种分离丹参酚酸B的最佳大孔树脂。
       　1  材料与仪器
       1.1  材料与试药
       丹参药材，湖北产，60℃减压干燥后，粉碎过40目筛。大孔树脂：HPD450（弱极性）、HPD600（极性）、HPD700（非极性）、HPD800（中极性）（河北沧州宝恩化工有限公司）、D101（非极性）（天津海光化工有限公司）、D4020（非极性）、AB8（弱极性）、X5（非极性）、S-8（极性）、NKA9（极性）（南开大学化工厂）。乙腈为色谱纯；甲醇、甲酸为分析醇；丹酚酸B对照品（中国药检所，批号20031108）。
       1.2  仪器 分离色谱柱（20 mm×500 mm）；Agilent 1100高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱Kromasil C18(250 mm×4.6 mm)/5μm。
       　　2  方法
       2.1  丹参提取液的制备    丹参药材粉，加10倍量70%乙醇50℃浸提1 h，过滤后滤渣再加8倍量70%乙醇50℃浸提30 min，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/3，用10%HCl调pH至3.0，静置，离心去沉淀（4 000 r・min1）。保留上清液，并测定其中的丹酚酸B含量。
       2.2  大孔树脂吸附 各种大孔树脂经乙醇、5%盐酸和5%氢氧化钠顺序浸泡3~5 h后，以水洗至pH中性。量取丹参提取液100 ml各10份，分别加入HPD450，HPD600，HPD700，HPD800，D101，D4020，AB8，X5，S8，NKA9树脂10 g，静态吸附24 h。过滤，滤液测定丹酚酸B含量，计算吸附率。
       2.3  树脂解吸吸附后的树脂，分别用水、30%，50%，70%乙醇各100 ml淋洗，收集淋洗液，测定丹酚酸B含量，计算各溶液解吸率。解吸率为解吸量占吸附量的百分率。
       2.4  丹酚酸B的含量测定
       采用高效液相色谱法。流动相：乙腈∶甲醇∶水∶甲酸（20∶55∶24∶1），柱温30℃, 进样量10 μl，流速1 ml・min1，运行时间20 min，检测波长276 nm。丹酚酸B的保留时间为15.3 min，分离度大于2.0，理论塔板数不低于5 000。
       .4.1  标准曲线制备  
       精密称定丹酚酸B对照品23 mg，水溶解并定容50 ml。分别吸取对照液0，0.31，0.62，1.25，2.5，5，10   ml，加水定容至10 ml，分别得到0，0.014 4，0.028 8，0.057 5，0.115，0.230，0.460 mg・ml1对照液梯度，进样高效液相色谱仪。以峰面积X为横坐标，浓度Y为纵坐标，绘制标准曲线。Y=0.000 106X+0.005 464，r=0.999 9。表明丹酚酸B在0~0.460 mg・ml1范围内具有良好的线性关系。
       2.4.2  样品测定吸取样液2 ml，加水溶解并定容至100 ml。过滤，滤液过0.45 μm微孔滤膜，进样高效液相色谱仪，按标准曲线制作方法测定峰面积，计算样液的丹酚酸B含量。
       　　3  结果
       3.1  各种树脂对丹酚酸B的吸附性能比较  经测定，丹参提取液的丹酚酸浓度为 24.056 mg・ml1，各种树脂对其均有吸附，吸附率均在70%以上。在所试树脂中，除AB8和NKA9外，其它均表现良好的吸附性，吸附率大于90%。结果见表1。吸附能力排序为：D101> S-8> HPD700> HPD450> HPD800> X5> D4020>  HPD600> AB8> NKA9。表1  不同树脂对丹酚酸B的吸附与解吸率（略）
       3.2  各种树脂的解吸性能 S8和NKA9树脂在低醇洗脱液下即解吸大部分，而其它树脂较少解吸，只有提高乙醇浓度 50%以上才有较多的解吸。总解吸率排序为： HPD450> D101> X5>HPD800>D4020> HPD700> HPD600> AB8> NKA-9 >S8。各种树脂对于解吸所需醇浓度有较大差异，如D101和HPD450在50%以上才有较大解吸，而D4020在50%醇浓度以下即有较大解吸。综合解吸与吸附能力，除HPD600，AB8， NKA9，S8外，其它均可作为丹酚酸B的分离用树脂，D101为最佳吸附与解吸树脂。
       　　4  讨论
       4.1  大孔树脂法作为分离丹酚酸B的方法是方便可行的，通过吸附可将提取液中的酚酸B富集，通过不同浓度醇洗脱，可得到不同纯度的丹酚酸B产品。由于树脂可再生，因而可反复使用，故而是分离丹酚酸B的良好方法。
       4.2  本实验对丹酚酸B的吸附和解吸进行了静态考察，通过吸附解吸，筛选出适合的树脂。 但为了结合生产，采用大孔树脂柱，提取液的吸附和解吸处在流动状态下，其参数有所变化，因此下步实验中需进一步考察大孔树脂对丹酚酸B的动态吸附状况。
       　　参考文献：
       ［1］林  佳，徐丽珍，李  琰，等. 不同产地丹参中丹参酮ⅡA的含量比较［J］.中国中药学杂志，2002， 27(2):153.
       ［2］吴世蓉. 不同产地丹参其主要化学成分的分离与测定［J］.基层中药杂志，2002，16(3):24.
       ［3］黄诒林，张均田. 丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用［J］.药学学报，1992， 27(2): 96.
       ［4］王文祥， 周巧霞，蒋木岗，等. 比色法测定丹参及提取物水溶性总酚的改进［J］.中草药，2001， 32(8): 711.
       ［5］张启伟， 张  颖， 李计萍， 等. 高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B［J］.中国中药杂志， 2001，26(12): 848.
       (华南理工大学・绿色化学产品技术广东省重点实验室，广东 广州  510640）
       作者简介：叶  勇(1969)，男(汉族)，安徽宁国人，现任华南理工大学讲师，博士学位，主要从事中医药抗肿瘤研究工作.