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       【关键词】  清肝胶囊；,,水提工艺；,,正交实验设计
       摘要：目的优选清肝胶囊水提工艺的最佳条件。方法应用正交实验设计，以浸膏得率和黄芪甲苷含量为综合指标。结果优选出最佳水提工艺为加12倍量水，浸泡3 h，煎煮4次，2 h/次。结论 该工艺稳定性好，浸膏得率和黄芪甲苷含量高，适合工业生产。
       关键词：清肝胶囊；  水提工艺；  正交实验设计
       Optimization of Process for  Water Extraction of Qing Gan Capsule
       FU Wenhuan, GUO Lianyu, QIAO Qingbin, ZHOU Li, WANG Yueqi
       (1.Huashan Hospital, Shanghai 200040, China; 2.Beijing University of TCM, Beijing 100029, China)
       Abstract：ObjectiveTo optimize the conditions for the water extraction of Qing Gan Capsule.MethodsThe extraction process was studied by orthogonal design with the extract yield and astragaloside Ⅳ content as markers.ResultsThe optimum process was : add 12 times water, soak for 3 hours, decoct 4 times and 2 hours every time.ConclusionThis process is stable. Extract yield and astragaloside Ⅳ content is higher and this procession is suitable for production.
       Key words：Qing Gan Capsule;  Extraction process;  Orthogonal design
   
　　清肝胶囊处方来源于临床经验方，由黄芪、白术等中药组成，具清利湿热、活血软坚之功。临床主治急、慢性肝炎证属肝郁脾虚，湿热内蕴，络脉瘀阻者。为方便临床应用，将其开发为便于携带和服用的胶囊剂。根据药材特性及活性成分的性质，对处方中药材分别采用水提法和醇提法。其醇提工艺我们已经报道 ［1］。考虑黄芪等药材中的主要有效成分为皂苷等水溶性成分，故对这部分药材采用水提工艺。本文应用正交设计法，以黄芪甲苷为对照品，采用高效液相色谱蒸发光检测法［2~4］测定水提液中黄芪甲苷的含量，结合浸膏收率为综合指标，筛选最佳的水提条件。
       　　1  仪器和试药
       Waters 600型高效液相色谱仪；Sedex75型蒸发光检测器（ELSD）；Millennium色谱工作软件（美国沃特斯公司）； FA1104型电子天平；液相用甲醇为色谱纯；水为高纯水；其余试剂均为分析纯。黄芪甲苷（供含量测定用对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号0781200210）。
       实验用黄芪药材购自北京同仁堂药店，经本室鉴定为豆科植物膜荚黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Beg. 的干燥根。
       　　2  方法
       2.1  正交实验设计根据预实验，考虑剂型因素，选定加水量、煎煮时间、煎煮次数、浸泡时间作为考察因素。以黄芪甲苷含量和干浸膏得率为指标综合评分，应用L9(34)正交实验表进行实验。重复实验1次以计算误差。因素水平安排见表1。表1  水提工艺因素水平（略）
       2.2  干浸膏得率的测定精密称取药材9份，每份67.5 g，按 L9(34)正交表所列实验条件煎煮，合并各次水提液，浓缩定容至250 ml。精密移取100 ml，置于已知重量的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，减去皿重，计算干浸膏得率。结果见表2。表2  水提工艺正交实验结果（略）
 
　　2.3  黄芪甲苷的含量测定方法
       2.3.1  色谱条件 色谱柱：Symmetryshield RP18柱（5μm， 4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈水（1∶2）；流速1.0 ml/min；检测器：ELSD。
       2.3.2  线性范围考察精密称取黄芪甲苷对照品1.08 mg，于1 ml容量瓶中溶解定容，制成含黄芪甲苷1.08 mg/ml的标准溶液，分别吸取此标准溶液1，3，5，7，10 μl注入液相色谱仪，以峰面积的自然对数对进样量的自然对数进行线性回归，得回归方程：Y=1.440X-12.577，r=0.999 9。
       表明黄芪甲苷在1.08～10.80 μg范围内呈良好的线性关系。
       2.3.3  样品供试液的制备精密量取定容后的水提液70 ml，水浴浓缩至20~30 ml，转移至100 ml分液漏斗中，以水饱和正丁醇萃取3次，60 ml/次；合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，60 ml/次；弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，放冷。通过AB8型大孔吸附树脂（内径1.5 cm，长12 cm），以水150 ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇90 ml洗脱，弃去40%洗脱液，继用70%乙醇150 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2 ml容量瓶内定容，摇匀，0.22 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。
       2.3.4  测定方法精密吸取样品供试液5 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算其自然对数值并代入回归方程，计算样品中黄芪甲苷含量。结果见表2。方差分析见表3。表3  方差分析（略）
       　　3  实验结果
       由表2 的R值和表3 的F值可以看出，各因素对实验结果的重要性为C＞B＞A＞D。方差分析结果表明，A，B，C因素对结果有极显著意义（P＜0.01），D因素有显著意义（P＜0.05）。因此最佳水提工艺应该采用A1B3C3D3，即加12倍量水，浸泡3 h，煎煮4次，2 h/次。该工艺与正交实验中的3号实验工艺完全相同，且重复两次实验中该实验的浸膏得率与黄芪甲苷含量均为最高值，故最终确定该工艺条件为最佳的水提工艺。
       　　4  讨论
       本实验通过正交实验法考察了清肝胶囊的水提工艺，采用浸膏得率和黄芪甲苷含量综合评分的办法优选出最佳工艺，为整体制剂工艺的确定打下了基础。
       　参考文献：
       ［1］付文焕，周  莉.GW胶囊醇提工艺的优选［J］.中国中医药学报，2002，（增刊）：29.
       ［2］龙恩武，张一萍.黄芪及其制剂中黄芪甲甙测定方法研究进展［J］.时珍国医国药，2000，11（9）：854.
       ［3］李  江，李颖倩.黄芪甲甙分析方法研究概况［J］.北京中医，2000，19（4）：50.
       ［4］赵灵芝，朱丹妮，严永清，等.HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量［J］.药物分析杂志，1999，19（6）：403.
       作者简介：付文焕(1974)，女(汉族)，山东临沂人，现任复旦大学附属华山医院主管药师，硕士学位，主要从事新药开发工作.
       1.复旦大学附属华山医院，上海  200040； 
       2.北京中医药大学，北京  100029