高效液相色谱法测定滋肾清肝颗粒剂中芍药苷的含量
作者：周继法， 朱育凤， 吴旭彤
《时珍国医国药》 2006年 第8期
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【关键词】 滋肾清肝颗粒剂；,,,芍药苷；,,,高效液相色谱法
摘要：目的对滋肾清肝颗粒剂进行含量测定。方法以芍药苷指标成分，应用高效液相色谱法对其进行定量测定。结果含量测定方法中芍药苷分离较好，此法分离效果好，重现性好，精密度高，加样回收率为99.48%，RSD=1.86%，令人满意。结论此法可用于滋肾清肝颗粒剂的质量控制。
关键词：滋肾清肝颗粒剂； 芍药苷； 高效液相色谱法
滋肾清肝颗粒为临床经验方，主要由熟地、钩藤、山茱萸、白芍、牡丹皮、麦芽等组成，具有滋肾清肝的功效。适用于高催乳血症（HPRL），临床表现为泌乳、闭经、不孕、绝经期症状等。经我院妇科的多年使用，疗效确切。为了对其制剂进行质量控制，我们以芍药苷为指标成分，应用高效液相色谱法对其进行定量测定，以期为其质量标准的制定提供实验依据。
1 药品与仪器
1.1 药材熟地黄、钩藤、山茱萸、白芍、牡丹皮、山药、柴胡、栀子、麦芽、甘草均经过本院药剂科朱育凤副主任药师鉴定，其质量符合2000年版《中国药典》有关项下的规定。
1.2 试药乙腈，为色谱纯，德国Merck公司；芍药苷为含量测定用，购于中国药品生物制品检定所；其它试剂均为分析纯。
1.3 仪器Waters高效液相色谱仪（Waters检测器，Waters510泵，Waters746积分仪，Waters梯度控制器，美国Millipore公司），ZW柱温控制器及ZW柱温箱；Hypersil C18（英国）。Satarius BP1100十万分之一电子分析天平（德国）。
2 方法
2.1 色谱条件与系统适用性实验以十八烷基键合硅胶为填充剂，乙腈∶水（12∶88）为流动相；检测波长为230 nm，理论塔板数以芍药苷峰计算不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷减压器中干燥24 h的芍药对照品10 mg，置100 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备精密称取样品1.0 g，置25 ml量瓶中，用稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密称定重量，超声提取30 min，放冷，精密称重，补足减失的重量，过滤，取续滤液10 ml，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.4 可行性实验按处方量制备缺白芍、牡丹皮药材对照样品，照样品测定方法项下操作，比较了样品、芍药药材、芍药苷对照品、阴性对照品的色谱图，结果阴性对照样品色谱图中芍药苷峰相应的保留时间处无干扰，样品中芍药苷与其他组分色谱峰能较好分离，其分离度大于1.5。见图1。
2.5 线性关系考察分别精密吸取芍药苷对照品溶液3，6，9，12，16，20 μl进样，以峰面积积分值为纵坐标（Y），芍药苷的浓度为横坐标（Z）进行线性回归，得回归方程：Y=2 652 239.359X-29 480.198，r=0.999 9，线性范围：0.15~1.03 μg。
2.6 精密度实验精密吸取对照品溶液8 μl，重复进样5次，测定对照品溶液峰面积，计算RSD=0.55%（n=5）。
1.滋肾清肝颗粒样品 2.芍药药材 3.阴性样品 4.芍药苷标准品
图1 HPLC色谱图（略）
2.7 重现性和稳定性实验取同批样品5份，按样品测定项下所述方法测定，结果RSD=2.35%（n=5）。取其中1份供试品溶液在室温下放置2，4，6，8，10，24 h测定，结果24 h内峰面积基本不变，RSD=1.66%（n=6）。
2.8 样品测定精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，以上述色谱条件分析测定，分别测定3批样品。结果见表1。
表1 滋肾清肝颗粒芍药苷含量测定结果（略）
2.9 加样回收率实验精密称取已知含量的同一批样品，精密加入一定量的芍药苷对照品，按样品测定项下所述方法测定，计算回收率。结果见表2。
表2 加样回收率实验结果（略）
3 小结
3.1 在芍药苷的HPLC实验中，曾对不同比例的流动相作了比较：乙腈 水（20∶80）；乙腈 0.1%磷酸溶液（15∶85）；氯仿 醋酸乙酯 甲醇 甲酸（40∶5∶10∶0.2）；甲醇 水（1∶3），结果发现有峰较宽，拖尾及杂质峰干扰等现象，且考虑到流动相酸度对柱子的影响比较大，经过摸索，我们发现流动相比例为乙腈 水（12∶88）时，具有较好的峰形，亦无拖尾现象，分离效果佳。
3.2 含量测定方法中芍药苷分离较好，重现良好、精密度高、加样回收率满意，此法可用于滋肾清肝颗粒剂的质量控制。
(江苏省中医医院，江苏 南京 210029)