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       【关键词】  复方胆通片；,,高效液相色谱；,,色谱指纹谱
       摘要：目的建立复方胆通片的高效液相色谱（HPLC）指纹谱，对不同厂家生产的复方胆通片所含的组分以绿原酸为参照进行综合评价，为复方胆通片的质量鉴定提供依据。方法采用HPLC法，将获得的色谱数据转化为指纹谱，据此对复方胆通片的质量进行分析鉴别。结果确定了12强峰和21个色谱峰为复方胆通片的特征指纹峰。结论不同厂家生产的复方胆通片中绿原酸的含量相差较大。该方法专属性强、重现性好，可为复方胆通片的质量控制提供依据。
       关键词：复方胆通片；  高效液相色谱；  色谱指纹谱
       Study on HPLC Fingerprint Chromatogram of Fufangdantong Tablets
       BAI  Xuemei，ZHANG Shimin，TIAN Jiaming
       （Laboratory Centre of Hebei North University，Zhangjiakou 075029，China；Traditional Chinese Medical Department of Hebei North University，Zhangjiakou 075029，China）
       Abstract：ObjectiveTo establish the HPLC fingerprint spectrum of Fufangdantong tablets for different areas.MethodsHPLC results of Fufangdantong Tablets were used to evaluate and distinguish areas Fufangdantong Tablets from different factory.ResultsThere are 21 major features of HPLC fingerprint and 12 strong peaks of the Fufangdantong tablets.ConclusionThere are different areas of their chlorogenic acid quantity contained. This method is good at its specialization and restoration,and it can provide scientific reference to controlling the quality of Fufangdantong Tablets for different areas.
       Key words：Fufangdantong Tablets；  HPLC；  Fingerprint spectrum
   
　　复方胆通片是临床常用的治疗急慢性胆囊炎、胆管炎、胆囊、胆管结石并感染、胆囊术后综合征、胆道综合性疾患等的中成药。具有清热利胆，解痉止痛的作用。由茵陈、胆通、溪黄草、穿心莲、大黄组成。茵陈是方剂中的君药，其具有利胆作用的有效成分为篙属香豆精(scoparone)，即6，7二甲氧基香豆精(6，7dimethoXycoumarin)、绿原酸等，而其制剂中的胆通即为篙属香豆精，所以我们采用HPLC技术对不同厂家生产的复方胆通片所含的组分以绿原酸为参照进行了横向比较，建立了复方胆通片指纹谱，为复方胆通片真伪鉴别和品质评价提供依据。
       　　1  仪器与材料
       HPll00高效液相色谱系统(脱气机、四元泵、柱温箱、紫外检测器，HPll00 3D化学工作站，美国Agilent公司产品)，乙腈为色谱纯(天津科密欧)，磷酸为分析纯(河北省保定化学试剂厂)，水为三蒸水，0.45 μm针筒式滤器(购自北京超声技术开发公司)，绿原酸标准品购自中国药品生物制品检定所，各厂家生产的复方胆通片购自张家口市各药店。
       　　2  方法
       2.1  HPLC指纹谱原理［1~3］在给定的条件下，样品中各组分的相对保留值，相对峰 面积值为各组分所特有，如利用各样品的相对保留值和相对峰面积值建立样品的HPLC相对保留值指纹谱，通过对样品HPLC色谱的数据化可产生一系列的参数，包括重叠率，n强峰，特征峰群及特征指纹峰检出率等，为鉴定药品真伪和区分药品的品质提供客观依据。
       2.1.1  相对保留值a的计算我们选择出峰时间居中，峰面积较大，各样品均存在的绿原酸的色谱峰为参照峰，其a值为1，求出样品所有峰的相对保留值a。 a=tRi／tRa(tRi一各组分的出峰时间，tRa一绿原酸的出峰时间)
       2.1.2  a值窗口的设定由于保留时间受各种实验因素的影响，每一次实验数据不可能完全一致，故对每个峰位的a值设定窗口为2％，也是每个峰位a值取可信限在±2％的范围内。
       2.1.3  指纹谱的建立按a值大小次序排列，在每个a项下标出该组分的相对 面积值(RA)。RA是以1#复方胆通片的总面积为分母，样品中各色谱峰面积为分子，计算得到各色谱峰的相对面积值。各样品中具有相同a值的组分，通过RA的比较，就可以清楚地了解各种样品中该组分的含量多少。这样，由a值和RA值组成样品的相对保留指纹谱。RA=(样品中各峰的面积值/1#复方胆通片的总面积)×100
       2.1.4   峰重叠率 峰重叠率是在2个相互比较样品的各自峰数及两者共有峰(指a值相同的峰)的基础上，考虑从质的角度上说其相关性，计算方法是以某样品的指纹谱为基准，以其峰数与被比较样品的峰数之和为分母，两者共有峰的两倍为分子，求得百分率即为峰的重叠率。
       2.2  色谱条件色谱柱，HypersilC18(200 mm×4.6 mm，5 μm)，检测波长 280 nm，柱温30℃，流动相 A液0.4％磷酸水溶液，B液乙腈，进样量20 μl，按表l进行洗脱。
       表1  流动相线性（略）
       2.3  绿原酸标准溶液制备 精密称取一定量的绿原酸标准品，用0.4％磷酸水溶液乙腈95∶5定容至，配成0.120 0 mg・ml1的原液备用。
       2.4  供试液的制备将不同厂家生产的复方胆通片碾碎，精密称取各样品粉末1.000 g，用0.4％磷酸水溶液乙腈=95∶5定容至10 ml，超声提取50 min，过0.45 μm针筒式滤器，放4℃冰箱备用。
       2.5  样品分析 将不同厂家生产的复方胆通片制成的供试液，按上述色谱条件进样分析(图1)，得各样品的HPLC图谱及各色谱峰的数值。
       　　3  结果
       3.1   相对保留值指纹谱的建立根据上述公式计算各样品色谱峰的a值和RA值，凡是a值相同或相近，最大吸收波长、比吸收值都相等的峰，即可认为同一化合物峰，将各个样品每个峰的RA列在相应的a值项下，某a值项无相应峰的样品其RA值为0，得到相对保留值指纹谱。结果见表2。
       表2   不同厂家复方胆通片HPLC相对保留值指纹谱（略）
       3.2  样品之间的相似性 计算各个样品两两之间的峰重叠率并列表，组成反映样品间相似性的峰重叠率矩阵，该矩阵为对称矩阵，只列出一半即可。结果见表3。
       3.3  样品的HPLC的12强峰 每个样品均选出其中峰面积最大的12个峰排列成表，得样品的12强峰。结果见表4。
       3.4  特征指纹峰 根据样品中的12强峰及各色谱峰出现的频率，选出a值为0.24，0.42，0.60，0.74，1，1.08，1.22，1.27，1.38，1.42，1.53，1.63，1.70，1.81.92，2.12，2.18，2.28，2.36，2.44，2.87共21个峰为本实验所研究复方胆通片的特征指纹峰。现将样品的特征指纹峰检出情况列于表5中。
       表3    复方胆通片HPLC峰重叠率 （略）
       表4    复方胆通片HPLC 12强峰（略）
       表5    不同厂家复方胆通片HPLC特征指纹峰检出率（略）
       　　4  讨论
       本研究采用了HPLC技术，建立了复方胆通片的指纹谱。在实验色谱条件下，能得到较多的色谱峰且分离效果好，椐此所得的相对保留值也十分稳定，所建立的色谱指纹谱具有较大的稳定性和可控性。我们认为该方法能得到复方胆通片所含组分的大量信息，其指纹谱能反映复方胆通片的内在品质。    从上述各表可以看出，不同厂家生产的复方胆通片的化学组分和含量相差较大。可能受方剂中各味中草药的产地、采收时期及其生产工艺等的影响，所以，为控制中成药的质量，应建立从原材料采购到工艺生产的一整套质量标准。
       　　参考文献：
       ［1］  洪筱坤，王智华．色谱指纹谱在中药质量标准研究中的应用［J］.中成药，2001，23(3)：157.   
       ［2］  沙  明，王嘉仡，曾爱民，等．HPLC指纹谱技术在中药新药质量控制中的应用［J］.中草药，2002，33(2)：181.
       ［3］  白雪梅，吴健翎，罗  强，等．金银花HPLC指纹图谱的研究［J］.中成药，2004，26（7）：521.
       (河北北方学院实验中心，河北 张家口  075029；  河北北方学院，河北 张家口   075029）