文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  5′
       摘要：目的测定蛹虫草菌丝体中5′CMP(5′胞苷酸)、5′UMP (5′尿苷酸)、5′GMP(5′鸟苷酸)、5′IMP(5′嘌呤核苷酸)、5′XMP(5′黄嘌呤核苷酸)、5′AMP(5′腺苷酸)等六种核苷酸的含量。方法用反相高效液相色谱法，以SHIMADZU C18(150 mm×4.6 mm I.D, 5μm)为色谱柱；以缓冲盐(KH2PO4H3PO4)甲醇(99.5∶0.5, V/V, pH3.75)体系为流动相，在流速0.8 mL/min，柱温26°C，检测波长260 nm，进样量20 μl的条件下对样品中5′核苷酸的含量进行了分析测定。结果蛹虫草菌丝体中上述6种核苷酸含量分别为173.0，824.9，92.9，2114.0，79.6，231.4 μg/g。结论 该法快速简便，重现性好，能有效的测定样品中核苷酸类成分。
       关键词：5′核苷酸；  蛹虫草菌丝体；  高效液相色谱
       Determination of Flavour Nucleotides Content in Cultured cordyceps militaris(Fr.) Link mycelium by High Performance Liquid Chromatography
       LI Yajie， GAO Yanju， ZHAND Guoying， HE Shuai，LING Jianya
       （School of Life Science, Shandong University, Jinan 250100, China; Dezhou People"s Hospital, Dezhou 253000, China; Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014, China）
       Abstract：ObjectiveTo determine Flavour nucleotides (5"IMP、AMP、GMP、UMP、IMP、XMP) content in Cultured cordyceps militaris(Fr.) Link mycelium.MethodsAgilent 1100, Shimadzu C18(150 mm×4.6 mm I.D,5 μm) and a UV detector at 260nm and 0.2 mol/L KH2PO4-H3PO4-methanol(99.5∶0.5, V/V, pH 3.75) solution as eluent. Injection 20 μl.ResultsThere are 173.0, 824.9, 92.9, 2114.0, 79.6, 231.4 μg/g  in the Cultured cordyceps militaris(Fr.) Link mycelium. ConclusionThe method is simple, rapid, sensitive and reproducible.
       Key words：5" Nucleotides;  Cultured cordyceps militaris(Fr.) Link mycelium;   HPLC
   
　　蛹虫草(Cordyceps militaris)是虫草属的模式种，又名北冬虫夏草，其“味甘、性平”，有“益肺肾、补精髓、止血化痰”等功效［1］，多被认为可用作冬虫夏草的替代品，为人们所重视。研究表明，人工培育的蛹虫草含有大量的虫草酸、虫草素、氨基酸、微量矿物元素和生物碱，可镇静消炎、增强机体免疫力及抑制肿瘤生长，对肾炎、肝炎、哮喘、神经衰弱等疾病亦有明显疗效。核酸是生命科学中重要的生物大分子，在维持生命活动、提供遗传信息方面功不可没。单核苷酸作为核酸的组成单体具有明显的药理作用，以5腺苷酸为代表具有扩张末梢血管和降压作用，可以降低血脂、延缓衰老，亦可用于治疗冠心病、心肌梗塞及放射病［2］。同时，5′核苷酸对甜味有增效作用对咸酸苦腥味有消杀作用。5′鸟苷酸和5′肌苷酸是著名的强力助鲜剂［3］，在功能性食品的制造中可以采用天然含有核苷酸的原料组方，也可添加一定量核苷酸以强化产品的保健功效。迄今，用高效液相色谱法分析人工蛹虫草菌丝中的单核苷酸类物质尚未见报道。本文在优化的色谱条件下对蛹虫草样品中各种核苷酸进行分离，然后用二极管阵列检测器对各色谱峰进行分析鉴别，并用外标法定量得到准确可靠的定性定量分析结果。
       　　1  材料与方法
       1.1  仪器与试剂安捷伦高效液相色谱仪(Agilent 1100)，二极管阵列检测器。色谱纯甲醇、超纯水。蛹虫草菌丝体由山东大学生命学院菌种室提供；标准品：5′AMP(5′腺苷酸)、5′CMP(5′胞苷酸)、5′GMP(5′鸟苷酸)、5′UMP(5′尿苷酸)、5′IMP(5′嘌呤核苷酸)、5′XMP(5′黄嘌呤核苷酸)。
       1.2  色谱条件色谱柱：SHIMADZU C18(150 mm×4.6 mm I.D, 5 μm)；流动相：缓冲盐(KH2PO4H3PO4)甲醇(99.5∶0.5, V/V, pH3.75)；流速0.8 mL/min；紫外200~400 nm扫描，260 nm检测；柱温26℃；进样量20 μl。
       1.3  混合标样色谱分离准确称取一定量上述各标样，用超纯水溶解，用缓冲液定容单标浓度在0.01~0.05 mg/ml的系列混合标准溶液，经0.45 μm滤膜过滤后待用。混合标样的色谱图见图1。
       图1  混合标准品色谱图（略）       
       图2  蛹虫草菌丝体色谱图（略）
       1.4  样品制备及色谱分析称取虫草菌丝体0.500 g，加10 ml水，超声粉碎，在4 200 r/min下离心20 min。取上清液，用0.45 μm滤膜过滤后待用。取处理好的样品按设置好的色谱条件进样，其色谱图如图2。
       　　2  结果
       2.1  检测波长的选择经紫外扫描，6种核苷酸标准品的水溶液在190~500 nm波长范围内，多数核苷酸最大吸收波在260 nm附近，本文选择260 nm作为最大检测波长。
       2.2  流动相的确定在强酸(pH<2)及碱性(pH>8)条件下，核苷酸会分解变性，故必须在弱酸性或中性条件下进行测定。实验表明大部分组分的保留值随pH增加而不同程度的增大。当用流动相A:0.2 mol/L KH2PO4H3PO4缓冲盐溶液（pH=3.75）；流动相B：甲醇时，盐浓度增大使核苷酸的保留值增大，分离效率提高，对核苷和碱基影响较小。但盐浓度过大对仪器及柱子的腐蚀性也大，经实验确定为0.2 mol/L。
       2.3  核苷酸定量标准曲线、检测限、精密度及回收率各组分的定量标准曲线、检测限、精密度及回收率详见表1。
       表1  各组分的定量标准曲线、检测限、精密度及回收率（略）
       　3  结论
       用标准加入法对各核苷酸类组分进行定性，用标准曲线法计算样品中各种核苷酸的含量，计算结果见表2。
       表2  蛹虫草菌丝体中核苷酸种类及含量（略）
       实验结果表明，蛹虫草菌丝体中5′IMP含量较高，为2 114.0 μg/g，其次，为5′UMP（824.9μg/g）和5′AMP（231.4 μg/g），而5′GMP（92.9μg/g）和5′XMP（79.6μg/g）含量相对较低。本实验用反相高效液相色谱法对6种样品中的核苷酸类物质进行定性、定量分析，快速、简便、重现性好。该方法可以有效地应用于上述样品中核苷酸类物质的测定，为进一步开发利用蛹虫草菌丝体等珍贵药材提供了理论数据，亦可作为工厂化生产的质检手段予以应用。
       　参考文献：
       ［1］  中国医学科学院药物研究所.新华本草纲要［M］.上海：上海科学技术出版社，1988：496.
       ［2］  杨庆尧. 食用菌生物学基础［M］.上海：上海科学技术出版社，1981：202.
       ［3］  郑  集. 生物化学［M］.北京：高等教育出版社，1982：193.
       (山东大学生命科学学院，山东 济南  250100；山东省德州市人民医院  253000；山东中医药大学药学院，山东 济南  250014)