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       【关键词】  茄根
       摘要: 目的: 探讨茄根酸性组分的抗炎机理。 方法: 以淀粉诱导小鼠腹腔巨噬细胞，用LPS为刺激剂，诱导NF-kB的表达，再用NF-kB P65的抗体与其结合，用流式细胞术测定巨噬细胞表面NF-kB P65亚单位表达的荧光强度，反映NF-kB活化程度。 结果: LPS刺激12h后，NF-kB P65的表达明显增加，茄根酸性组分能显著抑制NF-kB的表达（P<0.01）。 结论: 抑制NF-kB的活化，可能是茄根酸性组分发挥抗炎作用的主要机理之一。
       关键词: 茄根; 酸性组分; 抗炎; 核因子kB; 机理
       The Influence of the Acidic Components of Aubergine root to the Murine Peritoneal Macrophages NF┐kB Activated by Lipopolysaccharide 
       WANG J un-zhi， SHEN Y ing-jun， YE H ong， SONG L i-qiong
   
    （1.Three Gorges University443002，China;2.Chengdu University of Tradition Chinese Medicine610075，China）
        Abstract: Objective:Research on the anti-inflammatory mechanism of the acidic components of aubergine root.Methods:Induced themurine peritoneal macrophages by the dissolubilty starch，activate the murine peritoneal macrophages with the Lipopolysaccharide（LPS），join theantibody of NF-kB P65，mensurate the fluorescence intensity with flow cytometry.Results:After12hours activated by Lipopolysaccharide，thw Compare With the model，the acidic components of aubergine root significantlyreduce content of the PGE
2 .Conclusion:The acidic components of aubergine root significantly inhibit the COX2activities.The effect of inhibit the COX2，may be a main anti-inflammatory mechanism f of the acidic omponents of aubergine root.
    
　　Key words: Aubergine root;The acidic components Anti-inflammatory Nuclear facfor-kB Mechanism
       茄根为土家族常用药物，具有祛风利湿、清热止血、散瘀消肿等功效。临床用于治疗牙痛、风湿痹痛、冻疮等［1］ 。酸性组分是茄根抗炎的主要有效部位，对多种炎症，如关节炎、牙周炎等具有良好的治疗效果。为探讨茄根酸性组分的抗炎机理，我们就茄根酸性组分对核因子kB（NF-kB）表达的影响进行了研究。
       　　1 实验材料
    
　　药品:实验用茄根采自湖北省长阳土家族自治县蔬菜基地，待收获完茄子后采挖茄根，除去地上部分，洗净，切成厚片晒干备用。茄根经三峡大学植物学教研室陈芳清教授鉴定为茄科植物Solamum melongena L。的根。碱提酸沉法制备酸性组分备用。DMEM培养基（BIBCO），新生小牛血清（BIBCO），脂多糖（LPS）（Sigma），花生四烯酸（Sigma），可溶淀粉（浙江湖州市菱湖食品化工厂）。
动物:C57BL/6小鼠，全雄，体重20～25g;由华中科技大学实验动物中心提供，合格证号:TJLA-2003-41。
   
　　仪器:BeckMan coulter EPICS XL-4型流式细胞仪（美国贝克曼仪器公司），Sanyo Mc0175型CO
    
　　2 培养箱（日本三洋公司），BCM-1000型超净工作台（苏州净水仪器设备厂），石英SZ-93型自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂），电子天平MA200（上海第二天平仪器厂），YXQ-SG41.280型电热手提式压力蒸汽灭菌器（上海医用核子仪器厂），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），细胞培养板，0.22μm过滤器（华美生物工程公司）。
 
　　2 实验方法及结果
    
　　2.1 含药血清的制备［2］
       wistar雄性大鼠按体重随机分为4组。
   
　　分别为正常血清对照组，阳性对照组（消炎痛），药物高、低剂量组。灌胃给药2次/d，连续5d。末次给药后1h，股动脉取血，分离血清，56℃水浴灭活30min，0.22μm滤膜除菌，加入DMEM培养基，配成20%含药血清培养液，-20℃保存备用。
    
　　2.2 腹腔巨噬细胞的培养
       C57BL/6小鼠腹腔注射1%的可溶性淀粉，每只l ml。3天后断头处死。腹腔注射Hank"s液8ml/只，无菌条件下洗出腹腔细胞1000r/min离心8min，细胞用Hank"s液洗1次，作细胞计数，用含10%新生小牛血清的DMEM培养基调整细胞浓度至106 cell/m1。将细胞接种于4孔培养板中，每孔3ml，37℃，5%CO2 。培养箱内培养6h。
    
　　2.3 NF-kB的测定［3］
       用Hank"s液洗去末贴壁细胞，加入不含新生小牛血清的培养基，饥饿12h。换液，于培养板中加入3ml含药血清培养基，分组如下:阴性对照组、模型对照组加入含正常动物血清的培养基，阳性对照组（消炎痛）、药物高、低剂量组分别加入含药血清培养基;除阴性对照组外，其余各组同时加入刺激剂LPS，使其终浓度为1μg/ml培养12h:每孔加入细胞消化液（0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA1∶1混合）2ml进行消化，待细胞变圆、悬浮后，取消化液1500r/min离心5min;弃上清液，细胞用PBS洗涤2次。加入1∶50兔抗人NF-kB P6550μl置4℃冰箱内过夜。用PBS洗涤3次，加入1∶100稀释的FITC标记的羊抗兔IgG50μl，4℃作用2h。用PBS洗涤2次，细胞移入专用管中，用流式细胞仪检测其平均荧光强度。结果见表1，图1。 表1 对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NF-kB表达的影响 （略）
   
　　3 讨论
    
　　NF-kB（nuclear factor-kB）是一个多功能核转录因子，具有广泛的生物学活性，激活后可促进细胞因子、粘附分子、趋化因子等基因转录，在炎症反应中起重要作用。本研究以淀粉诱导的小鼠腹腔巨噬细胞为对象，以LPS为刺激剂，诱导NF-kB的表达，再用NF-kB P65的抗体与其结合，用流式细胞术测定巨噬细胞表面NF-kB P65亚单位表达的荧光强度，反映NF-kB活化程度;通过茄根酸性组分含药血清使荧光强度降低的程度，判断茄根酸性组分对NF-kB的抑制作用。结果表明LPS刺激12h后，NF-kB P65的表达明显增加，与空白对照组比较有显著性差异;茄根酸性组分与模型组比较，能显著抑制NF-kB的表达（P<0.01见表1）。提示茄根酸性组分发挥抗炎作用的分子机制可能在于抑制NF-kB的活化，从而控制了细胞因子、炎症相关酶如PLA2、环氧酶、5-脂氧酶、iNOS等基因的转录及蛋白质的合成，进一步抑制各类炎症介质的分泌与释放。
        茄根资源丰富易得，茄根酸性组分临床用量小，疗效显著，毒副作用小，可望开发出NF-kB抑制剂，值得进一步研究和利用。
       　　参考文献:
    
　　［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草，第7册，第1版［M］.上海:上海科学技术出版社，1998:307-309.
        ［2］ 孟 李，王宁生.血清药理学研究含药血清的制备方法研究［J］.中药新药与临床药理，1999，10（5）:292-293.
        ［3］ 赵 锦，吴静安.核因子kB在人角膜基质细胞中的表达［J］.中华眼科杂志，1999，35（1）:13-15.
       作者简介: 汪 植（1966-），男（土家族），人，现任三峡大学副教授，博士学位，主要从事中药抗炎及免疫调节作用研究工作.
       （1.三峡大学，湖北宜昌 443002; 2.成都中医药大学，四川成都 610075）
       收稿日期: 2005-03-08