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       【关键词】  中药；,,银屑病；,,免疫调节
       摘要：目的观察中药乐银煎膏剂治疗斑块型银屑病的临床疗效和对实验小鼠细胞免疫及阴道上皮细胞的影响。方法通过临床疗效观察和将小鼠迟发性超敏处理后给予免疫抑制剂和中药，观察其细胞免疫状态；观察中药对实验小鼠阴道上皮细胞增殖的抑制作用。结果该中药临床总有效率为 85% ，并能增加小鼠免疫功能及对小鼠的阴道上皮增殖有一定的抑制作用。结论乐银煎膏剂治疗斑片状银屑病有效，对小鼠免疫功能有调节作用及具有抗有丝分裂作用和微弱的抗肿瘤作用。
       关键词：中药；  银屑病；  免疫调节
       Clinical and Experimental Study on Treatment of Psoriasis Maculata by Leyin Cream
       YANG Hongpu, HU Renjie, YUANG Xiaofeng, YU Suping
       (Changzheng Hospital, Tianjin 300120, China; Tianjin Municipal Institute of Medical Sciences, Tianjin 300070, China)
       Abstract:ObjectiveTo observe the Leyin Cream therapeutic effect on Psoriasis Enplaquesand  and its action  on cellular immunity and vaginal epithelial cell of experimental murine. MethodsObservation of curative effect and  the experimental murine were cured by delayed hypersensitive method and with immunodepressant and the Leyin Cream to observe cellular immunity of experimental murine and the Leyin Cream action on vaginal epithelial cell of experimental murine. ResultsEfficacy rate of the cream was 85% and it was able to regulate the cellular immunity function and inhibit the proliferation of vaginal epithelial cell in experimental murine. ConclusionThe cream  was effective on psoriasis enplaques and can regulate the action of  immunity, inhibit proliferation of epithelial cell and inhibit tumour weakly.
       Key words:Chinese  herbs;  Psoriasis;  Cellular  immunity
   
　　银屑病又称牛皮癣，是一种容易复发的皮肤科常见病，多发病。在寻常型银屑病中，点状银屑病的治疗相对容易，斑块状银屑病是该病中较为顽固的一型，临床治愈率较低，而且容易复发。笔者应用乐银煎膏剂治疗斑块状银屑病，并进行相应的细胞免疫和抗有丝分裂动物实验。现报道如下。
       　　1  临床观察
       1.1  资料与方法
       1.1.1  病例纳入标准银屑病的诊断标准参照全国高等医药院校统编教材《皮肤性病学》(第4版)筛选出寻常型斑块状银屑病病例。中医辨证标准为：舌红绛或见无苔/少苔、脉弦/弦细/沉弦，或兼见五心烦热、潮热盗汗、颧红面赤等，即证属阴虚阳亢型。
       1.1.2  临床资料采用随机的原则（门诊单双号分组）将天津市长征医院银屑病专科门诊的病人分为观察组和对照组。在冬春季节（199812~200003）进行治疗观察。观察组：160例，男88例，女72例，年龄14～65岁，平均年龄为30岁，病程10个月～31年，平均病程8.64年。对照组：100例，男56例，女44例，其平均年龄为30岁,病程11个月～30.5。两组临床资料比较差异无显著性（P>0.05)，具有可比性。以上病例皮疹主要表现在头面部、四肢、躯干，均为斑块状皮疹，自觉痒或微痒。部分病例曾应用过某些中、西药物，均已停药在6个月以上，其所应用的药物未发现与乐银煎膏剂有协同作用。
       1.1.3  方法观察组给予乐银煎膏剂治疗(其中药组成为：龟版、鳖甲、牡蛎、生地黄、玄参、天门冬、夏枯草、白花蛇舌草、连翘、天花粉），由天津市长征医院制剂室出品。其制作工艺为:将中药洗净后,在常压条件下,煮沸水提取2次,后浓缩至药液药物浓度为1 g生药/ml），50 ml/次，2次/d，口服，每8周为1个疗程，用药1个疗程后进行疗效观察判定。对照组选用市售中成药银屑灵颗粒剂(主要成分：土茯苓、金刚藤，由山东北方制药厂出品)作为对照药物，10 g/次，2次/d，口服。其用药时间同观察组。两组外用药均为润肤霜，主要成分为维生素E,不含激素。
       1.2  结果
       1.2.1  疗效判定标准根据中国中西医结合学会皮肤性病学会199110制定的银屑病疗效判定标准［1］。
       1.2.2  临床疗效观察组痊愈8例，基本痊愈32例，显效48例，有效48例，无效24例，总有效率为85％。对照药组痊愈4例，基本痊愈8例，显效14例，有效38例，无效36例，总有效率为64％。统计处理为卡方检验，χ2=25.40，P<0.01，差异具有显著性。
       1.2.3  不良反应观察组服药后，一过性恶心4例，便溏2例 (占3.75%）。如将药液加温后服用，上述副作用较少出现，一般停药后即可消失，尚未见其他明显的不良反应。在治疗过程中及以后3个月的随访中，经化验未见肝功能、血、尿常规的异常变化。对照组在治疗过程中出现口苦、恶心、腹胀等胃肠道反应8例（占8%），也未见其他明显的不良反应。
       1.3  随访1年后随访，在观察组40例基本痊愈患者中，有4人复发，复发率为10％，皮损面积、程度均较前次发病时减轻；在对照组12  例基本痊愈患者中，有3人复发，复发率为25％。    
       　　2  实验研究
       2.1  乐银C1煎膏剂小鼠急性毒性实验
       2.1.1  材料动物：健康昆明种小鼠，雌雄各半。购自中国医学科学院实验动物研究所动物繁育中心（北京）动物合格证号：医动字第01-3001号。药品：乐银C1煎膏剂为瓶装深棕褐色稍显粘稠状液体。规格：100 ml/瓶。取1 000 ml乐银C1药液加热蒸发浓缩至300 ml，原药液药物浓度为lg生药/ml，浓缩后为3.3 g生药/ml，浓缩后的药液4℃保存备用。
       2.1.2  方法方法一：一次给药乐银C1煎膏剂急性毒性实验。取20只小鼠，雌雄各半，每只动物灌胃乐银C1煎膏剂0.8 ml/20 g体重（合133.2 g生药/kg体重），而后观察动物一般状况，1周后称取动物体重与给药前相比较。方法二：两次给药乐银C1煎膏剂急性毒性实验，基本方法同方法一，不同点在于24 h内两次给药使其24 h内累积给药剂量达266.4 g生药/kg，观察方法同方法一。
       2.1.3  结果见表1。
       表1  乐银的小鼠急性毒性实验（略）
       由表1可知乐银C1煎膏剂药液以最大浓度，最大容积，无论一次还是二次小鼠灌胃（间隔20 h）给药，均未见到任何毒性反应，给药后饲养观察1周，动物均能良好存活，给药前后比较体重有明显的增加。
       2.1.4  结论乐银C1煎膏剂小鼠灌胃其最大耐受量为266.4 g生药/kg体重，相当于人用药量的80倍，未见毒性反应。
       2.2  乐银C1煎膏剂抑瘤实验
       2.2.1  材料动物：同实验1。 瘤源（株）：荷S180肉瘤（腹水型）小鼠1只，为接种肿瘤细胞7 d后生长良好的荷瘤动物，天津市医药科学研究所药理室传代保存。药品：同实验1。阳性对照药品：选择常规肿瘤化疗药物环磷酰胺，江苏省连云港制药厂产品，粉针剂200 mg/支，批号970115。用时以注射用生理盐水溶解新鲜配制成所需浓度供小鼠腹腔注射用。
       2.2.2  方法乐银C1煎膏剂抑瘤实验按常规肿瘤接种及药物筛选方法进行。肿瘤接种：将荷瘤小鼠（瘤株）脱颈椎处死，常规碘酒、酒精消毒，于无菌条件下吸取腹水（含有肿瘤细胞），按照腹水∶生理盐水=1∶4的比例进行稀释，将稀释后的腹水接种于动物右侧腋窝皮下0.2 ml/只。动物接种肿瘤细胞后第2天随机分组进行实验。分组与给药：本实验分两批进行，第1批选择雌性动物设3组，即对照组、环磷酰胺组及乐银C1煎膏剂33 g/kg组，第2批选择雄性动物设两组，即对照组和乐银C1煎膏剂66 g/kg组。乐银C1煎膏剂为灌胃给药，接种肿瘤细胞后第2天开始给药，连续7 d，环磷酰胺为腹腔注射给药，剂量为50 mg/kg给药1次，在肿瘤细胞接种后2 d给入。全部动物在肿瘤细胞接种后第10天脱颈椎处死，取出肿瘤称重而后称取动物体重比较抑瘤率：
       2.2.3  结果乐银C1煎膏剂对小鼠肿瘤S180生长抑制作用结果见表2。结果指出乐银C1煎膏剂灌胃剂量分别为66 g/kg与33 g/kg时对肿瘤生长的抑制率分别为7.26%和11.20%，P值均大于0.05，差异无显著性。
       表2  乐银对小鼠肉瘤S180的抑制作用（略）
       2.2.4  结论乐银C1煎膏剂对灌胃给药66 g/kg和33 g/kg时，对小鼠肿瘤S180的生长有微弱的抑制作用。实验结果表明乐银对灌胃给药66 g/kg和33 g/kg时，对小鼠肿瘤S180的生长有微弱的抑制作用，与对照组进行比较差异无显著性。
       2.3  乐银C1煎膏剂对小鼠免疫的影响
       2.3.1  材料动物：ICR小鼠，雌雄兼用体重18~24 g来源同实验一，动物合格证号：医动字第01-0387号。药品：同实验1。阳性对照药；注射用环磷酰胺，同实验2；左旋咪唑，广东省制药工业公司华南制药厂产品，片剂，规格25 mg/片，批号930101，以蒸馏水配制成所需浓度的混悬液，室温保存，供动物灌胃用。试剂：DNCB（2.4二硝基氯苯）北京化工三厂产品，以丙酮新鲜配制成所需浓度溶液，供动物皮下注射及涂抹耳壳皮肤用（具体内容见方法部分）。仪器：注射器、打孔器、扭力天平、手术刀。
       2.3.2  方法采用迟发超敏实验方法，各组实验小鼠颈背部皮下注射5%DNCB丙酮溶液20 μl/只，做致敏处理。皮下注射后10 d再以1%DNCB丙酮溶液均匀涂抹小鼠右耳壳反正两面皮肤0.05 ml/只并以同体积丙酮涂抹左耳壳正反两面皮肤作对照，18 h后将动物脱颈椎处死，用直径8 mm打孔器于双耳对称处取下耳片用扭力天平称得，计算DHR（DHR=右耳片重量－左耳片重量），作统计学处理。分组与给药，全部动物致敏处理后第3天随机分成6组，分别为对照组、环磷酰胺组（腹腔注射环磷酰胺25 mg/kg）、环磷酰胺加乐银组（腹腔注射环磷酰胺25 mg/kg并灌胃乐银66 g/kg）、环磷酰胺加左旋咪唑组（腹腔注射环磷酰胺25 mg/kg并灌胃左旋咪唑7.5 mg/kg）、乐银组（灌胃乐银66 g/kg）各组均连续给药7 d，末次给药30 min后耳壳涂抹DNCB。
       2.3.3  结果见表3。
       表3  乐银对小鼠细胞免疫的影响（略）
       *为与环磷酰胺组比较，其它与对照组进行比较
   
　　由表3可见，环磷酰胺组动物DHR值是8.22±2.77，明显低于对照组（DHR=11.58±1.78），说明环磷酰胺对小鼠的细胞免疫产生了明显的抑制作用；乐银（66 g/kg×7）和左旋咪唑（7.5 mg/kg×7）分别与环磷酰胺合用，其DHR分别为13.89±1.62和11.01±2.60接近或高于正常对照组动物的DHR值。正常小鼠（不接受环磷酰胺的动物）灌胃乐银C1煎膏剂66 g/kg，其DHR值为18.50±2.64高于正常对照动物。乐银C1煎膏剂可恢复由环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠的免疫功能。
       2.4  乐银C1煎膏剂对小鼠阴道上皮细胞增殖的影响
       2.4.1  材料动物：同实验1，但仅选用雌性小鼠。药品：同实验1。试剂：（1）己烯雌酚注射液，天津市氨基酸公司产品，批号980528，规格1 ml（0.5 mg）/安瓿。（2）秋水仙碱，由天津市医药科学研究所同位素室提供，为白色粉末状试剂，使用时以生理盐水配制成所需浓度溶液。（3）其它病理组织切片所使用的常规试剂。阳性对照药，注射用甲氨喋呤，上海华联制药有限公司产品批号980407，规格5 mg/安瓿，用时以生理盐水配成所需浓度的溶液。
       2.4.2  方法将实验动物（体重18~20g）随机分成4组：对照组，甲氨喋呤组，乐银C1煎膏剂大剂量及小剂量组成。所有动物均连续3  d下午腹腔注射己烯雌酚0.2 mg/只，1次/d使小鼠阴道上皮处于雌激素周期。3 d后各组动物按下述方案开始给药；对照动物灌服相应容积（0.2 ml/10g）的生理盐水，甲氨喋呤组动物腹腔注射甲氨喋呤1 mg/kg，1次/d，连续3 d，乐银C1煎膏剂大、小剂量组，动物分别灌服乐银C1煎膏剂66 g/kg和33 g/kg，1次/d，连续9 d，在连续给药的9 d均每天上午给药，每天下午继续腹腔注射己烯雌酚，剂量同前，最后1次给药后1 h所有小鼠均腹腔注射秋水仙碱2 mg/kg，使细胞有丝分裂周期停止在有丝分裂中期。注射秋水仙碱后6 h将动物处死，解剖取出阴道组织，常规福尔马林固定。脱水，石蜡包埋组织切片，HE染色后光镜下计数200个阴道基底细胞中所出现的有丝分裂数，计算有丝分裂百分数进行统计学分析比较。
       2.4.3  结果见表4。
       表4  乐银对小鼠阴道上皮细胞增殖的影响（略）
       *统计分析为t检验，甲氨蝶呤组与两给药组分别与对照组进行比较
   
　　由表4可见甲氨喋呤、乐银大、小剂量给药对雌激素诱导的阴道黏膜上皮的增殖（基底细胞有丝分裂）有不同程度的抑制作用，抑制率分别为55.59%，22.07%和7.74%，乐银C1煎膏剂剂量在33~66 g/kg时有明确的量-效关系。乐银C1煎膏剂对处于雌激素周期的小鼠阴道上皮细胞增殖有一定的抑制作用并存在着一定的量-效关系。
       　　3  讨论
       银屑病的病因是诸多因素引起的细胞免疫功能及体液免疫功能紊乱。淋巴细胞转化率和E花环形成率显著降低，皮肤迟发性过敏反应减弱，CD4和CD4/CD8降低，CD8增高，血清IgA，IgE升高，在角质层尚可见有抗角质层的自身抗体［2］。有学者认为免疫异常可导致角朊细胞膜的异常，随之而引起cAMP和前列腺素失去平衡，使表皮增生而发病［3］。人体的T细胞各亚群均属免疫调节细胞，在维持免疫平衡上起重要作用的TH、TS两种细胞相互制约保持着动态平衡［4］。根据上述理论目前有许多的免疫促进剂问世，如胸腺肽、胸腺因子Ｄ、扶正女贞素片、卡介菌多糖核酸注射液等［5］。上述药物在治疗银屑病方面均取得了不同程度的疗效。中医学理论对斑块状银屑病的成因看法是：由于六淫犯肺，肺经蕴热而溢于肌肤，出现斑疹而成癣。开始大多为点状，后因病久营卫失和，气血暗伤；肺经有热不得宣泄或肺感风寒后郁久化热；金过伐木而伤及肝经、阴血、津液，由于阴液亏损、肌肤失养，皮疹扩大而成斑片肥厚［6］。临床以阴虚阳亢的斑块状银屑病这种类型较为常见。目前治疗该病多沿袭传统的治疗方法：如清热解毒，凉血攻下，清热利湿，活血化淤，由于缺乏扶正祛邪而易于复发；又因药物一味苦寒，克伤脾胃而中止治疗。乐银方一改传统的治疗方法，立足于扶正祛邪，滋养阴血，使浮阳之热回潜，结片之皮疹得阴血而消散。清热而不伤脾胃，解毒而不伤阴血，滋阴散结而不伤正气。方中龟版、鳖甲、牡蛎为君药，平肝潜阳、散结，使浮越于表的阳热回潜；生地黄、玄参、天门冬为臣药，助君药滋阴生津，凉血散结；夏枯草、白花蛇舌草、天花粉、连翘为佐使药，清热解毒，泻火散结。该方及法的产生减少了银屑病易于复发，除对斑块状银屑病有效外，同时能不同程度地缓解部分病人伴有的高血压病［7］。动物实验显示乐银方与环磷酰胺合用时可恢复由环磷酰胺所致的动物细胞免疫抑制，使之达到正常水平，提示对细胞免疫具有明显的调节作用。由于乐银方对小鼠阴道上皮细胞增殖具有抑制作用，即具有抗有丝分裂作用，且呈量-效正相关，提示具有抗银屑病的作用。乐银与抗肿瘤药物治疗银屑病的不同点在于只具有微弱的抗肿瘤作用，在实验4中，乐银大、小剂量组分别与对照组进行比较，P＞0.05，无显著性差异，说明乐银方治疗银屑病不是通过抑制细胞生长代谢而实现的；本实验表明，乐银方安全无毒。根据现代中药研究证明：夏枯草对细胞免疫功能有调节作用；龟版、牡蛎内含有多种氨基酸及微量元素，抑制异常细胞增生；生地黄、玄参、天门冬、白花蛇舌草、连翘均能抗炎、抗菌、减轻炎症反应，抑制自身抗体产生，使体液免疫趋于正常，提高巨噬细胞吞噬力［8］；天冬、天花粉、白花蛇舌草均能抑制异常细胞增生［9］。故本方具有抗炎，增强机体免疫力，抑制异常细胞增生，促进疾病恢复的作用。
       　　参考文献：
       ［1］  边天羽.中西医结合皮肤病学［M］.天津：天津科技出版社，1996：201.
       ［2］  赵  辨.临床皮肤病学［M］.南京：江苏科技出版社，2001：760.
       ［3］  杨国亮，王侠生.现代皮肤病学，第2版［M］.上海：上海医科大学出版社，1998：515.
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       ［5］  欧阳恒.银屑病的诊断与治疗［M］.北京：人民军医出版社 ，2001：63.
       ［6］  刘忠恕.现代中医皮肤病学［M］.天津：天津科技翻译出版公司，1997：74.
       ［7］  刘承煌，刘  建，范维琥.银屑病患者易伴发心血管疾病的机制探讨［J］.临床皮肤病杂志, 1994.23(1):3.
       ［8］  阴  健.中药现代研究与临床应用（3），第1版［M］.北京：中医古籍出版社，1997：20，35，69，259，365，498，521.
       ［9］  王本祥.现代中药药理学［M］.天津：天津科学技术出版社，1997：86,109,265.
       基金项目：天津市卫生局中西医结合科研基金资助课题（No.2005032-6）
       (天津市长征医院  300120；  天津市医药科学研究所  300070)