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       【关键词】  豆楮方；,,艾氏腹水癌；,,小鼠；,,生命延长率
       摘要：目的观察豆楮方对艾氏腹水癌（EAC）腹水型小鼠的体内作用。方法昆明种小鼠50只随机分为5组：模型阴性对照组(A)、5Fu阳性对照组(B)、豆楮方高剂量组(C)、豆楮方中剂量组(D)、豆楮方低剂量组(E)。小鼠腹腔接种EAC后连续8 d灌胃给药，1次/d，观察并记录动物体重、一般情况及死亡时间。 结果与模型组比较，豆楮方各剂量组荷瘤小鼠的一般情况较好且生存时间明显延长。结论 豆楮方具有抗EAC腹水的作用。
       关键词：豆楮方；  艾氏腹水癌；  小鼠；  生命延长率
       豆楮方是20世纪70年代江苏著名中医肝病专家邹良材的经验方，一直用于“阴虚鼓胀”证的治疗，我们在临床观察到本方对肝硬化腹水［1］、肝癌腹水［2］具有显著的治疗效果，并采用艾氏腹水癌（EAC）腹水型小鼠模型，进行了本方对小鼠腹水癌生长及其生存期影响的实验。现报道如下。
       　　1  材料
       1.1   动物昆明种健康成年小鼠50只，均为雄性，平均体重(19.2±1.49) g，由南京中医药大学实验动物中心提供。
       1.2   瘤株EAC瘤株由江苏省肿瘤医院药理实验中心提供，7~10 d传代1次，在腹腔传递3次后开始正式实验。
       1.3  药物豆楮方由黑料豆、楮实子等组成，由本校中药学院进行严格的质量控制，按临床用药比例配方，水煎、过滤、浓缩至含生药为2.0 g/ml的药液，高压灭菌，4℃存放备用。5Fu，250 mg/支，天津金耀氨基酸有限公司，批号0311171。参考文献用量［3］，用生理盐水稀释，按小鼠体重30 mg/kg腹腔注射用。
       　　2  方法
       2.1   肿瘤接种在无菌条件下，选择接种后7~10d一般状况较好的瘤种动物，仰卧固定，消毒皮肤，抽取腹水，用0.9%生理盐水稀释成1∶3的溶液，取上述腹水，每只小鼠腹腔注射0.2 ml。
       2.2  分组给药 遵循随机原则，分为5组，每组10只：模型阴性对照组(A)、5Fu阳性对照组(B)、豆楮方高剂量组(C)、豆楮方中剂量组(D)、豆楮方低剂量组(E)。自造模第2天起给药：A组每天灌服生理盐水0.3ml；C，D，E组分别每天予浓度为2.0，1.0，0.5 g/ml的豆楮方药液0.3  ml灌胃；B组每天按小鼠体重30 mg/kg腹腔注射5Fu溶液0.2 ml。
       2.3  观察指标观察各组小鼠的一般情况，定时称重量，记录各组小鼠生存天数，计算生命延长率，并经统计学处理。参考文献［4］，计算公式为：
       生命延长率=（试验组平均生存日-对照组平均生存日）      对照组平均生存日×100%
       　　3  结果
       3.1   小鼠的一般情况对比模型阴性对照组(A)小鼠在接种EAC癌细胞后腹部增大速度最快，7 d左右即可见腹部明显增大，其余各组7 d后才见小鼠腹部逐渐增大，较A组为慢。在用药过程中，豆楮方组（C，D，E）小鼠的活动力、进食、精神状况均较好，表现为活动力强，食欲旺盛，精神尤佳，整个用药过程中未见小鼠异常活动。而5-Fu组(B)与A组小鼠均见毛发较稀疏，不整齐，无光泽，食欲下降，活动能力较差。在观察中发现，给予豆楮方的小鼠尿量明显增加，垫料潮湿需每天更换，而A，B组小鼠尿量较少。
       3.2  小鼠的体重对比 从体重的增长情况看，艾氏腹水癌的潜伏期为4~6 d，生长旺盛期从第7天开始，此时，由于腹水形成，荷瘤小鼠的体重增长迅速，证明本实验的诱瘤率为100%。5Fu及豆楮方组小鼠的体重增长速度均较模型阴性对照组减缓。结果见表1。
       表1  各组小鼠体重变化对比（略）
       3.3   小鼠的生存期对比经腹腔接种EAC癌细胞悬液后，模型阴性对照组小鼠一般在12 d左右死亡，说明实验条件稳定，符合评定标准。经用豆楮方或5-Fu后的小鼠，与模型阴性对照组比较，存活时间均不同程度地延长，尤以豆楮方中、高剂量组为明显。各组小鼠的平均生存时间及生命延长率见表2。
       表2   各组小鼠生存期对比（略）
       与空白对照组比较，*P ＜0.05，**P＜0.01
       　　4  讨论
       腹水是很多恶性肿瘤晚期的常见症状，往往提示病人预后不良，治疗亦较困难。本实验在总结临床豆楮方对肝癌腹水的疗效基础上，采用腹腔接种EAC腹水癌的小鼠模型观察豆楮方的体内作用。结果表明，豆楮方组小鼠比模型阴性对照组小鼠生存天数明显延长，且生存质量较好。5Fu组小鼠的生存时间亦较模型阴性对照组延长，生命延长率为57.72%，提示其对EAC腹水癌的生长具有一定的抑制作用，可以减慢腹水的生成速度。我们在实验中观察到，5Fu组与模型阴性对照组小鼠毛发较稀疏，不整齐，无光泽，食欲下降，活动能力较差，生存质量不高，而给予豆楮方的小鼠毛发整齐有光泽，食欲较好，活动力正常，且尿量明显增加，豆楮方中、高剂量组小鼠的生命延长率均高于5-Fu组，而低剂量组与5Fu组接近。豆楮方为老中医经验方，具有补养肝肾、解毒化瘀的作用，组方特点为攻补兼施、扶正不留邪、祛邪不伤正［5］。方中楮实子又名实、子、楮实、楮桃、角树子等，为桑科构树的成熟果实，性味甘寒，入肝、脾、肾三经。刘汉基《药性通考》载：“楮实子，阴痿能强，水肿可退，充肌肤，助腰膝，益气力，补虚劳，悦颜色，壮筋骨，明目，性味甘寒，入肝、脾、肾三经”；《本草求真》言：“得此颜色润，筋骨壮，腰膝健，肌肉充，水肿消”； 有动物实验表明［6］，楮实子对正常小鼠的学习和记忆有显著的促进作用，其机理可能与提高机体耐缺氧能力、改善脑部氧化代谢等有关。黑料豆，《本草纲目》称“黎豆”，《中药大辞典》称野料豆、零鸟豆、马料豆、细黑豆、稽豆等，味甘性平，有解毒利尿，补肾养血之功；《本经逢原》记载：“入肾经血分，同青盐、旱莲草、何首乌蒸熟，单食黑豆，则须发不白，其功补肾”； 现代研究显示［7］，黑豆色素为类黄酮类化合物，属花色素类色素，主要成分是飞燕草素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-葡萄苷，有极强的防止活性氧危害和抗氧化作用，可消除机体代谢过程中产生的过多自由基，具有延缓衰老、预防各种疾病等功能；黑豆蛋白具有降血脂、抑制肿瘤以及雌激素样作用等各种保健作用，流行病学调查发现［8］，与激素密切相关的肿瘤如乳腺癌、前列腺癌和结肠癌等均与大豆制品的摄入量呈负相关；有实验研究显示［9］，黑豆及其发酵产物淡豆豉在体外对肝癌细胞均有抑制作用，而淡豆豉抑癌作用更强，可能与经过发酵有一部分成分转变成机体易利用的物质有关。路路通系金缕科植物枫香树的干燥成熟果实，别名枫实、枫木上球、枫香果、枫果等。据《中华本草》载：“味苦、性平，归肝、膀胱经，能祛风除湿，疏肝活络，利水，主治风湿痹痛，肢体麻木，手足拘挛，脘腹疼痛，经闭，乳汁不通，水肿胀满，湿疹”；《本草纲目拾遗》谓其能搜逐伏水，通十二经穴；路路通含有生物碱、苷类等化学成分，现代药理研究显示［10］路路通提取物对某些肿瘤细胞具有抑制作用，且能抑制癌细胞生长。泽兰性味苦辛微温，入肝脾二经，有活血祛淤、行水消肿之效。泽兰系唇形科多年生草本植物地瓜儿苗的干燥地上部分，始载于《神农本草经》，列为中品，其性味苦、辛、微温，归肝、脾经；《药性论》云“治通身面目大肿”；李时珍谓“泽兰走血分，故能治水肿，除痈毒，破淤血，消症瘕，而为妇人要药”； 泽兰的地上部分含硬脂酸、B谷甾醇、桦木酸、熊果酸、乙酰熊果酸、胆甾酸、齐墩果酸等成分，近年来研究表明［11］齐墩果酸、熊果酸有抗病毒性肝炎、抗艾滋病、抗突变、抗促癌、诱导细胞凋亡等作用；动物实验显示［12］，泽兰对正常小鼠由四氯化碳引起的肝损伤有明显保护作用，表现为SGOT显著降低、肝体比降低，对正常大鼠有显著的利胆作用，对肝硬化模型组大鼠具有显著升高血清白蛋白、显著降低血清甘油三酯的作用，泽兰具有抑制肝脏胶原纤维增生、抗血小板聚集、抗炎、利尿等作用，能有效地对抗肝损伤、肝纤维化及肝硬变并可纠正肝损伤过程中肝脏出现的多种异常病变和肝功能异常。豆楮方配方严谨而独特。方中黑料豆、楮实子相配，补益肝肾，养阴解毒，扶正以祛邪；泽兰、路路通化淤通络，利湿排毒，逐水湿散淤血而恢复气血之条畅，虽为攻邪却药性平和，意在给邪以出路，故祛邪而不伤正。本实验结果表明，豆楮方既有一定的抗癌性腹水增生的作用，又能较好地提高荷瘤动物的生存质量，具有较好的临床运用与开发前景。
       　　参考文献：
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       (南京中医药大学，江苏 南京  210029)