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       【关键词】  高效液相法；,,慢支紫红丸；,,岩白菜素
       摘要：目的建立了慢支紫红丸中岩白菜素的高效液相法（HPLC）测定方法。方法使用甲醇溶液加热回流提取岩白菜素，采用 RP18 C18柱为固定相，甲醇水(25∶75)为流动相，流速1 ml/min，检测波长275 nm。结果在0.053 5～0.535 μg范围内，岩白菜素与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.999 9，平均加样回收率为98.2%,RSD=2.15%,n=9。结论该方法简便、快速、灵敏、专属性好,是制剂质量控制的有效方法。
       关键词：高效液相法；  慢支紫红丸；  岩白菜素
       Determination of Bergenin in Manzhizihong Pills by HPLC
       FENG Chong, HUANG Xiaodan, QIN ChunMei
       (Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited， Guangzhou 510405,China)
       Abstract:ObjectiveAn HPLC method for determination of bergenin in Manzhizihong Pills was established.MethodsBergenin was extracted by methanol and warmup and reflux. An RP C18 column was used with the mobile phase of methanol-water(25∶75), at the detection wavelength of 275 nm and the flow rate was 1.0ml/min. ResultsThe linear range was 0.0535～0.535 and the average recovery was 98.2％ (RSD 2.15％).ConclusionThe method is rapid,convenient.
       Key words:HPLC;  Manzhizihong Pills;   Bergenin
   
　　慢支紫红丸由矮地茶、红背叶根、猪胆粉、五指毛桃和山药组成，具有健脾去湿，顺气化痰，消炎镇咳的功效，主要用于咳嗽痰多，气促，慢性支气管炎等疾病的治疗 ［1］。本文采用 HPLC法对该药中的岩白菜素进行了含量测定。精密度、重复性均较好,结果可靠,可作为该药质量标准的定量方法［2,3］。
       　　1  仪器和试药
       1.1  仪器  Waters600液相色谱仪（Waters公司）；Empower工作站；Waters717自动进样器；柱温箱，DAD2996检测器；Bp211D型电子天平（十万分之一，德国 Sartorious 公司）。
       1.2  试药 岩白菜素对照品（供含量测定用，批号： 1532200202由中国药品生物制品检定所提供）。慢支紫红丸由广州王老吉药业股份有限公司生产。甲醇为色谱纯，水为高纯水，缺矮地茶阴性制剂自制。
       　　2  方法与结果
       2.1  溶液配制
       2.1.1  对照品溶液配制精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的岩白菜素对照品适量，用甲醇制成每毫升含有岩白菜素0.053 5 mg的对照品溶液。
       2.1.2  供试品溶液配制取重量差异下的本品，研细，取粉末约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
       2.1.3  阴性溶液配制除去矮地茶，按照慢支紫红丸生产工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制成矮地茶阴性对照溶液。
       2.2  最大吸收波长的选择经 DAD紫外光谱扫描，在275 nm处有紫外最大吸收峰，与岩白菜素的紫外最大吸收峰一致，选择此为检测波长。结果见图1。
       2.3  色谱条件色谱柱 Symmetry shieldTM RP18柱,5 μm, 4.6 mm ×250.0 mm；流动相：甲醇水(25∶75)为流动相，流速为1.0 ml/min；柱温：30℃；检测波长：275 nm。理论塔板数不低于1 500。
       2.4  线性关系考察精密吸取上述对照品溶液1，2，4，5，8，10 μl，注入液相色谱仪中，测定峰面积，求标准曲线、回归方程及相关系数，以峰面积 Y对对照品量X进行回归分析，得回归方程 Y = 8.86e+005X - 3.48e+003，相关系数 r＝0.999 9，表明岩白菜素含量在0.053 5～0.535 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。结果见图2。
       图1   岩白菜素紫外光谱图（略）
       图2  岩白菜素标准曲线图（略）
       2.5  方法的专属性考察 在上述的色谱条件下，将供试品溶液（慢支紫红丸）、岩白菜素对照品溶液、矮地茶阴性对照液、矮地茶对照药材溶液，注入液相色谱仪中，得 HPLC图，结果显示阴性对照无干扰。理论塔板数不低于1 500。结果见图3～5。
       2.6  方法精密度实验依照“2.1”项下供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，进行以下试验。连续进样5次，每次10 μl，测得岩白菜素的含量，结果见表1。
       图3  岩白菜素对照品溶液 HPLC （略）
       图4  供试品 HPLC图（略）
       图5  阴性对照液 HPLC图（略）
       表1   方法精密度实验（略）
       测定数据差异小，达到要求。
       2.7   样品稳定性实验采用上述供试品溶液，于第0，2，4，7和10 h各进样10 μl，测定含量。结果见表2。
       表2  方法稳定性实验（略）
       结果显示，在10 h内，样品稳定。
       2.8  方法重现性实验分别取药品粉末0.25 g, 依照 “2.1”项下供试品溶液的制备方法，平行操作6份，测定含量。结果见表3。
       表3  重现性实验（略）
       结果显示，重现性良好。
       2.9  加样回收率实验取药品粉末0.25 g，精密称定，共9份，分别加岩白菜素对照品（0.038 0 mg/ml）25 ml，照供试品溶液的制备方法制备供试液，测定，计算回收率。结果见表4。结果显示，该方法加样回收率在95%～105%之间，符合《中国药典》要求。
       表4  加样回收实验结果（略）
       2.10  成品中含量测定及限量规定按本品成品的质量标准项下含量测定方法，对7批样品的含量进行测定。结果见表5。
       表5  成品中岩白菜素的含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       根据参考文献,岩白菜素易溶于甲醇,在水或乙醇中微溶［2］,故选择甲醇作为本品的溶剂，以提取慢支紫红丸中的岩白菜素。本品是一个复方制剂,由矮地茶等5味中药组成, 方中主药矮地茶所含的岩白菜素有镇咳祛痰作用［1］，与该药的功效一致,通过测定矮地茶中的有效成分岩白菜素含量可对该药进行质量控制，本研究报道中的岩白菜素的含量测定方法简便可行,结果可靠,亦可对含岩白菜素的中药材及制剂的岩白菜素含量测定方法提供参考。
       参考文献：
       ［1］  周文枭，崔德斌. 高效液相色谱法测定抗痨胶囊中岩白菜素的含量［J］.医药导报，2004， 23（10）：777.
       ［2］  潘  ，邓茂芳，田永华. HPLC法测定矽肺宁片中岩白菜素的含量［J］.中国药品标准，2005，6（2）：22.
       ［3］  李忠琼，张雯洁，马  昕，等.止泻胶囊中岩白菜素的 HPLC测定［J］.中国医药工业杂志，2004, 35(3)：170.
       (广州王老吉药业股份有限公司， 广东 广州   510450)