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       【关键词】  高乌甲素凝胶；,,高乌甲素；,,高效液相色谱
       摘要：目的建立用HPLC法测定高乌甲素凝胶中高乌甲素含量的方法。方法采用Hypersil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇0.01 mol・L-1磷酸二氢钠（80∶20）为流动相，检测波长252 nm。结果高乌甲素在20～200 μg・ml1范围内呈良好线性关系，r=0.999 8。平均回收率为（100.30±1.56 ）%，RSD=1.55%（n=5）。结论 该法简便，快捷，准确，可靠。
       关键词：高乌甲素凝胶；  高乌甲素；  高效液相色谱
       高乌甲素（又称刺乌头碱，拉巴乌头碱，Lappaconitine）系由毛莨科乌头属植物高乌头Aconitum sinomontanum Nakai［1］根中提取的生物碱，用于治疗中度以上疼痛［2］。高乌甲素凝胶是以卡波姆和羟丙基甲基纤维素为基质、高乌甲素为主药组成的制剂，它具有绕过肝脏的首过效应及避免胃肠道的破坏、提供可预定的和较长的作用时间、降低药物毒性及不良反应、给药方便等优点。本实验采用HPLC测定其含量。现将结果报道如下。
       　　1  仪器与试药
       HP1090高效液相色谱仪（美国惠普公司）；KQ100E医用超声波清洁器（昆山市超声仪器有限公司）；高乌甲素对照品（HPLC测定纯度为98%以上）及样品（中国中医研究院中药研究所提供）；高乌甲素凝胶（自制）；甲醇为色谱纯；磷酸二氢钠为分析纯；水为超纯水。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件Hypersil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为甲醇：0.01 mol・L1磷酸二氢钠（80∶20）；检测波长252 nm；流速1 ml・min1；进样量20 μl；灵敏度0.02 Aufs；温度为室温。
       2.2  标准曲线的制备精密称取105℃干燥至恒重的高乌甲素对照品适量，用甲醇制成浓度为20，40，80，120，160，200 μg・ml1的系列溶液，以峰面积A为纵坐标，高乌甲素浓度C（μg・ml-1）为横坐标绘制曲线，并进行线性回归。高乌甲素浓度在20～200 μg・ml1范围内呈良好线性关系，回归方程为：A=16499C+436，r=0.999 8。
       2.3  精密度实验吸取同一浓度的高乌甲素对照品溶液，连续进样5次，结果RSD为1.08%，表明精密度良好。
       2.4  稳定性实验吸取同一供试品溶液分别在室温下放置0，2，4，6，8 h后进行测定，结果主峰面积RSD为1.67%（n=5），表明供试品液在8 h内基本稳定。
       2.5  空白实验按处方配比，投入缺高乌甲素的其他药材和辅料，制成空白制剂。按供试品溶液配制的方法制备，并按色谱条件测定，结果在高乌甲素对照品峰处未出现谱峰，说明按本实验条件测定，缺样空白无干扰。见图1。
       2.6  样品测定取本品适量精密称定（约相当于高乌甲素15 mg），置100 ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过。精密吸取续滤液5 ml于50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密称取，高乌甲素对照品15 mg置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5 ml，用流动相稀释至50 ml，摇匀，作为对照品溶液。分别取10 μl进样分析，按外标法以峰面积计算。结果见表1，图2～3。图2为高乌甲素为对照品液的HPLC图，图3为20040315批凝胶的HPLC图。
       表1  高乌甲素凝胶含量测定结果（略）
       图1  空白凝胶HPLC图（略）
       图2  高乌甲素对照品液色谱图（略）
       图3  高乌甲素凝胶供试品液色谱图（略）
       2.7  回收率实验按处方比例配成空白基质，精密加入不同量的高乌甲素，混合均匀，配制成凝胶样品，称取不同凝胶各0.5 g置于100 ml量瓶中，用适量甲醇振摇，超声30 min，放冷至室温，滤过，将取续滤液5.0 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，微孔滤膜滤过，取滤液20 μl进样，记录峰面积，计算回收率。结果见表2。
       表2  高乌甲素回收率测定结果
       　　3  讨论
       3.1  高效液相色谱法测定高乌甲素的含量，方法简便，快速。流动相为甲醇：0.01 mol・l-1磷酸二氢钠（80∶20），按此比例可使峰分离完好，基质和分解产物也不干扰主药的测定。根据实验，在此条件下高乌甲素理论塔板数在2000以上。
       3.2  超声提取时间对高乌甲素回收率有一定影响，随超声时间延长，高乌甲素回收率升高，但30，40，50 min提取效果无明显变化，且50 min提取时，有降解产物出现，故确定提取时间为30 min。
       　　参考文献：
       ［1］  中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴，第1册［M］.北京：科学出版社，1992：688.
       ［2］  唐然灿，朱梅英，冯  洁，等.刺乌头碱氢溴酸盐的药理作用研究［J］.药学学报，1983，18（8）：579.
       (北京中医药大学中药学院，北京  100102；  山东中医药大学药学院，山东 济南  250014)