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       【关键词】  热咳喘胶囊；,,高效液相色谱法；,,黄芩苷
       摘要：目的建立高效液相色谱法测定热咳喘胶囊中黄芩苷的含量。方法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水∶磷酸（47∶53∶0.2）作为流动相；检测波长280 nm。结果平均回收率为99.88%,RSD=1.66%。结论 该检测方法简便准确，可用于该制剂中黄芩苷的测定。
       关键词：热咳喘胶囊；  高效液相色谱法；  黄芩苷
       热咳喘胶囊为我院自制制剂品种，全方由黄芩、麻黄、天竺黄和地龙等17味中药组成，具有清热化痰、止咳平喘的作用，用于热痰所致的咳嗽、咯痰、气喘等症；以及急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作见以上症候者。原标准未建立含量测定方法，为增强制剂质量的可控性，我们参照相关文献［1］，用高效液相法测定黄芩中黄芩苷的含量，并对测定方法进行了方法学考察，取得了满意结果。
       　　1  仪器与试药
       高效液相色谱仪：LC10ATvp泵、SPD10Avp紫外检测器、CTO10ASvp柱温箱（日本岛津）；Shimadzu Libror AEL 40SM(十万分之一)天平（日本岛津）；甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；水（重蒸馏，临用前制备）；磷酸（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；黄芩苷对照品（中检所，批号：110715200212，供含量测定用）；热咳喘胶囊样品（自制，批号：051101，051102，051103）。其余试剂均为分析纯。
       　2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(5 μm,250 mm×4.6 mm，迪马)；流动相∶甲醇∶水∶磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1 ml/min；柱温：30℃；检测波长：280 nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2500。
       2.2  对照品及供试品溶液的制备
       2.2.1  对照品溶液制备精密称取在60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含45 μg的溶液，即得。
       2.2.2  供试品溶液制备取供试品内容物约1 g，精密称定，精密加入70%乙醇100 ml，称定重量，超声处理30 min ，取出，放冷，用70%乙醇溶液补足减失重量；精密量取2 ml置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
       2.2.3  阴性溶液制备取除黄芩以外的其他药材，按制备工艺制成缺黄芩阴性样品。取黄芩阴性样品，按2.2.2项下方法制备，即得。
       2.3  系统适用性试验分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液及缺黄芩的阴性对照溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。从色谱图可知，在此色谱条件下，样品有与对照品黄芩苷相同保留时间的对应峰，并与其他组分峰达完全分离，阴性对照无干扰。
       2.4  线性关系考察精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇稀释制成0.04525 mg/ml的黄芩苷对照品溶液，分别精密吸取黄芩苷对照品溶液5，10，15，25 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，测定结果见表1，并以对照品进样量X（μg）为横坐标，峰面积值Y（mv.s）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=811 224.309 4X-47 854.3，r=0.999 8。结果表明，黄芩苷在0.226 25～1.131 25 μg范围内线性关系良好。
       表1  黄芩苷线性关系考察（略）
       2.5  精密度实验按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10 μl，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积积分值。结果表明精密度良好。结果见表2。
       表2  精密度实验结果（略）
       2.6  稳定性实验取同一供试品溶液，在室温下每隔一段时间进样10 μl，测定黄芩苷峰面积值。结果表明，黄芩苷在12 h内基本稳定。结果见表3。
       表3  稳定性实验结果（略）
       2.7  重复性实验精密称取本品内容物共5份，照前述 2.2.2项下的制备方法制备成供试品溶液，测定黄芩苷含量。结果表明本法重复性良好。结果见表4。
       2.8  回收率实验采用加样回收法实验，精密称取已知含量的同一批样品（黄芩苷含量为18.5378 mg/g）6份。各约0.5 g，精密加入黄芩苷对照品适量，按2.2.2项下的方法制备成供试品溶液，测定，计算回收率。结果见表5。
       表4  重复性实验结果（略）
       表5  加样回收试验结果（略）
       2.9  样品含量测定取热咳喘胶囊3批，按2.2.2项下制备方法，分别制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μl注入液相色谱仪，以标准对照法计算各样品中的黄芩苷含量。结果见表6。
       表6  样品中黄芩苷的含量测定结果（略）
       *为每粒中含量
       　　3  讨论
       本实验过程中，曾参照相关文献［2,3］，选用甲醇 0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液（pH 3.0）(40∶60)；甲醇水（50∶50）为流动相，结果黄芩苷峰分离均不如正文方法理想。供试品处理以回流提取、超声提取进行比较实验，结果回流提取效率和超声提取效率相当，由于超声提取操作方法简便，所以选择超声提取为样品提取方法。供试样品提取时间的考察中，对同一批样品进行不同提取时间（15，30，45，60 min）考察，结果表明，供试样品中的黄芩苷在30 min以上含量变化已不大，说明黄芩苷基本提尽，故选30 min为提取时间。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：211.
       ［2］  唐晓春，张  纲，黄桂方，等.高效液相色谱法对甘露颗粒剂中黄芩甙含量的测定［J］.湖南中医学院学报，1998，18（1）：11.
       ［3］  刘  福，吴功柱.HPLC法测定复方黄芩颗粒剂中黄芩苷的含量［J］.川北医学院学报，2002，15（2）：74.
       (贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳  550002)