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       【关键词】  熟地黄；,,还原糖
       摘要：目的通过还原糖的测定来研究熟地黄的质量控制方法。方法用全自动还原糖测定仪测定熟地黄药材中还原糖的含量。结果平均回收率100.6%，RSD为1.31%（n=6）。结论 该方法简便、可靠、准确、稳定性好，可作为质控参考方法。
       关键词：熟地黄；  还原糖
       Content Determination of Reducing Sugar in Radix Rehmanniae Preparata by Automatic Determine Instrument of Reducing Sugar
       LIU Wei, CHEN Zhihong, LI Jun, WANG Dong
       (Center of Analysis and Measurement of Henan College of TCM, Zhengzhou, 450008, China)
       Abstract：ObjectiveTo study the quality control for Radix Rehmanniae Proparata by determining the content of reducing sugar. MethodsUsing automatic determine instrument of reducing sugar to determine the content of reducing sugar in Radix Rehmanniae Proparate. ResultsThe average recovery was 100.6% and RSD was 1.31%（n=6）. ConclusionThis method is simple accurate and with good stability, which can be used for quality control.
       Key words：Radix Rehmanniae Proparata；  Reducing Sugar ；  Automatic Determine Instrument of Reducing Sugar
   
　　熟地黄为玄参科植物地黄Rehmannia  glutinosa  Libusch的根茎，经加工炮制而成。熟地黄具有滋阴补血，益精填髓之功效［1］。地黄在炮制过程中，还原糖呈规律性变化，本文采用全自动还原糖测定仪法对蒸制、酒炖不同时间的熟地黄中还原糖含量进行了测定，用还原糖含量作为地黄炮制的质控指标［2］。测定仪自动定量加入斐林试剂甲液、乙液和葡萄糖校准液，加入样品液后自动定时加热反应，根据滴定终点时消耗标准还原糖的量，计算样品的还原糖含量。本法简便，准确度高，重现性好，可通过对熟地黄中还原糖含量的测定来控制熟地黄的质量。
       　　1  材料
       1.1   仪器与试剂  SGD-Ⅲ型全自动还原糖测定仪（山东省科学院生物中心研制），葡萄糖（中国药品生物制品检定所）, 硫酸铜, 次甲基蓝, 酒石酸甲钠, 氢氧化钠, 亚铁氰化钾, 双蒸水, 试剂均为分析纯。
       1.2  药材 生地购于河南武陟县，经河南中医学院生药教研室陈随清教授鉴定为生地。生地按《中国药典》熟地炮制方法，蒸制、酒炖得到不同炮制时间的熟地样品。 
       　　2  方法与结果
       2.1  斐林试剂的配制
       2.1.1  斐林试剂甲液称取35.0 g硫酸铜及1%次甲基蓝溶液5ml，溶于水并稀释至3 000 ml。
       2.1.2   斐林试剂乙液称取117.0 g酒石酸甲钠及126.4 g氢氧化钠，溶于水中再加入9.4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，加水稀释至2000 ml贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
       2.2   葡萄糖标准溶液的配制
       2.2.1   1%葡萄糖对照品溶液的配制精密称定葡萄糖（105℃干燥至恒重后）0.50 g，加蒸馏水溶解，加入0.5 ml盐酸用蒸馏水溶解定容于500 ml容量瓶中，浓度为1 mg/ml，备用。
       2.2.2    0.45%葡萄糖标准溶液的配制吸取1%葡萄糖对照品溶液45 ml，加蒸馏水定容至100 ml。
       2.3   样品的预处理取生地黄各500 g，分别清蒸、酒炖不同的时间得下列样品即地黄清-10 h,清-12 h，清-14 h,清-16 h,清-18 h,清-20 h,清-22 h,清-24 h,清-26 h,清-28 h；地黄酒-38 h,酒-40 h,酒-42 h,酒-44 h,酒-46 h,酒-48 h,酒-50 h,酒-52 h,酒-54 h,酒-56 h,将上述样品备用。
       2.4   供试品溶液的制备取各熟地样品适量，80℃干燥，粉碎，过筛，得供试品粉末。取每个供试品粉末约2.0 g,精密称定，加80%甲醇60 ml于烧瓶中，在80%甲醇水浴上回流提取3 h,过滤，用80%甲醇液洗涤药渣3次，合并滤液，回收溶剂，定容至100 ml容量瓶中，摇匀。精密移取上述甲醇提取液50 ml，置蒸发皿中，挥去溶剂，用少量蒸馏水洗涤蒸发皿数次，定容至刻度，摇匀。取上述水溶液10 ml置离心管中离心，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，作样品溶液备用。
       2.5  线性关系的考察取干燥至恒重的无水葡萄糖2.0 g，精密称定，置100 ml容量瓶中，加0.1 ml盐酸，分别精密吸取上述葡萄糖溶液1，2，3，4，5，6 ml于6个10 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。用还原糖测定仪测定上述标准溶液中还原糖含量，每次进样0.5 ml。以测定值Y为纵坐标，还原糖含量X为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=1.015 7X-0.012 7, r=0.999 9，还原糖在0.002～0.012 g，具有良好的线性关系。
       2.6  精密度实验取清-22 h溶液,按全自动还原糖测仪法重复测定6次，其还原糖平均含量为40.2%，RSD值为0.76%，精密度良好。
       2.7  重现性试验取清-22 h溶液6份，按全自动还原糖测仪法测定，其还原糖平均含量为40.3%，RSD值为1.09%，重现性良好。
       2.8  稳定性实验取清-22 h溶液,按全自动还原糖测定法分别在0，4，8，12，16，20，24 h测定还原糖含量，其RSD值为1.38%，表明在24 h内供试品溶液中还原糖含量较稳定。
       2.9   加样回收率实验精密称取6份已知含量的样品1.0g，每份加入无水葡萄糖对照品0.399 6 g,按样品测定项下测定，还原糖平均回收率为100.6%，RSD为1.31%。结果见表1。
       2.10   样品溶液的测定分别精密吸取样品溶液各0.5 ml，注入还原糖测定仪反应池中，每个样品平行测定3次，取平均值即得。结果见表2。
       表1  熟地黄中还原糖回收率测定结果（略）
       表2   清蒸、酒炖熟地样品还原糖含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1   样品的提取过程中，80%甲醇提取的样品液颜色为黑红色，采用活性炭脱色布氏漏斗抽滤除活性炭，有细微粉末留于溶液中，再经垂熔漏斗抽滤最终溶液中仍有细小活性炭粉末不能除尽，且经活性炭脱色的样品液还原糖含量偏低，说明活性炭对其有吸附，故采用稀释样品液的方法减少或消除样品液测定过程中的颜色干扰。
       3.2   目前测定还原糖的方法很多，有比色法，斐林试剂滴定法等，还原糖测定仪法为较新的方法，目前尚未见报道。使用还原糖测定仪测定的重现性、精密度较好，其测定原理与斐林试剂滴定法相同，但操作更加简便，不需要加热滴定，亦克服了手工滴定人为造成的误差，故此方法可作为熟地样品中总还原糖含量的测定方法。
       3.3     目前各地炮制方法差异较大，对不同蒸制、酒炖时间的熟地黄没有客观的质量检测指标，本文以还原糖为指标考察不同蒸制、酒炖时间的变化规律，方法简便，重复性好，精密度高，可见以还原糖作为检测指标是可行的。
       　　参考文献：
       ［1］  江苏医学院.中药大辞典，下册［M］.上海：上海科学出版社，1986：2568.
       ［2］  刘美丽，白荣枝，冯汉林. 炮制对地黄中还原糖含量的影响［J］.中草药，1996，27（8）：470.
       （河南中医学院分析测试中心，河南   郑州  450008）