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       【关键词】  双灵油；,,毛细管气相色谱法；,,质量标准
       摘要：目的建立双灵油中挥发性成分（薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑和桉油精）的质量控制标准。方法采用毛细管气相色谱法对制剂中薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑和桉油精进行定性鉴别，并用外标法测定制剂中薄荷脑的含量。结果薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑和桉油精4种成分均达到良好分离，薄荷脑在测定范围内线性良好，平均回收率为100.04%，RSD值为0.80%（n=9）。结论所建立的方法快速、稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制标准。
       关键词：双灵油；  毛细管气相色谱法；  质量标准
       Quality Standard of Shuangling Linimentum
       CAI Dake, LI Geng, HU Junying, HUANG Xiaoqi, SU Ziren*
       (Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard of Shuangling Linimentum (menthol,  menthyl salicylate, camphor, cineole). Methods A 100% polyethylene glycol was used as stationary liquid phase. The GC was equipped with FID detector at 250℃, and determined by programmed temperature GC. Results The resolution and the linearity were fine with the rate of recovery of menthol 100.04%， RSD=0.80%. Conclusion The method is convenient, rapid and accurate. It can be used for the quality standard of this preparation.
       Key words：Shuangling Linimentum;  GC;  Quality Standard
   
　　双灵油是家庭常备中成药，由薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑、桉叶油4味制成，具有祛风止痒作用，用于伤风鼻塞、冻疮、虫咬、皮肤瘙痒等。原标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》“双灵油”（编号：WSB250797）。该质量标准较简单，仅建立了分光光度法测定最大吸收波长的鉴别方法。为更有效地控制药品质量，本研究采用气相色谱法，对薄荷脑（menthol）、水杨酸甲酯（menthyl salicylate）、樟脑（camphor）以及桉叶油中的桉油精（cineole）进行定性鉴别，并对方中君药薄荷脑进行了含量测定，以期完善双灵油的质量标准。
       　　1  仪器与试药
       美国VARIAN3900气相色谱仪（含FID Detector）；数据处理系统为美国VARIAN Star Chromatography Workstation Version 6.00；美国Phenomenex公司ZBWAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。对照品：樟脑（批号747200106）、薄荷脑（批号0728200005）、水杨酸甲酯（批号707200107）、桉油精（批号07889202）均由中国药品生物制品检定所提供；双灵油（批号20041101，20041102，20041103），由广州中医药大学新药开发研究中心提供；氮气、氢气和空气为色谱纯，购自广州气体厂有限公司；其它试剂均为分析纯。
       　　2  方法
       2.1  色谱条件与系统适用性美国Phenomenex公司ZBWAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm ），固定液聚乙二醇（Polyethylene Glycol），涂布浓度为100%；柱流量：1.0 ml・min-1；载气：N2：25 ml・min-1；检测器：FID， H2：30 ml・min-1，Air：300 ml・min-1，检测器温度为250℃；进样口温度：210℃，进样量2 μl，分流进样，分流比为20∶1；柱温程序升温50→235℃：初始温度保持2 min后，先每分钟升高60℃，升至120℃后保持5 min，再每分钟升高10℃，升至150℃后，再每分钟升高60℃，升至235℃后保持3 min［1］。在该色谱条件下，薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑、桉油精4种成分可达基线分离，4种成分的理论塔板数均大于70 000。
       2.2  毛细管气相色谱法鉴别
       2.2.1  对照品溶液的制备［2］精密称取薄荷脑、水杨酸甲酯、樟脑、桉油精对照品适量，置50 ml的容量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，摇匀，作为对照品溶液，4种成分的浓度分别为4.2，0.8，3.2，0.2 mg/ml。
       2.2.2  供试品溶液的制备取本品约58 mg，精密称定，置50 ml容量瓶中，用醋酸乙酯稀释至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，滤液作供试品溶液。另取缺樟脑阴性样品、缺薄荷脑阴性样品、缺水杨酸甲酯阴性样品、缺桉叶油阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法制成缺样供试品溶液。
       2.2.3  测定法取上述对照品溶液、供试品溶液和缺样供试品溶液，各精密吸取2 μl，进行GC测定，结果见图1。结果显示，供试品色谱呈现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰，阴性对照无干扰。
       a樟脑  b薄荷脑  c水杨酸甲酯
       图1  双灵油中挥发性成分气相色谱的总离子流图（略）
       2.3  毛细管气相色谱法测定薄荷脑的含量
       2.3.1  线性关系考察精密称取薄荷脑对照品适量，置5 ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液。用微量进样器精密吸取对照品储备液40，60，80，100，140，160，200 μl至1 ml容量瓶中，醋酸乙酯定容，成系列浓度对照品溶液。每个浓度对照品溶液取2 μl进样，按2.2.1项下方法进行测定，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得标准曲线：Y=231 293X-1 202.3， r=0.999 9，线性范围：0.20~1.02 μg。
       2.3.2  精密度精密吸取线性关系项下4号标准溶液2 μl，进样分析6次，结果峰面积RSD=1.66%，结果显示该仪器精密度良好。
       2.3.3  稳定性取线性关系项下4号标准品溶液，分别在放置0，2，4，6，12 h后，精密吸取2 μl进样，GC测定峰面积，结果薄荷脑峰面积的RSD=1.09%。结果显示供试品溶液在12 h内稳定。
       2.3.4  重复性取双灵油（批号20041101）5份，按2.2.1项下方法操作，精密吸取2 μl进样，GC测定峰面积，记录薄荷脑峰面积并计算含量，结果RSD=0.34%，显示方法重现性良好。
       2.3.5  加样回收率实验精密称取己知含量的同一批样品（20041101）9份，各约29 mg，分别精密加入对照品溶液适量（为样品薄荷脑含量的0.8，1.0，1.2倍量），按2.2.1项下方法操作，精密吸取2 μl进样，GC测定峰面积，计算含量，并按下式计算回收率：加样回收率（%）=（实测量-样品量）/加入量×100%。结果表明，平均回收率为100.04%，RSD=0.80%（n=9)。结果见表1。
       表1  回收率实验结果（略）
       2.3.6  样品含量测定取双灵油样品3批（20041101，20041102，20041103），按2.2.1项下方法操作，精密吸取2 μl进样，GC测定峰面积，记录薄荷脑峰面积并计算含量。结果见表2。
       表2  样品含量测定结果（略）
       　3  讨论
       3.1  双灵油处方中4种成分含量差异大。薄荷脑占全方的25%，水杨酸甲酯16%，樟脑2%，桉油2%，其余为基质液体石蜡。本实验采用气相色谱法对4种成分进行鉴别［3］，灵敏专一，对含量差异大的成分，均可在同一条件下鉴别。与薄层色谱鉴别比较，操作更加简便，结果更加稳定可靠、准确；而且避免了前期提取分离等复杂的实验操作，节约了实验成本，提高了鉴别的准确度，完善了对药品的质量控制。
       3.2  本制剂是以液体石蜡为溶剂的搽剂，液体石蜡烃类成分多，出峰多难以插入内标物［4］，所以本实验含量测定中选用外标法。采用外标测定薄荷脑含量，方法简便、快速、专一、稳定、可靠、重现性好，含量测定结果与实际加入值相近。
       　　参考文献：
       ［1］  魏嘉陵.程序升温气相色谱法对公益正红花油进行定性定量分析［J］.广东药学，1994，3（1）：33.
       ［2］  国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2000.
       ［3］  李雪玉.气相色谱法对舒筋健络油的4种主要成分的定量分析［J］.广东药学，1994，2（3）：23.
       ［4］  徐  华，刘伟华，杨少芳，等.气相色谱法测定肤康软膏中冰片的含量分析［J］.中国医院药学杂志，2005，25（8）：743.
       (广州中医药大学，广东 广州  510405)