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       【关键词】  抗感颗粒；,,提取工艺；,,正交设计；,,总黄酮；,,甘草酸
       摘要：目的优选抗感颗粒最佳提取工艺。方法以总黄酮和甘草酸的含量为考察指标，采用正交实验法对抗感颗粒的提取工艺进行优选。结果最佳提取工艺为：加水量为14倍，提取时间为1 h，提取次数为3次。结论 该工艺稳定性好，适合工业化生产。
       关键词：抗感颗粒；  提取工艺；  正交设计；  总黄酮；  甘草酸
       Study on Process for Extraction of Kanggan Granule
       XU Fang，YAN Ming，HUANG Yi，WANG Xintang，ZHONG Jie
       (Xinjiang Institute of Materia Medica，Urumqi，Xinjiang 830002，China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the optimum extraction technology of Kanggan granule. MethodsUsing the orthogonal design, the extraction technology were optimized by content determination of total flavonoids and glycyrrhizic acid. ResultsThe best extraction condition was to soak the herbs in 14 times water and boil 3 times, each time for 1 hour. ConclusionThis process is stable and suitable for production.
       Key words： Kanggan Granule；  Extraction technology ；  Orthogonal design；  Total flavonoids；  Glycyrrhizic acid
   
　　抗感颗粒是由破布木果、大枣、甘草、蜀葵子等药材提取制成，具有调节异常气机、止咳化痰之功效，用于感冒咳嗽、咽喉肿痛等病症，疗效显著。为了发挥药物的最佳疗效和经济效益，优化制备工艺，本研究以总黄酮和甘草酸的含量作为考察指标，采用正交实验法优选出最佳的提取工艺，以期为工业化提取生产提供依据。
       　　1  仪器与材料
       1.1   仪器  UV2501PC紫外可见分光光度计（日本岛津）； BS110S型电子天平（德国Sartorius）；LC10ATvp高效液相色谱仪，SPD10Avp紫外可见检测器，CLASSvp6.0数据工作站（日本岛津）。
       1.2    材料  药材由新疆参茸药业有限责任公司提供；芦丁、甘草酸单胺盐对照品均由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  考察指标的确定［1］因为本制剂为抗感冒制剂，处方中多数药材都含有黄酮类成分，而黄酮类成分具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用，故将总黄酮含量作为考察指标，权重系数定为0.5；甘草中所含的甘草酸具有抗炎、镇咳祛痰及免疫增强作用，故将甘草酸含量作为考察指标，权重系数定为0.5。每项指标中以最高者为100分，分别乘以权重系数即得每项指标得分，两项指标得分之和为综合评分。
       2.2  考察指标的测定方法
       2.2.1  总黄酮的测定方法［2，3］采用分光光度法测定总黄酮，即芦丁对照品分别加5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠溶液显色，于510 nm波长处测定吸收值，得回归方程为：C(mg)=0.012 61+0.893 0A，r=0.999 8，在0.108 2～1.082 0 mg浓度范围内呈良好线性关系。精密量取一定量样品溶液，同法操作，在510 nm处测定吸收值，代入回归方程，计算含量。
       2.2.2   甘草酸的测定方法［4～6］
       色谱条件  色谱柱为Shimpack CLCODS柱（4.6 mm×150 mm ，5 μm）；流动相为乙腈2%乙酸溶液（40∶60）；流速1 ml/min；检测波长254 nm；柱温30℃。
  
　　标准曲线制备  取甘草酸单胺盐对照品约10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取一定体积用甲醇配成系列浓度溶液。精密吸取各溶液10 μl注入高效液相色谱仪，以甘草酸的峰面积A与甘草酸单胺盐的浓度Cμg/ml作直线回归，得回归方程为：C=-5.962 1+1.397 9×10-4A，r=0.999 5，在12.50～250.00 μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。
 
　　供试品溶液制备及测定  精密量取一定量的样品溶液置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置24 h，离心，取上清液用0.45 μm滤膜过滤。取续滤液10 μl注入高效液相色谱仪，将测得的峰面积代入回归方程，计算含量。
 
　　阴性对照溶液的制备及测定  按处方比例，取除去甘草的其它药味，制成模拟空白样品。按前述方法操作，结果在甘草酸的出峰位置处无其它干扰。
       2.3  正交实验法优选提取工艺
       2.3.1  实验设计选取加水量、提取时间和提取次数作为考察因素，每个因素各取3个水平，编制因素和水平表，见表1。采用L9(34)正交表进行实验。结果见表2。
       2.3.2  实验与结果  按处方比例称取破布木果、大枣、甘草、蜀葵子等药材共17.1 g，按L9(34)正交表进行实验，以总黄酮和甘草酸的含量计算所得的综合评分作为考察指标。结果见表2。方差分析见表3。
       表1  正交实验因素水平（略）
       表2   正交实验结果（略）
       表3  方差分析（略）
       表2的R值和表3的F值可以看出，各因素对实验结果的影响程度依次为C＞A＞B。方差分析结果表明，C因素对实验结果有显著意义（P＜0.05），A和B因素对实验结果无显著意义（P＞0.05）。综合考虑，确定各因素的最佳水平组合为A3B1C3，即加14倍量水，提取3次，1 h/次。
       2.3.3  验证实验  根据筛选得出的最佳工艺A3B1C3重复提取3次，测定总黄酮和甘草酸的含量。结果总黄酮的含量分别为1.478%，1.495%，1.503%；甘草酸的含量分别为0.137%，0.140%，0.144%。
       　　3  讨论
       正交实验的极差分析结果表明，提取次数和加水量对实验结果有较大影响，而提取时间对实验结果影响很小，各因素的最佳水平为A3B3C3。方差分析结果表明，提取次数对实验结果有显著影响，而加水量和提取时间对实验结果无显著性影响；鉴于提取时间对实验结果无显著性影响，从节省工时和成本考虑，选择B1，因极差分析结果表明加水量对实验结果有较大影响，故仍选择A3。综合考虑确定最佳提取工艺为A3B1C3，即加14倍量水，提取3次，1h/次。以此最佳提取工艺进行验证实验，结果表明总黄酮和甘草酸的含量高，稳定性好，适合工业化生产。
       　　参考文献：
       ［1］  谢秀琼. 中药新制剂开发与应用，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，2000：124.
       ［2］  韩  莹，张红星. 康寿降脂片的工艺研究［J］.中成药，1998，20（7）：5.
       ［3］  李  莎. 活血降压冲剂工艺质量研究-冲剂中总黄酮及总蒽醌的测定［J］. 中成药，1993，15（1）：11.
       ［4］  崔铉玖，迟彦春，金银河，等. HPLC测定芎芷香苏散流浸膏中甘草酸的含量［J］.药物分析杂志，1996，16（5）：323.
       ［5］  王兰霞，杨玲霞，张伯崇. RPHPLC测定五味沙棘口服液中甘草酸的含量［J］.中国药学杂志，1997，32（7）：434.
       ［6］  肖云祥，胡志厚，冯韧韧. 高效液相色谱法测定甘草及人丹中甘草酸的含量［J］.中成药，1990，12（6）：10.
       （新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆 乌鲁木齐  830002）