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       【关键词】  灰绿黄堇；,,总生物碱；,,抗炎；,,镇痛；,,毒性
       摘要：目的探讨灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用及其动物毒性反应情况。方法小鼠热板法镇痛实验、小鼠扭体法镇痛实验、小鼠耳廓肿胀实验、小鼠毛细血管通透性实验和小鼠急性毒性实验。结果灰绿黄堇总生物碱能明显延长热板所致小鼠舔后足时间（P＜0.05）, 明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数（P＜0.05）、减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（P＜0.05）,但对组胺所致小鼠毛细血管通透性增高无降低作用（P＞0.05）;小鼠口服半数致死量LD50为1.87 g ・kg－1。结论灰绿黄堇总生物碱有较好的镇痛作用及部分抗炎作用,但也具有一定毒性。
       关键词：灰绿黄堇；  总生物碱；  抗炎；  镇痛；  毒性
       Anti-inflammatory and Analgesic Effect of Total Alkaloid from Corydalis adunca maxim and its  Toxicity
       LONG Xiaoyan
       (College of Life Science and Engineering of Southwest University of Science and Technology, Mianyang, 621000, China)
       Abstract:ObjectiveTo study anti-inflammatory and analgesic effects  of total alkaloid from Corydalis adunca maxim  and to observe its toxicity.MethodsHot plate experiment , mouse acetic-acid-induced twisting experiment, mouse ear-swelling experiment, mouse capillary permeability experiment and mouse acute toxicity experiment were carried out in this study. ResultsThe results showed that total alkaloid from Corydalis adunca maxim could  remarkably prolong the time of mice lick its backfoot, reduce the twisting times in mice（P＜0.05）and relieve mouse ear- swelling induced by dimethylbenzene （P＜0.05）, but it had no effect on the increase of rat capillary permeability induced by histamine （P＞0.05）. The LD50 of oral dose in mice was 1.87（g/kg）.ConclusionTotal alkaloid from Corydalis adunca  maxim  has good anti-inflammation and analgesic actions, butit also has some toxicity.
       Key words:Corydalis adunca maxim;  Total alkaloid;  Anti-inflammatory;  Analgesic;  Toxicity
   
　　灰绿黄堇Corydalis adunca Maxim.是罂粟科Papaveraceae紫堇属Corydalis植物的干燥块根。味苦，性凉，有清热解毒止血的功能，在民族医药方面被广泛用于消炎，利胆，排石，止痛，但其药理活性及毒性研究较少且局限。为全面研究其药理活性及毒性，我们对其总生物碱进行了抗炎镇痛实验及毒性实验。
       　1  材料
       1.1  动物昆明种小鼠, 18～22 g, 雌雄兼用；SD大鼠，体重180～200 g，雄性,四川大学实验动物中心提供。
       1.2  药物灰绿黄堇为市售药材干品, 经绵阳市药品检验所聂盛贤主任药师鉴定。实验前根据剂量要求, 称取灰绿黄堇2.5 kg, 用10 倍体积1% 盐酸浸泡, 滤过后的提取液经阳离子交换树脂提取, 用pH 10的95% 氨性乙醇洗脱, 洗脱液用氯仿萃取纯化, 蒸干后得到总生物碱108 g。总生物碱含量约占生药量的4.3%。实验时用0.5% 羧甲基纤维素钠(CMC) 制成混悬液。阿司匹林肠溶片（南京白敬宇制药有限责任公司，批号050507）；芬必得片（中美天津史克制药有限公司生产， 批号050304743 ）；地塞米松片(浙江仙琚制药股份有限公司, 批号20050425)。
       1.3  仪器GJ28402 型热板测痛仪(浙江宁海白石电子医药仪器厂, 温度（55 ±0.2）℃；LP2001A型电子天平常熟市衡器厂；双光束紫外分光光度仪（北京普析通用仪器有限公司，型号TU-1900） 。
       2  方法与结果
       2.1  镇痛作用
       2.1.1  热板法致痛实验［1］将雌性小鼠随机分5 组:空白对照组(CMC)、阳性对照组 (阿司匹林200 mg・kg-1)、灰绿黄堇总生物碱低、中、高剂量组(100,200，400 mg・kg-1) , 每组10 只, 置于(55.0±0.5) ℃ 热板仪上, 以小鼠舔后足为疼痛反应, 以疼痛反应潜伏期为痛阈指标, 给药前测3次, 取均值作为基础痛阈, 剔除基础痛阈< 5 s 或>30 s 的动物。各组都灌胃给药,给药后1 h 再次置于热板上, 记录疼痛反应潜伏期。结果见表1。
       表1  灰绿黄堇总生物碱对小鼠热板致痛的影响的镇痛作用（略）
       与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=10
       结果表明灰绿黄堇总生物碱大剂量组与阿司匹林组与对照组比较 P< 0.01;中剂量组与对照组比较P< 0.05 , 表明灰绿黄堇总生物碱有显著提高痛阈值的作用。
       2.1.2  醋酸致扭体反应实验［1］取小鼠50只，雌雄各半，分组、给药方法及剂量同2.1.1项。给药后1 h 各组动物均予腹腔注射0. 6% 醋酸0.2 ml, 记录15 min内扭体次数。结果见表2。
       表2  灰绿黄堇总生物碱对小鼠扭体反应的影响（略）
       与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=10结果表明灰绿黄堇总生物碱高、中剂量组及阳性药阿司匹林组与对照组比较分别为P< 0.05,显示较好的镇痛作用。
       2.2  抗炎作用
       2.2.1  二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验［2］取小鼠50只，雌雄各半随机分5 组:空白对照组(CMC)、阳性对照1组 (地塞米松30 mg・kg- 1 )、灰绿黄堇总生物碱低、中、高剂量组( 100, 200，400 mg・kg- 1 ) , 每组10 只,分别灌胃给药, 灌胃容积0.2 ml/10 g (下同) , 1次/d，连续3d。 末次药后1 h, 将0.1 ml 二甲苯均匀涂于小鼠右耳两面致炎, 左耳不涂作对照, 致肿1h 脱颈椎处死小鼠, 用直径8mm打孔器冲下左耳及右耳同一部位的圆片，于分析天平上称重。右耳重量减去左耳重量为肿胀度。结果见表3。
       表3  灰绿黄堇总生物碱对小鼠二甲苯致耳廓肿胀的影响（略）
       与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=10结果表明，灰绿黄堇总生物碱中剂量组可显著抑制鼠耳肿胀。
       2.2.2  大鼠毛细血管通透性实验（ 皮内色素渗透法）［2］取健康SD大鼠32只， 随机分为空白对照组、芬必得组（ 50 mg・kg-1）、灰绿黄堇总生物碱高、中剂量组（200,400 mg・kg-1）、每组8只，各组大鼠分别预给药7 d，灌胃给药1次/d。末次给药后麻醉大鼠（3% 戊巴比妥钠，40 mg/kg体重，腹腔注射），腹部剃毛，皮内注射1 mg/ml 组胺0.1 ml( 生理盐水配制)，立即静脉注射1%伊文氏蓝生理盐水液4 ml/kg。20min后断头处死动物，将着色皮肤剥离，把蓝斑剪下，剪碎，放入5ml生理盐水丙酮液（3∶7） 内浸泡24 h，3 000 r/min 离心15min,上清液于590 nm处测吸光度（OD值）。结果见表4。
       表4  灰绿黄堇总生物碱对大鼠毛细血管通透性的影响（略）
       与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=8结果表明灰绿黄堇总生物碱对毛细血管通透性无降低作用，而对照药芬必得作用较显著（P<0.05）。
       2.3  急性毒性实验根据预实验的结果，取昆明种健康小鼠50只，雌雄各半，体重20～22 g,为以全数致死量(Dm)和全不致死量(Dn)的浓度作为实验的最高和最低浓度组，高低剂量比值1∶K为0.85［2］，随机分设定5个剂量组,给药量分别见下表验前24 h，小鼠禁食不禁水，分别按组给以不同浓度的灰绿黄堇总生物碱溶液（0.2 ml/10 g），给药后连续观察7 d，并详细记录其死亡数目、死亡时间及活动情况。动物在给药1 d内死亡。给药后出现呼吸困难、全身抽搐、舌头外伸的异常表现，死亡动物剖检未见异常表现。结果见表5。
       表5灰绿黄堇总生物碱小鼠灌胃LD50计算表（略）
       用改良寇氏法计算灰绿黄堇总生物碱的LD50＝1.87 g・kg-1,95%的可信限为（1.87±0.03）g・kg-1。
       　3  讨论
       灰绿黄堇作为资源丰富的民族药, 广泛用于黄疸、痢疾、石淋、水肿等。从现有研究资料看, 对灰绿黄堇的报道较少, 主要有两方面: 一是灰绿黄堇生物碱和挥发油化学成分的研究［3~5］， 二是对灰绿黄堇水煎剂的药理作用的研究［6］，而灰绿黄堇相关化学成分的药理研究似尚未见报道。实验证实, 灰绿黄堇总生物碱能有效减轻二甲苯引起的耳廓肿胀，但对组胺所致大鼠毛细血管通透性增高无降低作用，表明灰绿黄堇总生物碱有部分抗炎功效。同时，本实验结果表明，灰绿黄堇总生物碱能明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，明显延长小鼠热板疼痛反应潜伏期, 说明它有良好的镇痛作用； 灰绿黄堇总生物碱的抗炎镇痛作用无明显剂量依赖关系,对炎症模型, 中剂量具有较好药理活性,应予关注。在毒理实验中，我们发现灰绿黄堇总生物碱存在较大的毒性。小鼠灌胃后，半数致死量LD50为1.87 g ・kg-1。小鼠死亡主要发生在给药后的3 h以内，主要毒性表现为呼吸困难、全身抽搐，而且其安全范围窄。初步分析灰绿黄堇总生物碱的主要毒性反应可能发生在呼吸系统，这也提示我们在临床用药过程中，应充分重视药物的给药剂量，以免中毒发生。其详细作用机制有待进一步研究。
       参考文献：
       ［1］  徐叔云, 卞如濂, 陈  修.药理实验方法学，第2版［M］.北京:人民卫生出版社, 2003：524.
       ［2］  陈  奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993：303.
       ［3］  唐艳丽, 杨爱梅, 张樱山,等.灰绿黄堇生物碱化学成分的研究(Ⅰ )［J］.中国中药杂志，2005，30（3）：196.
       ［4］  赵东保, 唐艳丽, 汪汉卿,等.灰绿黄堇生物碱化学成分的研究( Ⅱ)［J］.中国中药杂志，2005，30（22）：1756.
       ［5］  张  继, 马君义, 杨永利，等.灰绿黄堇挥发性成分的分析研究［J］.兰州大学学报（自然科学版），2003，39（6）：68.
       ［6］  王继生,张  莉,邱宗荫，等.灰绿黄堇镇痛抗炎作用研究［J］.中药药理与临床，2005,21 (5)：33.
       (西南科技大学生命科学与工程学院，四川 绵阳  621000)