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       【关键词】  二苯乙烯苷；,,,稳定性；,,高效液相色谱；,,何首乌
       摘要：目的制备首乌精口服液，并对其进行质量控制考察。 方法以55%乙醇，7倍量，45 min，提取何首乌有效部位，制成首乌精口服液母液；并在10，20和30 d，以SymmetryC18（250 mm×3.9 mm，5 μm）为固定相，乙腈水（17∶83）为流动相，检测波长为320 nm，流量1 ml/min，应用HPLC测定其有效成分（二苯乙烯苷）。 结果二苯乙烯苷在0.45～1.8μg与峰面积线性关系良好。口服液中有效成分（二苯乙烯苷）在强酸、强碱和pH 5.8条件下不稳定，在室温，避光，pH 7.0~7.5条件下30 d内含量变化很小，其t0.95值估计为120 d。 结论首乌精口服液的制备方法是可行的，质量可控。
       关键词：二苯乙烯苷；   稳定性；  高效液相色谱；  何首乌
       The Preparation of Shouwujing Oral Solution and Investigation on its Quality Control
       WANG Chunhua, SHEN Yan,  ZHANG Wei*
       (Medical College in Nantong University, Nantong, Jiangsu,226001,China)
       Abstract：ObjectiveTo make Shouwujing Oral Solution and investigate its quality control. MethodsMother liquid was made by 55%alcohol of seven double doses after Shouwujing (stilbene glucosidal )extracted in 45 min. On the 10 th ,20 th ,30 th days,active ingredient(stilbene glucosidal) was respectively detected by an HPLC with fixed phase of Symmetry-C18 (250 mm×3.9 mm,5 μm)and mobile phase composed of water-acetonitrile-(83∶17).The detection wavelength was 320 nm and the flow rate was 1.0 ml・min-1.ResultsLinear correlation was found between the content of stilbene glucosidal (0.45～1.8μg) and peak area. Content of active ingredient (stilbene glucosidal) in mother liquid wasn"t stable in a strong acid, strong basic or pH 5.8 condition,but it altered marginally under the condition of regular temperature away from light and pH 7.0~7.5 within 30 days time.The value of t0.95 was 120 days. ConclusionThe preparation of Shouwujing Oral Solution is feasible and its quality can be control.
       Key words：Stilbene glucoside；  Stability；  HPLC；  Polygonum multiflorum Thunb
   
　　何首乌Polygonum multiflorum Thunb.为蓼科植物何首乌的干燥块根，是乌须发、悦颜色、养精血、抗衰老的要药。现代药理研究证明：首乌及其所含的二苯乙烯苷化合物具有抗衰老、提高免疫功能、防治动脉硬化及保肝等作用［1］。临床应用研究表明，首乌及其有效成分二苯乙烯苷在防治中老年疾病如高脂血症、高血压病、慢性气管炎、糖尿病；精神神经性疾病如神经衰弱、癫痫等诸多方面均具有较为显著的疗效［2］。本实验采用乙醇提取何首乌的有效部位，制备首乌精口服液， HPLC测定其有效成分，并对其进行质量控制考察。
       　1  仪器与材料 
       Waters1525高效液相色谱仪（Waters1525Binary 泵，AUTOSAMPLER717进样器，Waters2487型双波长紫外检测器）；M32色谱工作站；美国沃特斯公司产。AUW120D十万分之一电子分析天平，日本岛津公司产。RE5286A旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂。SHZD（Ⅲ）循环水式真空泵，巩义市英谷予华仪器厂。二苯乙烯苷对照品，其含量大于98%，成都思科华生物技术有限公司提供。乙腈为色谱纯，流动相用水为超纯水，乙醇等为分析纯。
       　2  处方与制备
       2.1   处方二苯乙烯苷，苯甲酸钠，白砂糖，食用香料等。
       2.2   制备何首乌，四川地产药材，打粉，过60目筛。称取何首乌粉末100 g置于容量瓶中，量取55%的乙醇700 ml加入容量瓶中（固液比为1∶7）后，静置浸润30 min，在75℃ 加热回流，乙醇提取时间为45 min，冷却、静置让其充分沉淀后过滤，弃去滤渣。然后将提取液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩，55~60℃真空浓缩提取液，室温下静置24 h后，取上清液放入圆底烧瓶中，并加入适量蒸溜水定容至刻度得口服液母液，HPLC测定其二苯乙烯苷含量，将其稀释至0.1%，加入防腐剂等，调节pH至7.0~7.5，滤过，灌封，灭菌，即得首乌精口服液30 mg（含二苯乙烯苷）/10 ml/支。
       　3  质量控制
       3.1   性状 本品为棕红色液体，味苦，微甘。
       3.2   定性鉴别（二苯乙烯苷）取本品10 ml，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，浓缩至1 ml，作为供试品溶液。另取二苯乙烯苷对照品微量置于已干燥至恒温的1 ml的容量瓶中，加50%的乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤。将两者分别倒入试管中，再沿管壁徐徐加入10% 的a-萘酚溶液数滴(Molish反应)，两试管中显相同颜色的变化。
       3.3  二苯乙烯苷含量的测定
       3.3.1  高效液相色谱条件色谱柱为Symmetry C18（3.9 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（17∶83），流速为1.0 ml/min，测定波长320 nm，柱温30℃。二苯乙烯苷对照品及何首乌的色谱图见图1~2。
       3.3.2   对照品的置备精密称取二苯乙烯苷对照品1.35  mg置于已干燥至恒温的10 ml的容量瓶中，加50%的乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤备用。
       3.3.3  供试品的制备精密吸取自制二苯乙烯苷100 μl置于已干燥至恒温的10 ml的容量瓶中，加50%的乙醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤备用。
       图1  供试品色谱图（略）
       图2  对照品色谱图（略）
       3.3.4   标准曲线的绘制将标准品1ml装入1~5号进样管，分别取3，6，9，12，15 μl进样，记录色谱图和各浓度相应的峰面积，经统计学处理求得回归方程为：Y=4.73e+0.06X-2.12e+0.05，r=0.999 987，进样量在0.45～1.8μg线性关系良好。
       3.3.5   精密度实验精密吸取对照品溶液10ml连续进样5次，峰面积RSD为0.4%。
       3.3.6   母液二苯乙烯苷含量的测定取样品供试品10 μl进样测定二苯乙烯苷的含量。结果见表1。
       表1  不同批次二苯乙烯苷含量测定（略）
       　4  二苯乙烯苷稳定性研究
       4.1  pH值对二苯乙烯苷溶液稳定性的影响 精密称取二苯乙烯苷样品，分别用1%醋酸、4%硫酸、1%Na2HPO4和4%NaOH 溶液配制成0.1 mg/ml二苯乙烯苷溶液，pH值依次为5.8，＜1，7.8，＞14，依次编号为I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，密闭，室温下不避光放置。I，Ⅲ，Ⅳ于第1，3，5，7天，Ⅱ于第5，12，24 h取10 μl溶液进行HPLC测定。
       4.1.1  弱酸性条件下(pH 5.8)1 d内在二苯乙烯苷峰(tR=6.32 min)前出现一个新的单峰(tR=1.83 min)，此峰最大吸收波长为280 nm，与二苯乙烯苷的吸收波长(320 nm)相比发生移动，且随时间推移，二苯乙烯苷峰峰面积减小，新单峰峰面积增加。见图3。
       4.1.2  强酸性条件下(pH＜1)二苯乙烯苷极不稳定，5h后其质量分数降至40.2%，24 h后已检测不到此物质。弱碱性条件下(pH7.8)，二苯乙烯苷较稳定，7d后，质量分数为98.35%。4.1.3   强碱性条件下(pH＞14)二苯乙烯苷水溶液颜色逐渐加深，48 h后已检测不到二苯乙烯苷峰。
       4.2  实验中还观察到避光条件下加成反应明显减慢，故光可催化此反应。
       图3  弱酸条件下二苯乙烯苷在第1天和第7天的HPLC图谱（略）
       4.3  二苯乙烯苷水溶液条件下，将二苯乙烯苷水溶液（pH 7.0~7.5）置于干燥棕色瓶中，密闭、室温下放置，于第10天、20天和30天，应用HPLC测定其二苯乙烯苷含量。结果表明：室温、避光、密闭放置的二苯乙烯苷水溶液中的二苯乙烯苷质量分数（%）变化较小。经推测其t0.95为120 d，提示二苯乙烯苷水溶液较稳定。并把相同批次的二苯乙烯苷提取物烘干后配成水溶液测得其质量分数，可见二苯乙烯苷质量分数（%）变化较大。结果见表2。
       表2  二苯乙烯苷水溶液的稳定性（略）
       　5  讨论
       5.1  对何首乌的有效部位提取，本研究采用55%乙醇，7倍量提取45 min，无需烘干，提取方法较文献［4，5］报道简便，且提取液有效成分二苯乙烯苷得到率较高。实验结果表明，将何首乌醇提取液烘干后，质量分数明显下降，其有效成分二苯乙烯苷破坏较多。
       5.2   首乌精口服液在室温、避光、密闭、pH7.0~7.5条件下较稳定，二苯乙烯苷在中性和弱碱性水溶液中较稳定，其t0.95的时间较长，本实验与文献［6］报道一致，故认为首乌精口服液的制备简便、方法可行。
       5.3  采用高效液相色谱仪测定首乌精口服液中有效成分，方法简便、定量准确、重现性好，提示首乌精口服液质量可控。
       参考文献：
       ［1］  李玉芳，和玄华.何首乌现代研究进展［J］.中成药，1997，19（5）：37.
       ［2］  邓文龙，龚世荣.何首乌研究进展［J］.中草药，1987，18（3）：42.
       ［3］  鲁  静，栗晓黎，董海荣，等.高效液相色谱法测定何首乌及制首乌中羟氏衍生物的含量［J］.药物分析杂志，2002，33（7）：607.
       ［4］  白海波，王剑飞，龙  娟.何首乌提取工艺设计［J］.中国中药杂志，2004，29（3）：219.
       ［5］  王英锋，许  彬，余启荣，等. 正交试验优选血脂胶囊提取工艺［J］.首都师范大学学报(自然科学版)，2003，24（3）：51.
       ［6］  班  翊，刘其礼，金  悠，等. 二苯乙烯苷的稳定性研究［J］.中草药，2004，35（11）：1235.
       基金项目：江苏省南通市科技创新计划（No.A04031）
       （南通大学医学院，江苏 南通  226001）