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       【关键词】  正交实验；,,金银花；,,绿原酸；,,醇沉工艺,,
       摘要：目的优选银黄片中金银花水提液的最佳醇沉工艺。方法采用正交实验法，以绿原酸转移率和醇沉液中绿原酸的纯度为考察指标。对影响金银花醇沉工艺的因素进行了研究。结果实验设计3因素中，醇沉时乙醇浓度与两次醇沉时药液的相对密度对实验有显著影响。结论金银花水提液的最佳醇沉工艺为：药液第1次浓缩至密度1.2，醇沉浓度65%；第2次浓缩至密度1.1，醇沉浓度75%。
       关键词：正交实验；  金银花；  绿原酸；  醇沉工艺 
       Studies on Alcohol Precipitation Process of the Water Extract of Flos Lonicerae in Yinhuang Tablets
       ZHANG Jibing, ZUO Juan
       (Changzhou  Techpool  Pharma  Co. Ltd , Changzhou 213161,China; Sinopharm  Medicine  Holding  Jiangsu  Co. Ltd,  Yangzhou 225009,China)
       Abstract:ObjectiveTo optimize the conditions for the alcohol precipitation of the water extract of Flos Lonicerae in Yinhuang Tablets. MethodsConditions for the alcohol precipitation were studied by orthogonal experimental design ,with the content of chlorogenic acid in the extract and the transfer rates as the indexes.ResultsSignificant effect was observed in 3 different experimental conditions. The result showed that alcohol -percipitation concentration and the relative density had obvious effect on the content of chlorogenic acid. ConclusionThe best process of alcohol precipitation is as follows : the relative density is 1.2 for the first time,65% alcohol -percipitation concentration; the relative density is 1.1 for the second time,75% alcohol -percipitation concentration.
       Key words:Orthogonal design;  Flos Lonicerae;  Chlorogenic Acid;  Alcohol precipitation process
   
　　银黄片有金银花和黄芩组成，具有清热解毒，消炎作用。其中金银花具有清热解毒、抗菌消炎之功，绿原酸是其主要抗菌有效成分［1］，常作为银黄片的质量控制指标。为保证其成药质量和便于生产，根据所查阅的文献［2~4］，我们在研究并确定金银花水提工艺的基础上，本着科学、经济、安全生产的原则，进一步研究了其水提液的最佳醇沉工艺。
       　1  仪器与试药
       Agilent1100 LC，DAD检测器，Hypersil ODS C18柱(4.6 mm×200 mm)。绿原酸对照品（购自中国药品生物制品鉴定所），乙腈（色谱纯），水（重蒸水），95%乙醇（药用），实验用其他试剂均为分析纯，金银花药材购自亳州药材公司，经鉴定为忍冬科植物忍冬Lonicera.japonica Thunb.的干燥花蕾。
       2  实验方法及结果
       2.1  正交设计根据查阅的有关资料［5］和预试结果，拟定3个因素，每个因素各设3个水平。因素水平结果见表1。
       表1  因素水平（略）
       2.2  实验方法
       2.2.1  色谱条件流动相为乙腈∶0.4%磷酸水=10∶90，流速1 ml/min，检测波长327 nm，进样量10 μl，柱温30℃，AUFS=0.5。
       2.2.2  标准品溶液的制备根据所查阅的文献［6］，我们以乙醇做溶剂，精密称取绿原酸对照品，制成每毫升含绿原酸0.2 mg的溶液，即得。
       2.2.3  金银花水提取液的制备取适量金银花药材，不浸泡，加16倍水煎煮1 h，过滤，药渣加9倍水煎煮1h，过滤，合并两次滤液，待用。
       2.2.4  样品的制备及测定结果根据表1选取L9（34）正交表进行实验。取同样体积的上述金银花水煎液9份，按表2进行实验，得9份醇沉液。精密吸取此9份醇沉液各2 ml于10 ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀；另取上述金银花水煎液2 ml，用流动相定容至10 ml；以上样品，高速离心，按2.2.1项下色谱条件测定各样品中绿原酸的含量。从而可得出绿原酸的保留率，结果见表2。另取上述9份醇沉液各40ml于已干燥称重的蒸发皿中，100℃干燥至恒重，计算提取液的固含量。则醇沉液中绿原酸的纯度=绿原酸的量/固含量。结果见表2。
       表2  实验方法和结果（略）
　　
　　综合评分=保留率+纯度-80对表2进行统计学处理，得方差分析结果见表3。
       表3  方差分析表（略）
       由表2~3可以看出因素B和C对试验有显著性影响，因素A 在所考察的范围内影响很小，因此各因素的最佳水平组合为A2B1C1，即金银花水体液浓缩至密度为1.2，加乙醇使含醇量为65%，两次浓缩至密度为1.1，两次醇沉时含醇量为75%。
       2.3  验证实验按正交试验所得的最佳提取工艺做了3份验证实验，结果见表4。由验证实验结果可看出，此最佳醇沉工艺稳定，3份验证实验的综合评分均高于正交实验的综合评分。
       表4  验证试验结果（略）
       　3  讨论
       本试验是为了考察银黄片中金银花水煎液的最佳醇沉精制工艺，因此，醇沉液中绿原酸的纯度是一定要考察的，但其转移率也一样重要，因此我们采用二者的综合评分作为正交实验的最终指标。 实验中，前后两次相对密度的测定方法不同，第1次相对密度是在55℃下由密度计测得，一次醇沉后，由于醇沉液浓缩后，浓缩液量过少，因此采用重量体积法测量浓度，和密度计法比较发现两者结果有一定差距。在以前研究的金银花水提工艺中，发现煎煮时间越长，绿原酸的含量越低，因此，在药液浓缩过程中，考虑到绿原酸的热不稳定性，我们采用减压浓缩，以降低药液的受热温度，并与常压浓缩做了比较，结果显示，减压浓缩后绿原酸的保留率达95%，而常压浓缩仅有70%。
       　参考文献：
       ［1］  北京医学院,北京中医学院.中草药成分化学［M］.北京:人民卫生出版社,1981:241.
       ［2］  章晓骅,刘佳佳,刘丰良. 不同时期金银花的对比研究［J］.现代中药研究与实践，2003，17（3）：13.
       ［3］  冯文宇，田  吉.绿原酸提取纯化工艺对比实验研究［J］.泸州医学院学报，1999，22（6）：469.
       ［4］  何德贵,周芳勇,李仕先,等.金银花不同提取工艺及优选条件探讨［J］.中国实验方剂学杂志，2001，7（1）：6.
       ［5］  孙月霞，吴淑娥. 初膏浓度对醇沉效果的影响［J］.基层中药杂志，2000，14（5）：36.
       ［6］  陈  钢,侯世祥,胡  平，等. 金银花提取物中绿原酸的稳定性研究［J］.中国中药杂志，2003，28（3）：223.
       (常州天普制药有限公司，江苏 常州  213161;  国药控股江苏有限公司，江苏 扬州  225009)