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       【关键词】  白芍；,,芍药苷；,,高效液相色谱法；,,提取方法
       摘要：目的建立白芍中芍药苷的最佳醇提工艺。方法以芍药苷为考察指标，用高效液相色谱法进行含量测定，并用正交试验法优化提取条件。结果用80%乙醇回流提取芍药苷两次，第1次用8倍量乙醇，第2次用6倍量乙醇，1 h/次。结论乙醇浓度和提取时间对白芍中芍药苷的提取率有较大影响。
       关键词：白芍；  芍药苷；  高效液相色谱法；  提取方法
       Optimization of Ethanol Extration Process for Paeoniflorin in Paeonia lactiflora Pall. by Orthogonal Design
       HOU Jiqiu, YIN Shouyu, LIU Mingzhu*
       (College of Pharmacy, Yanbian University, Yanji 133000,China; College of Basic Medical Sciences, Yanbian University, Yanji 133000, China )
       Abstract:ObjectiveTo establish an optimal extract method of paeoniflorin from Radix Paeoniae Alba with ethanol. MethodsThe content of paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba was determined by HPLC, and the orthogonal test was carried out to optimize the extracting conditions. ResultsThe paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba was reflux extracted with 80% ethanol twice, 1h per time, 8 and 6 times in volume vs weights of the Radix Paeoniae Alba, respectively. ConclusionThe concentration of ethanol and lasting time of extraction have a great influence upon the extracting efficiency of paeoniflorin.
       Key words:Radix Paeoniae Alba;  Paeoniflorin;  HPLC;  Extraction
   
　　白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。性微寒，味苦、酸，归肝、脾二经。白芍具有养血调经、柔肝止痛、平肝抑阳之功效［1］。现代药理学研究表明，白芍具有扩张冠状动脉，增加冠脉流量，对抗急性心肌缺血，抑制血小板凝集及降血压、活血化淤［2］等药理作用。芍药苷是白芍的有效成分，具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病等功效。本文以芍药苷含量为考察指标，用正交试验优化了白芍的醇提工艺。
       　1  器材
       1.1  仪器与设备LC-10Avp型高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津）；超声波清洗器（奥特塞斯超声波仪器厂）；FA2004电子天平。
       1.2  试剂与药材芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110736-200628）；白芍药材（延吉成大药材公司）；甲醇、乙腈（色谱纯），其他试剂为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  正交实验设计根据预试验，确定主要考察乙醇浓度、乙醇用量、回流时间3个因素，每个因素设3个水平。选用L9（34）表安排正交实验。结果见表1。
       表1  因素水平（略）
       2.2  提取方法
       2.2.1  浸泡时间选择取白芍饮片9 g，加入8倍量乙醇约72 ml浸泡，每隔1 h称量药渣重量，至重量不变化为止，结果表明药材浸泡2 h，水份吸收完全，吸水率为18.6%。
       2.2.2  提取工艺取白芍饮片9份，每份27 g，浸泡2 h，按正交试验表进行实验，见表2，合并两次提取液，脱脂棉滤过。
       表2  正交实验表（略）
       2.3  芍药苷的测定方法
       2.3.1  色谱条件与系统适应性实验［3］色谱柱Diamonsi C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)柱 ；检测波长230 nm；流动相为乙腈-0.1%冰醋酸（14∶86）；流速1.0 ml/min；进样量10 μl；柱温25℃。
       2.3.2  对照品溶液的配制精密称取芍药苷对照品0.6 mg，置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度（0.06 mg/ml），摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
       2.3.3  供试品溶液的配制 分别将9份提取液浓缩定容至100 ml，精密吸取0.5 ml定容至50 ml，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液即得。
       2.3.4  线性范围考察精密吸取芍药苷对照品溶液2，4，6，8，10 ，12，14 ，16，18，20 μl，依次进样，以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=37 575X-76 785， r =0.999 3，表明芍药苷在0.12～1.2 μg范围内进样量与峰面积呈良好线性关系。
       2.3.5  精密度实验精密吸取同一对照品溶液，重复进样5次，测得其峰面积的RSD为1.39%。
       2.3.6  含量测定取对照品溶液与供试品溶液在上述色谱条件下进样，测定。结果见表2。
       2.4  正交试验结果分析实验安排和结果见表2，方差分析见表3。根据直观观察和表3方差分析显示，A因素对芍药苷提取有显著性影响，各因素作用主次为ACB， A因素中以K2最大， C因素中以K3最大，B因素中K1K2≈K3,K1与K2（或K3）无显著性差异，考虑到实际生产，B3成本低于B1，故选择最佳工艺为A2B3C3，即用80%乙醇加热回流2次，第1次用8倍量乙醇，第2次用6倍量乙醇，1 h/次。
       表3  方差分析（略）
       2.5  验证实验按照最佳提取工艺提取药材4次，按上述方法测定，结果芍药苷平均含量为1.738 5%（RSD=0.42%，n=4），说明该工艺稳定、可靠，达到提取条件优化的目的。
       3  讨论
       3.1  本文通过正交试验优选出能够获得较高芍药苷提取率的方法，提高了药材的利用程度，它将有助于提高含白芍药物制剂的有效成分含量，对提高药物的疗效具有一定的意义。
       3.2  考虑到第一次提取时药材对溶剂会有吸附，所以设计提取方案时第1次的溶剂用量比第2次多。
       3.3  经验证试验认为优选的提取方案能够提高芍药苷的提取率，同时这种方案也比较稳定，是一种比较好的提取方式。
       3.4  芍药苷对热不稳定，易水解，在回流提取时温度不宜过高。
       3.5  芍药苷标准品极易吸潮，使用前应置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上后使用。
       　参考文献：
       ［1］  刘  谨,倪嘉纳.不同产地白芍的质量分析［J］.时珍国医国药，2004，15（4）：207.
       ［2］  刘鹰翔,马玉卓.白芍化学成分与药理研究进展［J］.中草药，1995，26（8）：437.
       ［3］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部 ［S］.北京：化学工业出版社，2005：68.
       (延边大学药学院，吉林 延吉  133000； 延边大学基础医学院，吉林 延吉  133000)