文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的建立牛至挥发油的指纹图谱分析方法。方法采用气相色谱法，以DB-5石英毛细管柱为色谱柱，以高纯氮为载气，以二阶程序升温法，记录时间为80min，以氢火焰检测器检测，并以GC-MS对各共有峰进行了归属。结果用程序升温法得到了各色谱峰较好的分离，确定了22个共有峰。结论为更好地控制牛至药材的内在质量提供了可靠的方法。
       【关键词】  牛至挥发油； 指纹图谱； 气相色谱
       基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.30370148）
       GC Fingerprint of the Essential Oil from Origanum vulgare L.
       FANG Ying, SUN Lijuan, LIU Hongbing, XU Hanlin, LIU Yanwen*
       (Department of  Pharmacy ,Hubei College of Traditional Chinese Medicine ,Wuhan 430061, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a fingerprint analysis of Origanum vulgare L..MethodsThe fingerprint was performed by GC. DB-5 column was used. Carrier was N2. Flow rate of carrier was 1.5 ml·min-1. Recording time was 80 min. Detector was FID.ResultsGC fingerprint of  Origanum vulgare L. was obtained， and 22 common peaks were obtained.ConclusionA reliable method was provided for controlling the quality of Origanum vulgare L..
       Key words：Origanum vulgare L.;  Fingerprint;  GC
       
       牛至Origanum vulgare L.系唇形科牛至属植物，具有清热解毒、利水消肿之功效，主治中暑、感冒、头痛、身痛、急性肠炎及腹痛吐泻等症［1］。现代药理研究表明，牛至挥发油为其抗菌作用的主要有效部位［2］，由于受产地、气候和生态环境等因素的影响，不同产地的药材提取物的成分差异较大，仅对其中某一个或多个成分进行定性、定量分析，并不能有效控制其质量。本实验根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》［3］，对其进行了气相指纹图谱的研究，对综合评价和控制牛至药材及其挥发油的质量有着重要的意义。
       1  仪器与材料
          
       SHIMADZU GC-14C气相色谱仪（SPL-14C进样器，FID检测器，WA-2A型无油气体压缩机），CLASS-GC10色谱工作站，高纯N2(99.999%)，高纯H2(99.999%); BP-211D型十万分之一分析天平（德国Satorius）。
       
       实验所用的18批牛至药材均于200407采自全国9个不同省区18个不同地区，经湖北中医学院鉴定教研室吴和珍博士鉴定为唇形科牛至属植物牛至Origanum vulgare L.，其来源见表1。乙醚为分析纯（中国医药集团上海化学试剂公司）。
       2  方法与结果
       2.1  供试品溶液的制备称取300 g牛至药材，置圆底烧瓶中进行水蒸气蒸馏提取，分别精密称取18批牛至挥发油各0.1 g，用乙醚定容至10 ml，作为供试品溶液。
       2.2  色谱条件载气为氮气（N2），DB-5石英毛细管柱（30 m×0.25 mm），供试品溶液进样量1 μl，分流比20∶1，流速1.5 ml/min，柱前压50 kPa，其温度设置如下：
       
       进样口温度260℃，检测器温度280℃，柱起始温度65℃，程序升温:65℃(2 min)1℃/min        85℃(2 min) 3℃/min        230℃(10 min)。
       
       质谱条件：电离方式EI，电离能量70 ev，倍增电压200 V，扫描范围40～500 amu, 扫描间隔0.4 s。
       表1  样品来源（略）
       2.3  测定方法分别精密吸取供试品溶液 1 μl ,注入气相色谱仪，按上述色谱条件操作，考察了120 min内供试品溶液的色谱分离情况，记录80 min色谱图。以麝香草酚为参照峰，设定参照峰的保留时间和峰面积为1，计算各指纹峰的相对保留时间和峰面积比值。
       2.4  方法学考察为了考察分析方法的可靠性，以2号样品为测定对象，对仪器的精密度、方法的重现性以及样品的稳定性等方面进行了考察。
       2.4.1  精密度实验取同一供试品溶液，连续进样5次。结果表明，其共有峰相对保留时间的RSD小于3％，峰面积占总峰面积10％以上的共有峰，其相对峰面积的差值均在±25％以内，符合指纹图谱的技术要求。表明仪器的精密度良好。
       2.4.2  重现性实验取2号样品5份，分别按照供试品溶液制备方法制成供试品溶液，分别进行测定。结果表明：其共有峰相对保留时间的RSD小于3％，峰面积占总峰面积10％以上的共有峰，其相对峰面积的差值均在±25％以内，符合指纹图谱的技术要求。表明方法的重现性良好。
       2.4.3  稳定性实验实验方法同精密度实验。结果表明，供试品溶液在10 h内基本稳定。
       2.5  指纹图谱及技术参数
       2.5.1  GC指纹图谱的测定分别精密吸取供试品溶液1 μl，注入气相色谱仪，按上述色谱条件操作，考察120 min内供试品溶液的色谱分离情况，记录80 min色谱图。其结果见图1，不同批次样品的图谱见图2 。
       图1  2号样品的指纹图谱（略）
       2.5.2  共有指纹峰的标定根据以上牛至供试品的检测结果，比较其色谱图。以相对保留时间标定其共有峰，分别以S峰为参照峰，计算结果表明，RSD＜3.0%。结果见表2。
       2.5.3  共有指纹峰面积的比值根据以上牛至供试品的色谱图测定结果，设定参照峰S的面积为1，计算各共有峰相对峰面积及其平均值。结果见表3。
       2.5.4  非共有峰面积比值计算各样品中非共有峰占总峰面积的比值，结果表明：供试品中除贵阳毕节的样品外，其比值均小于5％。结果见表4。
       图2  不同批次样品的指纹图谱（略）
       2.5.5  共有峰的归属分别将SDE供试品进GC-MS分离，用测定方法中的色谱质谱条件进行测定，通过NIST质谱库检索。各共有峰归属见表5。
       表2  共有峰的相对保留时间（略）
       *表示该样品对应色谱峰面积太小，无法积分
       2.5.6  n强峰的标定根据指纹图谱技术要求，其n强峰的总面积之和应占整个峰面积的70％以上，且峰数占总峰数的1/5～1/3，比较各样品色谱图，可以看出其共有峰中的第6,8,12，13，S，14，15号峰面积之和占总峰面积的80%以上，且第6，S，14号为主要有效成分，故标定第6，8，12，13，S，14，15号峰为该指纹图谱的7强峰。
       3  讨论
          
       本项研究根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》，采用气相色谱测定法建立了牛至有效部位的指纹图谱，取得了较满意的结果，为牛至药材质量评价提供了科学依据。
       表3  共有峰的相对峰面积（略）
       表4  样品的非共有峰面积比值（略）
       表5  样品的各共有峰GC-MS归属（略）
       本实验分别对4种不同极性的毛细管柱作比较，即J&W Scientific DB－1石英毛细管柱（30 m×0.53 mm，1.5 μm）、J&W Scientific DB -5(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，J&W Scientific DB－17（30 m×0.25 mm，0.25 μm）和J&W Scientific DB－WAX石英毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），结果表明用DB -5石英毛细管柱分离效果明显优于其它毛细管柱；在温度的选择上，曾采用多阶升温，但峰形未见有得到明显改善，基于方法的简便易行，易于重复的原则，故分别采用以上二阶程序升温法。
       
       色谱指纹图谱的分析比较与鉴别，应建立在足够样品观察的基础上，比较18个不同产地的牛至挥发油的GC图谱，可以看出其GC图谱较相似，其重叠率除了贵阳毕节的样品外，其余均大于80％，且异构体较明显，如峰第12和13、第S和14等；为了便于比较，可将图谱分为两个区，在特征区Ⅰ的各牛至样品图谱很相似，其差别主要在于峰的丰度，主要共有峰都集中在该区，且主要抗菌成分也都集中于此区，因此该区对牛至挥发油的鉴定起很重要的作用；在特征区Ⅱ，峰较多但含量均较低，部分峰甚至小到无法积分，可认为是些高沸点的物质，峰的丰度均较小，因此在标定共有峰时，将此区几个峰面积相对较大的峰也统计在内。
        
       【参考文献】
         　　［1］ Delectis Florae Reipublicae Popularis Sinicae, Agendae Academiae Sinicae Eidita. Flora Reipublicae Popularis（中国植物志）［M］. Tomus bo, Beijing:Science Press, 1997:246.
       
       ［2］ Jansen A.M, Scheffer JJ and Baarheim-Svemdsen. Antimicrobial Activity of Essential Oils:A 1976-1986 Literature Review: Aspects of Test Methods［J］. Planta Medica，1987，53（5）:395.
       
       ［3］ 国家食品药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）［S］.1999.