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       【摘要】 
       目的为充分利用百色马齿苋植物资源，避免资源的浪费，探讨百色马齿苋总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从百色马齿苋中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.094 mg/ml，回收率为101%，其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取马齿苋黄酮类物质的有效途径。
       【关键词】  超声波提取； 马齿苋； 总黄酮； 鉴别
       The Extraction and Identification of the Total Flavanone of  Baise"s Purslane by Ultrasonic Wave
       ZHAO Jin，LIU Jiao，LUO Jianhua，MENG Chunyue，ZHANG Lidan，HUANG Suoyi
       （ Youjiang Medical College for Nationalities，Baise Guangxi 533000，China）
       Abstract：ObjectiveTo make use of the resources of Baise"s Purslane ,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of Baise"s Purslane.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol from Baise"s purslane with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of Purslane. ResultsThe density of the total flavanone of purslane was C=0.094 mg/ml and the rate of  recovery was 101%. ConclusionThis text provides the extraction and purification methods to get the outcome and the purities of the flavanone are all very high .This method is purely physical process and have not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Purslane.
       Key words：Ultrasonic wave treatment;   Purslane;   Total flavanone;   Identification
       
       马齿苋（Purslane）又名马齿菜、蚂蚁菜、长寿菜、五行草等，属马齿苋科一年生肉质草本植物。它是我国传统中药，始载于《本草经集注》。据《本草纲目》记载，临床可用于“散血消肿，利肠滑胎，解毒通淋，治产后虚汗” ［1］。其性酸、寒，全草可作为药用，无毒、无副作用，具有清热解毒、散血消肿、杀虫杀菌、利水去湿、消炎利尿的功能［2］。全草含甲基肾上腺素、香豆精、黄酮、强心苷等，有抗菌止血等作用［2］。体外实验表明，马齿苋的有效成分具有广谱抗菌作用，特别是对各型痢疾杆菌有抑制和杀菌作用，对百日咳、伤寒、肺结核也有较好的治疗效果，对某些致病真菌也有不同程度的抑制作用，有“天然抗生素”之称［2］。它还有增强免疫、降血脂、抗动脉粥样硬化、降血糖、抗肿瘤、抗氧化、防衰老等作用［1］。马齿苋的成分有酸类、挥发油、花色苷类、黄酮类物质，此外还有生物碱、蛋白质、氨基酸、多糖，以及强心苷、蒽醌苷和多巴胺等活性物质。黄酮类有槲皮素、山柰酚、杨梅素、芹菜素、木犀草素［1］。
       
       有文献报道马齿苋总黄酮的提取方法采用微波提取［3］，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［4，5］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［5］。但超声技术应用于提取百色马齿苋中黄酮类物质的研究尚未见报道，本实验报道用超声波提取百色马齿苋总黄酮及鉴别。
       1  仪器与试剂
       1.1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40 KHz，昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
       1.2  试剂95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；乙酸镁AR；镁粉AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜马齿苋采自广西百色市郊区菜地旁边。
       2  方法与结果
       2.1  总黄酮成分提取 取新鲜百色马齿苋，烘干，粉碎。称取百色马齿苋粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
       2.2  测定方法依据以芦丁为对照品测定百色马齿苋中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       2.3  定量实验-总黄酮的含量测定
       2.3.1  波长的选择 取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度。结果见表1。
       表1  紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度（略）
       根据表1得回归方程：A=-0.03 110×13.52C，r=0.999 9。
       2.3.3  提取物含量的测定  精密吸取样品液1.00 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.096，根据回归方程：A= -0.031 10×13.52C，计算样品中总黄酮的含量C=0.094 mg/ml。
       2.3.4  回收实验精密量取样品液2.00 ml，加入标准芦丁对照品2.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为101% 。
       2.4  定性实验-总黄酮的鉴别
       2.4.1  颜色反应
       
       紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
       
       浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
       
       三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
       
       乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
       
       盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
       2.4.2  纸层析 取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
       3  讨论
       
       实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为101%，本实验所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
       
       黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［6］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
       
       黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［7～12］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。百色马齿苋分布广泛，本文实验结果表明，马齿苋中含有较为丰富的黄酮。因此，百色马齿苋具有广泛开发和利用价值，值得加强资源开发，综合利用。
       【参考文献】
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