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       【摘要】 
       目的测定滇黄芩不同炮制品中黄芩苷的含量。方法采用高效液相色谱法，色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇0.2％磷酸（45∶55）为流动相，柱温为25℃，流速为1 ml·min-1，紫外检测波长为280 nm。结果滇黄芩不同炮制品中黄芩苷的含量差异很大，含量依次为生药5.98%，生片4.96%，酒片4.03%。结论该法简便易行，灵敏度高，重现性好，可用于滇黄芩药材及其制剂的质量控制。
       【关键词】  滇黄芩； 黄芩苷； 高效液相色谱法
       Determination of Baicalin in Different Prepared Medical Materials of Scutellaria amoena C.H. Wright by HPLC
       SU Jian
       （Yunnan Institute for Food and Drug Control, Kunming 650011, China）
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of baicalin in the different prepared medical materials of Scutellaria amoena C.H. Wright. MethodsThe contents were determined by HPLC with the use of C18  column, and a mobile phase of methanol0.2% phosphoric acid (45∶55).The flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was 280 nm.ResultsThe difference of baicalin contents in the different prepared medical materials of Scutellaria amoena C.H. Wright was obvious. The contents were in the decreasing order of raw Scutellaria (5.98%) ＞ dried Scutellaria (4.96%) ＞ prepared Scutellaria (4.03%). ConclusionThe method is simple, sensitive and repeatable. It is suitable for the quality control of scutellaria and its preparations.
       Key words：Scutellaria amoena C.H.Wright;  Baicalin;  HPLC
       
       滇黄芩为唇形科黄芩属植物西南黄芩Scutellaria amoena C.H.Wright的干燥根，是西南地区药用黄芩的主流品种，现收载于《云南省药品标准》［1］。滇黄芩的化学成分以黄酮衍生物为主，主要有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、滇黄芩苷等，其中黄芩苷为主要有效成分之一，具有抗脂质过氧化活性、抗血小板聚集活性、抗肿瘤活性。由于该类成分结构相似，给分离带来较大困难。本文报道采用高效液相色谱法对滇黄芩的不同炮制品中黄芩苷的含量测定，以期为滇黄芩药材及其制剂的质量控制提供方法。
       1  仪器与材料
       
       Agilent 1100型高液相色谱仪（美国惠普公司）。Shimadzu Libror AEG-45SM型百万分之一分析天平（日本岛津公司）。上海Branson B3200S超声清洗器。Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm，美国惠普公司）。黄芩苷（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号715-200111）。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。滇黄芩生药、生片、酒片药材样品均购自昆明天紫红饮片厂，并经鉴定为唇形科植物西南黄芩Scutellaria amoena C.H.Wright的干燥根。
       2  方法与结果
       2.1  测定条件
       2.1.1  色谱条件色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇0.2%磷酸溶液（45∶55）；柱温：25℃；流速1 ml·min-1；检测波长280 nm;进样量：对照品溶液和供试品溶液各5 ml；理论塔板数以黄芩苷峰计算应不低于5000。对照品及样品色谱图见图1。
       2.1.2  检测波长的选择黄芩苷对照品用流动相制备的溶液，在200～500 nm的波长范围内进行扫描，在280 nm波长处有最大吸收，故选择280 nm波长进行含量测定。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的黄芩苷对照品2.92 mg，置25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.116 8 mg/ml的对照品溶液。
       2.3  供试品溶液的制备
       2.3.1  提取溶剂的选择 精密称取3份生药粉末约0.15 g，置具塞三角瓶中，分别精密加入甲醇、水以及70%乙醇100 ml，超声提取20 min，补足减失重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。精密吸取上述溶液各5 μl，按上述方法进行测定。结果表明，甲醇对黄芩苷的提取率最高，提取所得色谱峰数目最多。
       a对照品    b生药    c生片    d酒片
       图1  对照品和样品的HPLC色谱图（略）
       2.3.2  提取方法的选择精密称取4份生药粉末约0.15 g，精密加入甲醇100 ml，分别采用超声提取、回流提取、索氏提取和冷浸4种提取方式，按上述方法进行测定。结果表明，超声提取黄芩苷的提取率最高且操作简单。
       2.3.3  提取时间的选择以甲醇为溶剂，分别超声提取10，20，30，40 min,以及超声处理20 min并静置12 h。结果表明，超声处理20 min并静置12 h与超声处理40 min黄芩苷即可提取完全。故采用超声处理20 min并静置12 h的方法。
       2.4  线性关系的考察精密量取对照品溶液2，4，6，8，10 μl，按上述色谱条件测定，以进样量（μl）为横坐标（X）,对照品峰面积积分值为纵坐标（Y）进行线性回归，回归方程为：Y=461.13X+35.079, r=0.999 9 (n=5)，黄芩苷在0.233 6～1.168 0 μg内线性关系良好。
       2.5  精密度实验精密吸取对照品溶液5 μl，按上述色谱条件，连续进样9次，测得峰面积积分值的平均值为2313.76，RSD为0.53%（n=9）。
       2.6  稳定性实验精密吸取滇黄芩生药供试品溶液5 μl，按上述色谱条件测定8次，间隔4 h/次，测得峰面积积分值并计算含量，黄芩苷的含量平均值为5.93%，RSD为0.12%（n=8）。结果表明，黄芩苷含量在28 h内稳定。
       2.7  重现性实验取同一批生药粉末8份如法制备供试品溶液，按上述色谱条件外标法测定黄芩苷的含量，黄芩苷含量的RSD为2.19%（n=8）。结果表明，该法重现性良好。
       2.8  加样回收率实验取已知含量的生药粉末9份，每份0.1 g，精密称定，分别加入黄芩苷对照品适量，按供试品溶液的制备和样品测定项下操作，平均回收率为99.13%，RSD为1.13%（n=9）。结果见表1。
       表1  加样回收率测定结果（略）
       2.9  样品测定精密称取滇黄芩生药、生片、酒片粉末各约0.15 g，置具塞三角瓶中，分别精密加入甲醇100 ml，超声处理20 min并静置12 h，加甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，按上述色谱条件进行测定，采用外标法定量。结果见表2。
       表2  滇黄芩中黄芩苷的含量测定结果（略）
       3  讨论
       
       本文考察了滇黄芩生药和两种炮制品的黄芩苷含量，目前黄芩的炮制品主要为生片和酒片及炒炭3种［2］，另外还有焦黄芩、姜黄芩、蜜黄芩等。黄芩苷在黄芩酶的作用下会被酶解成黄芩素和葡萄糖醛酸，黄芩素不溶于水又不稳定，易沉淀在黄芩表面在空气中被氧化而成绿色醌类衍生物，所以传统炮制黄芩时常在切制饮片时见有泛绿现象，原因就在于此。据报道［3］，黄芩酶是一种活性物质，必须在一定温度和湿度条件下才能被杀灭，黄芩苷才能得以保存。有人研究证明［4］，用沸水煮10 min的软化切制工艺可以既破坏酶又保存其药效成分，保证了黄芩饮片的质量。
       
       测定结果表明，滇黄芩的不同炮制品中黄芩苷的含量相差很大，生片中的含量为生药中的80％左右，而酒片仅存67％，这可能与炮制过程中黄芩苷被酶解有关。
       
       传统上认为炮制方法不同则产生药效的差异，应根据证候的不同而采用不同的炮制品入药，目前滇黄芩中黄芩苷含量与不同炮制品药效的相关性并未得到证实。因此，黄芩苷含量是否与滇黄芩炮制品的药效均呈正相关以及滇黄芩经炮制后指标成分是否会改变，有待进一步的化学和药理研究来证明。
       【参考文献】
         　　［1］ 云南省卫生厅.云南省药品标准［S］.云南大学出版社，1996：93.
       
       ［2］ 陈宝森,章文相.黄芩炮制方法探讨［J］.基层中药杂志,2001,15(5):35.
       
       ［3］ 张文婷.加工炮制过程对黄芩及其制剂中黄芩苷含量的影响［J］.中药新药与临床药理,2000,11(3):178.
       
       ［4］ 中医研究院中药研究所.中药黄芩炮制质量的研究［J］.新医学杂志,1973,2:31.