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       【摘要】 
       目的采用高效液相色谱法测定妇乐泡腾颗粒剂中丹皮酚的含量。方法选用C18柱，流动相为水乙腈冰乙酸(52∶46∶2 )，检测波长274 nm。结果该品每袋含牡丹皮以丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于28 mg。结论此方法可以用于妇乐泡腾颗粒剂中丹皮酚的含量控制。
       【关键词】  高效液相色谱； 妇乐泡腾颗粒剂； 丹皮酚
       妇乐泡腾颗粒剂由忍冬藤、大血藤、甘草、大青叶、蒲公英、牡丹皮、赤芍、川楝子、延胡索、大黄等10味经提取精制而成，具有清热凉血，消肿止痛的功效。用于盆腔炎、附件炎、子宫内膜炎等引起的带下腹痛。牡丹皮为方中臣药，具有清热凉血，活血化淤消肿止痛的功效。用于湿毒发斑，痈肿疮毒。其中所含丹皮酚具有抗菌、抗炎、镇痛、退热功效，是牡丹皮中主要有效成分，故选择本品中所含丹皮酚（C9H10O3）为研究含量测定的指标成分。2000年版《中国药典》一部采用紫外分光光度法测定牡丹皮中丹皮酚的含量［1］，为提高质量标准，改用HPLC法测定妇乐泡腾颗粒中丹皮酚的含量。
       1  仪器与试药
       
       高效液相色谱仪(依利特P260II型大连)；紫外检测器（依利特色谱工作站）；分光光度计(BECKMAN DU600美国);红外光度计（2000型 美国 PERKIN ELMEN公司）；精密分析天平（0.000 01 g METTLER AE 240 瑞典）;三用紫外分析仪(UV-1型上海顾村电光仪器厂);薄层辅板器(重庆南岸新力实验仪器厂);微量注射器(10u上海医用激光仪器厂)。
       
       丹皮酚对照品（编号：07089704供含量测定用纯度为99.94%）；妇乐泡腾颗粒（批号030716，030725，030806）及本品缺牡丹皮阴性对照品（批号030815B）均自制；各阴性对照品均按处方除去被检药材，按处方10%量，称取其余各单味药材，照本品制剂工艺操作，自制而成。甲醇、醋酸乙酯均为色谱纯；重蒸馏水，其余试药均为AR级，试液均照《中国药典》（2005年版，Ⅰ部附录XVB）各有关项下方法配制。
       2  方法与结果
       2.1   吸收波长的选择 取丹皮酚对照品适量，精密称定，用流动相稀释到4.528 μg/ml，并以流动相为空白，测定紫外光谱，测定波长选定为（274±1）nm。结果见图1。
       2.2  色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂:Hyper ODS2 C18 ；色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）: 大连依利特；流动相为水乙腈冰乙酸(52∶46∶2 )；流速1.0 ml／min；检测波长274 nm;理论塔板数按丹皮酚峰计应不低于3000。分离度应大于1.5;拖尾因子：1～1.1；进样量：10 μl。
       2.3  对照品溶液的制备精密称取丹皮酚对照品（真空减压干燥至恒重）7.05 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得，每毫升对照品溶液含丹皮酚28.2 mg。
       2.4  供试品溶液的制备取样品18 g，研细，取样品约0.4 g，精密称定，加水20 ml使溶解，用石油醚（60～90℃）分5次（20，20，20，15，10 ml）提取，合并石油醚提取液，加无水硫酸钠1 g脱水，低温（70℃）挥干溶剂，残渣用甲醇溶解，并转移至50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，即得。
       图1  丹皮酚紫外吸收光谱图（略）
       2.5  阴性对照品溶液的制备照样品处方工艺制成不含牡丹皮的阴性供试品溶液，取样品18 g，照2．4项供试品溶液的制备方法操作，即得。
       2.6  测定法 分别精密吸取对照品、供试品溶液和阴性对照品溶液各10 ml，照上述色谱条件注入液相色谱仪，测定，即得。试验结果表明，色谱条件与系统适用性参数符合要求，供试品溶液的色谱峰中，在与对照品溶液的色谱峰的相同保留时间处有相同的色谱峰；阴性对照品溶液的色谱峰中，在与对照品溶液的色谱峰的相同保留时间处无干扰色谱峰。结果见图2～4。
       图2  丹皮酚对照品的高效液相色谱图（略）
       2.7  线性关系考察 分别精密量取对照品溶液2.0，2.5，5.0，7.0，10.0，13.0及15.0 ml照上述条件和方法操作，测定，记录峰面积，以峰面积值(A)对进样量（W）进行线性回归，得回归方程为W＝2.002A+1.155，r＝0.999 2。结果表明，丹皮酚在0.056 4～0.423 mg内与峰面积呈良好的线性关系，符合外标法定量测定要求。结果见图5～6。
       2.7.1  样品溶液提取量和提取次数的实验取样品18 g，研细，分别取样品6份，每份约0.4 g，精密称定，各加水20 ml使溶解，按序号（1～5号），每份样品分别用石油醚（60～90℃）振摇提取，提取次数分别为1，2，3，4，5及6次，每次石油醚的用量分别为20，20，20，15，10及10 ml，合并每份样品的石油醚提取液，加无水硫酸钠1 g脱水，低温（70℃）挥干溶剂，残渣用甲醇溶解，并转移置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照上述色谱条件和方法操作,测定。实验结果表明采用本法提取5次，石油醚的用量分别为20，20，20，15及10 ml，即可将试样中99%的丹皮酚提取完全。结果见表1。
       图3  妇乐泡腾颗粒的高效液相色谱图（略）
       图4  本品缺丹皮酚阴性对照品的高效液相色谱图（略）
       图5  不同浓度丹皮酚的线性相关高效液相色谱图（略）
       图6  丹皮酚的线性相关图（略）
       表1  样品溶液提取量和提取次数的实验结果（略）
       2.8  稳定性实验取供试品(批号030716)溶液在室温下放置，每隔2 h测定1次，12 h内共测7次，峰面积积分值分别是289.41，286.03，285.34，289.49，287.34，289.02，288.53。根据所得峰面积值计算，RSD=0.54%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定。
       2.9  精密度实验取供试品(批号030716)溶液，连续进样测定5次，丹皮酚峰面积积分值分别是：289.41，286.03，285.34，287.34，288.53，测得RSD＝0.526％。
       2.10  重现性实验取供试品(批号030716)5份，分别照含量测定方法制成供试品溶液，进样测定，测得丹皮酚含量（mg/袋）分别为28.84，29.36，30.21，28.79，31.02，均值=29.61；RSD＝2.82％。
       2.11  回收率实验取本品10 g研细，取样6份分别为0.2 g的0.4～1.2倍，精密称定,每份分别精密加入适量的丹皮酚对照品溶液（48.2 μg/ml）1～6 ml，照上述方法操作，测定，计算加样回收率，结果表明本法的加样回收率平均为98.59%，RSD=1.2%（n=6）。结果见表2。
       表2  丹皮酚加样回收率实验结果（略）
       2.12  妇乐泡腾颗粒中丹皮酚含量测定 取样品18 g，研细，取约0.15 g，精密称定，照上述条件和方法操作，测定。结果见表3。
       表3  丹皮酚含量测定结果（略）
       根据3批样品测定结果，可暂规定本品每袋含牡丹皮以丹皮酚（C9H10O3）计，不得少于28 mg。
       3  讨论
       
       文献报道赤芍中含有丹皮酚，为此测定不同产地赤芍药材中丹皮酚的含量，结果见表4。
       表4  不同产地赤芍中丹皮酚的含量测定结果（略）
       实验结果表明，赤芍中丹皮酚的含量在0.003024%～0.01125%范围，与《中国药典》（2000年版）规定牡丹皮中含丹皮酚不得低于1.2%相比，赤芍中丹皮酚的含量很低，如果再考虑到本制剂工艺的特点，则可以忽略。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部 ［S］.北京：化学工业出版社，2000：545.