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       【摘要】 
       目的研究大蓟提取液对癌细胞生长的抑制作用。方法细胞形态观察和活细胞计数法研究大蓟提取液对人白血病细胞K562，肝癌细胞HepG2，宫颈癌细胞Hela，胃癌细胞BGC823生长的抑制作用。结果大蓟提取液可使4种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、碎裂等变化，生长受到明显抑制，抑制率最高可达92.34%。结论大蓟有确切的抑癌作用，并与中医的气血理论、药物归经理论和肝肾同源理论相一致，在体外细胞水平上也有良好体现，对实验室手段研究中医药同样有着重要指导意义。
       【关键词】  大蓟 癌细胞 生长 抑制作用
       Study on the Inhibitory Effects of the Extract from Cirsium japonicum Fisch.DC on the Growth of Four Kinds of Human Carcinoma Cells
       LI Yu,  WANG Zhenfei，LI Yao，DAI Baozhen，JIA Ruizhen， YANG Lijun，HUANG Xianghua
       Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology, Ministry of Education, Inner Mongolia University, Huhhot 010021, China
       Abstract:ObjectiveTo investigate the inhibitory effects of the extract from Cirsium japonicum Fisch.DC the on growth of human carcinoma cells. MethodsMorphological change observation and live cell accounting were used to investigate the inhibitory effects of Cirsium japonicum Fisch.DC on human chronic myloid leukemia K562 cell, hepatoma HepG2 cell, cervical carcinoma Hela cell and gastric carcinoma BGC823 cell. ResultsGrowth of the four kinds of cells was significantly inhibited by the extract from Cirsium japonicum Fisch.DC，the highest inhibitory rate was 92.34% and cell morphological changes included shrinkage, roundness, floating and crumbling. ConclusionCirsium japonicum Fisch.DC has reliable carcinoma-inhibiting effects and the effects conform to the qi and blood theory, the Meridian-reaching theory and the liver-kidney homology theory of traditional Chinese medicine, which shows once again the abundance of basic theories of traditional Chinese medicine which can also be exhibited in vitro and at cell level and have important guidance meaning to Chinese traditional medicine research by laboratory methods.
       Key words:Cirsium japonicum Fisch.DC;  Carcinoma cell;  Growth;  Inhibitory effects
       科研与临床紧密结合，是提高科研成效、缩短科研周期、快捷为临床提供理论依据的有效途径。笔者从经中医中药治疗取得显著疗效的癌症病例的处方中筛选抗癌中药，发现大蓟提取液有良好的作用。现将研究情况报告如下。
       1  器材
       1.1  药材
       大蓟生药购于内蒙古中蒙医院药房。取生药适量，六蒸水洗3遍，烘干，称量；用适量无水乙醇浸湿，充分烘干；六蒸水浸泡过夜，武火煮沸，文火煎煮20 min，纱布过滤，滤渣加适量六蒸水置110℃高压蒸气锅内20 min，纱布过滤；合并两次滤液，2℃冰箱中静置72 h，高、中、低速滤纸，0.45 μm，0.22 μm微孔滤膜逐级过滤；滤液蒸发浓缩、灭菌、4℃保存，使用时以培养液稀释至所需质量分数（以生药计算）。
       1.2  器材与试剂
       倒置相差显微镜（Nikon eclipseTE2000-U），超净台（苏州净化设备有限公司），CO2培养箱（GALAXY & BINDER），24孔培养板（BIOFIL），RPMI1640、高糖DMEM（GIBCO），胎牛血清（TBD）。
       1.3  癌细胞系
       人白血病细胞系K562，肝癌细胞系HepG2，胃癌细胞系BGC823，宫颈癌细胞系Hela（均由本实验室传代保种），均常规传代培养。
       2  方法
       2.1  分组每种细胞均设对照组（不加药）与观察组（加药），观察组分设高（12 mg/ml）中（6 mg/ml）、低（2 mg/ml）3个剂量组。
       2.2  加药处理取对数生长期的4种癌细胞，均以2×104/孔接种于24孔培养板，接种24 h后加药。加药后：①每天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；②每隔24 h各组均取5孔细胞台朌蓝拒染法计活细胞数，每孔计3次，5孔取平均值，计算出当天的生长抑制率，抑制率（%）=［（对照组平均活细胞数-观察组平均活细胞数）/对照组平均活细胞数］×100%［1］，连续6 d。
       2.3  抑制效果的判断与分析①细胞形态的观察与分析；②平均抑制率：6 d的抑制率相加取平均值；③最高抑制率：每种细胞各剂量组取其6 d中最高的1 d。抑制率的比较采用χ2检验。
       3  结果
       3.1  大蓟提取液对4种癌细胞形态的影响对照组：K562（图1）大小均匀，胞体圆整，折光性好，日益密集；HepG2（图2）、Hela（图3）和BGC823（图4）紧贴板壁，胞间紧密接触，胞质透亮，可见分裂相，连续观察，细胞继续生长，集落不断扩大。观察组：加药后8h，K562多数大小不均，胞膜内陷或出泡；HepG2、Hela和BGC823部分胞体回缩，胞质内有颗粒物积累。加药后24h，K562（图5）大部分形态异常，或皱缩或内容物释放形成“鬼影”，板底可见碎渣样物质；HepG2（图6）、Hela（图7）和BGC823（图8）部分皱缩、变圆、脱壁，HepG2（图6）板底已可见碎渣样物质；加药后48h，K562多数崩解；HepG2大量浮起，碎渣量大；Hela 和BGC823更多的脱壁并出现碎渣。
       3.2  大蓟提取液对4种癌细胞生长的平均抑制率结果见表1。由表1可见，大蓟提取液对4种癌细胞的生长都有明显抑制作用，但它们的抑癌效果是不同的，如高剂量组中，K562的抑制率最高，可达89.12%，BGC823的抑制率最低，也在62.85%，四者间相互比较，K562>HepG2>Hela>BGC823。
       3.3  大蓟提取液对4种癌细胞生长的最高抑制率结果见表2。由表2可见，大蓟提取液对4种癌细胞的生长都有明显抑制作用，但它们出现的最高抑癌时间不尽相同，以高剂量组为例，K562和HepG2在72 h而Hela 和BGC823在96 h；它们的抑癌效果也不同， K562最高，为92.34%，BGC823最低为65.25%，4种细胞间相互比较，K562>HepG2>Hela> BGC823。表1  大蓟提取液对4种癌细胞生长的平均抑制率（略）表2  大蓟提取液对4种癌细胞生长的最高抑制率（略）
       4  讨论
          
       大蓟是一种常用、无毒中药，临床应用广泛，本实验显示其提取液对来源于血液、消化、生殖3个系统的4种癌细胞均有明显抑制作用，显示出良好的体外抑癌效果，提示值得进一步深入研究，为其临床抗癌应用提供参考。
       从形态观察到抑制率的比较均显示大蓟提取液对4种癌细胞的抑制效果为K562>HepG2>Hela>BGC823。中医认为，大蓟“归心、肝经。入血”［2］，为血分药，善治血病，故对白血病细胞抑制效果最好；归肝经，对肝癌细胞效果也很好；不入胃经，故对胃癌细胞效果最差；肾主生殖，胞宫司生殖，“肝肾同源”，故对宫颈癌细胞抑制效果强于胃癌。本实验这一结果与中医的气血理论、药物归经理论和肝肾同源理论相一致，再次说明了中医基本理论的博大精深，即便在体外细胞水平上也有良好体现，对实验室手段研究中医药同样有着重要指导意义。
       【参考文献】
         　　［1］张卓然. 细胞培养学与细胞培养技术［M］.上海：上海科学技术出版社，2004：424.
       
       ［2］田代华. 实用中药辞典［M］.北京：人民卫生出版社，2002：118.