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       【摘要】 
       目的建立儿童清肺糖浆的质量标准。方法采用TLC法对儿童清肺糖浆中麻黄、浙贝母、石菖蒲、黄芩、橘红进行了定性鉴别；采用HPLC法测定黄芩苷的含量，为儿童清肺糖浆的质量控制提供依据。结果定性鉴别方法专属性强。在0.130 4～0.978 0 μg范围内黄芩苷峰面积与进样量线性关系良好，r=1.000 0；样品平均加样回收率为99.65%（n=6），RSD为1.03%。结论所建立的方法准确可行，重复性好，可有效控制儿童清肺糖浆的质量。
       【关键词】  儿童清肺糖浆 质量标准 黄芩苷 高效液相色谱法
       Quality Standard of Ertongqingfei Syrups
       GONG Suxiao, ZHANG Tiejun*，XU Jun，TIAN Chengwang，XUE Yan
       Tianjin Institute of Pharmacologial Research,Tianjin 300193,China
       Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard for Ertongqingfei Syrups．MethodsThin layer chromatography(TLC) was used for qualitative identification of Herba Ephedrae, Bulbus Fritillariae Thunbergii，Rhizoma acori Tatarinowii and Radix Scutellariae．The baicalein was determined by HPLC．ResultsThe TLC identification was highly specific．The Baicalein area and content showed a good linear relationship in the range of 0.1304～0.9780 μg and correlation coefficient was 1.0000．The average recovery of the added sample was 99.65%(n=6)，RSD was 1.03%．ConclusionThe method is stable,accurate and precise for the quality control of Ertongqingfei Syrups.
       Key words:Ertongqingfei Syrups;  Quality standard;  Baicalin;   HPLC
       儿童清肺糖浆处方源于《中国药典》方，原剂型为蜜丸。本品由麻黄、浙贝母、石菖蒲、黄芩、橘红等22味药组成，具有清肺、解表、化痰、止嗽之功，主治小儿风寒外束、肺经痰热所致的面赤身热、咳嗽气促，痰多黏稠，咽痛声哑［1］等证。本实验采用薄层色谱法对制剂中的麻黄、浙贝母、石菖蒲、黄芩、橘红进行了鉴别，同时建立了主要有效成分黄芩苷（baicalein）的高效液相色谱方法。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器
       Dionex液相系统，Chromeleon色谱工作站。
       1.2  试药
        
       薄层色谱用硅胶G板（青岛海洋化工厂）；所有试剂均为分析纯。对照品和对照药材（均购自天津市药品检验所）。高效液相色谱用黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）；水为纯净水；甲醇为色谱纯；其它试剂为分析纯。儿童清肺糖浆（自制）。
       2  方法与结果
       2.1  鉴别
       2.1.1  麻黄的薄层色谱鉴别
       取儿童清肺糖浆100 ml，加水50ml稀释，转移至分液漏斗中，用浓氨试液调节pH值至10，用三氯甲烷振摇提取2次，50 ml/次，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣加甲醇1 ml溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取缺麻黄的阴性制剂同法制备阴性对照液。再取麻黄对照药材粉末1g，加浓氨试液数滴，再加三氯甲烷10 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml溶解，滤过，滤液作为对照药材溶液。又取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验［1］，吸取供试品溶液和阴性对照液各20 μl，对照药材溶液10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－浓氨试液（20∶5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。阴性对照无干扰。结果见图1。
       2.1.2  浙贝母的薄层色谱鉴别
       取麻黄薄层色谱鉴别项下供试品溶液作为供试品溶液。另取缺浙贝母的阴性制剂同法制备阴性对照液。又取浙贝母对照药材粉末5 g，加浓氨试液2 ml与乙醚20 ml，放置过夜，滤过，取滤液8 ml，蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml使溶解，作为对照药材溶液。再取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每毫升各含2 mg的混合对照品溶液。照薄层色谱法试验［1］，吸取上述供试品溶液和阴性对照液各20 μl，对照药材溶液和对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－浓氨试液（17∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。阴性对照无干扰。结果见图2。
       2.1.3  石菖蒲的薄层色谱鉴别
        
       取儿童清肺糖浆100 ml，加水50ml稀释，转移至分液漏斗中，用乙醚振摇提取2次，50 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺石菖蒲的阴性制剂同法制备阴性对照液。又取石菖蒲对照药材粉末1 g，加石油醚（60～90℃）10 ml，超声处理10 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验［1］，吸取上述供试品溶液和阴性对照液各10 μl，对照药材溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－醋酸乙酯（8∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，放置约1 h，以碘蒸气薰至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。阴性对照无干扰。结果见图3。
       2.1.4  黄芩的薄层色谱鉴别
       取儿童清肺糖浆30 ml，用水30 ml稀释，加于AB-8型大孔吸附树脂柱（25 ml，内径1.5 cm）上，用水100 ml洗脱，弃去水液，再用50%乙醇100 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺黄芩的阴性制剂同法制备阴性对照液。又取黄芩对照药材粉末1 g，加醋酸乙酯-甲醇（3∶1）的混合溶液30 ml，加热回流30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，取上清液作为对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含1    mg的对照品溶液。照薄层色谱法试验［1］，吸取上述供试品溶液、阴性对照液、对照药材溶液和对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－丁酮－甲酸－水（5∶3∶1∶1）为展开剂，预饱和10 min，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。阴性对照无干扰。结果见图4。
       2.1.5  橘红的薄层色谱鉴别
       取黄芩薄层色谱鉴别项下供试品溶液作为供试品溶液。另取缺橘红的阴性制剂同法制备阴性对照液。又取橘红对照药材粉末0.3 g，加甲醇10 ml，加热回流20 min，滤过，取滤液5 ml，浓缩至1 ml，作为对照药材溶液。再取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和对照品溶液。照薄层色谱法试验［1］，吸取上述供试品溶液、阴性对照液、对照药材溶液和对照品溶液各5 μl，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－水（100∶17∶13）为展开剂，展开约3 cm，取出，晾干，再以甲苯－醋酸乙酯－甲酸－水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，展至约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见图5。
       2.2  黄芩的含量测定
       2.2.1  对照品溶液的制备
       精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含60 μg的溶液，作为对照品溶液。
       2.2.2  供试品溶液的制备
       精密量取本品2 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
       2.2.3  阴性对照溶液的制备
       取按处方量及制法工艺要求制成的不含黄芩的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。
       2.2.4 色谱条件
       色谱柱为Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱；以甲醇－水－磷酸（44∶56∶0.2）为流动相；检测波长280 nm；流速1.0 ml/min；柱温30℃；进样量10 μl。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。
        按上述色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪测定，测定色谱图见图6～8。从色谱图可见，其它成分对黄芩苷的测定无干扰，符合测定要求。
       2.2.5   标准曲线制备
       分别精密吸取上述对照品溶液1.0，2.5，4.0，5.0，6.0，7.5 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。各进样20 μl，以色谱峰面积为纵坐标（Y），对照品进样量（μg）为横坐标（X），进行线性回归，得回归方程为Y=30.561 8X-0.708 7，r=1.000 0。结果表明：在0.130 4～0.978 0 μg范围内黄芩苷峰面积与进样量有良好的线性关系。
       2.2.6  精密度实验
       精密吸取上述供试品溶液10 μl，重复进样6次，测得黄芩苷峰面积RSD为0.27%，表明进样精密度良好。
       2.2.7  稳定性实验
       取供试品溶液在0，2，4，8，12，24 h分别进样10 μl，测得黄芩苷峰面积RSD为0.30%，表明样品溶液在24 h内稳定。
       2.2.8  重现性实验
       取同一批号样品（050801）按供试品项下的制备方法制备供试品溶液6份，测得黄芩苷峰面积并计算含量，RSD为0.84%，表明该方法的重现性良好。
       2.2.9   回收率实验
       采用加样回收法，精密量取同一批号样品（050801）6份，每份1 ml，分别按样品中黄芩苷含量的100%加入黄芩苷对照品溶液，按供试品项下的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算得回收率为99.65%，RSD为1.03%，结果见表1。表1  黄芩苷回收率结果（略）
       2.2.10  样品测定分别取3批样品，按供试品制备方法制成供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定（n=3），计算样品中黄芩苷的含量，结果见表2。表2  样品中黄芩苷的含量（略）
       3  讨论
       本品处方源于药典方，原剂型为大蜜丸，属儿童口服用药，口感差，且不利于儿童服用。改为糖浆剂型后，改善了口感，便于服用，成为更理想的儿童用药。
       本制剂处方由22味中药组成，成分复杂，鉴别易产生干扰。为了更好地控制成品的质量，笔者不同于2005年版《中国药典》，又增加了3种药材的鉴别。经3批样品试验证明，该薄层鉴别方法斑点分离清晰，重复性好，阴性对照无干扰，可作为该制剂的质量控制的方法。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005.