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       【摘要】 
       目的建立复方川脊片的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC）法对处方中的狗脊、续断、伸筋草等3种药材进行定性鉴别;采用HPLC法测定复方川脊片中芍药苷的含量。结果在TLC色谱中均能检出狗脊、续断、伸筋草，复方川脊片中芍药苷与其它组分良好分离，芍药苷浓度线性范围在0.204 8～1.024 μg，r=0.999 3，样品加样回收率为99.05%，RSD=1.13%（n=6）。结论所建立的方法简便可性，重复性好，可作为复方川脊片的质量控制方法。
       【关键词】  复方川脊片 芍药苷 薄层色谱 高效液相色谱法
       Study on the Quality Standard for FufangChuanji Tablets
       L Yi, GAO Shenrong, CHEN Huating
       1.Department of Pharmacology, Union Hospital Affiliated with Tongji Medical College ,Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China;
       2.Hubei Hospital of TCM, Wuhan 430061,China
       Abstract：ObjectiveTo establish a standard for the quality control of FufangChuanji Tablets.MethodsRhizome Cibotii, Radix Dipsaci and Herba Lycopodti were identified by TLC, and the content of  paeoniae was determined by HPLC. ResultsThere was a good linear relationship within a range of 0.2048～1.024μg for Paeoniflorin ,correlation coefficient r=0.9993,the average recovery was 99.05%（n=6）, RSD=1.13%, (n=6). ConclusionThis method is simple ,feasible and reproducible and can be used for quality control of FufangChuanji Tablets.
       Key words：FufangChuanji Tablets；  Paeoniflorin；  Content Determination；  HPLC
       复方川脊片是华中科技大学协和医院经多年研制的纯中药复方制剂，由白芍、续断、金毛狗脊、伸筋草等多味中药加工制成，具有舒筋通络、活血化瘀的功效，用于治疗颈椎病综合征，疗效显著。现收载于《湖北省医院制剂规范》2000版，原标准中无质量控制标准。为了更好地控制该制剂的质量，在已有文献的基础上［1，2］建立了薄层色谱法（TLC）对制剂中的续断、狗脊、伸筋草等进行定性鉴别，并采用高效液相色谱法［3，4］测定处方中白芍的活性成分芍药苷的含量，对控制复方川脊片质量有重要意义。
       1  仪器与试药
       岛津LC-10ATVP高效移相色谱仪， SPD-10AVP检测器，KQ-250B型超声波发生器。薄层层析硅胶板G型 (青岛海洋化工厂)。芍药苷、原儿茶醛、原儿茶酸、川续断皂苷VI对照品（中国药品生物制品鉴定所），伸筋草对照药材(中国药品生物制品鉴定所提供)，复方川脊片及阴性样品（华中科技大学协和医院制剂室提供，批号050720，050923，051122），异丙醇、甲醇、醋酸为色谱纯，水为重蒸馏水，其余均为分析纯。实验所用中药饮片均购自武汉国药集团中药饮片厂。
       2  方法与结果
       2.1  薄层色谱鉴别
       2.1.1  续断称取本品10 g,加甲醇30 ml,超声处理30 min，滤过,滤液蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品试液。另取缺续断之阴性对照品,同法制成阴性对照品溶液。取川续断皂苷VI对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品试液。照薄层色谱法［1］实验,吸取供试品溶液、阴性对照液和对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-醋酸-水 (4:1:5)的上层溶液为展开剂,展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色斑点，阴性对照品色谱中无相应斑点。见图1。
       2.1.2  狗脊取本品10 g,加甲醇40 ml，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺狗脊之阴性对照品,同法制成阴性对照品溶液。取原儿茶醛对照品、原儿茶酸对照品，加甲醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取供试品溶液和阴性对照液各6 μl， 对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲苯-甲酸（5∶6∶3∶1）为展开剂,展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色斑点，阴性对照品色谱中无相应斑点。见图2。
       2.1.3  伸筋草取本品粉末5 g,加乙醚30 ml，浸泡3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺伸筋草之阴性对照品,同法制成阴性对照品溶液。取伸筋草对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［1］实验,吸取供试品溶液、阴性对照液和对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（40：1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照品色谱中无相应斑点。见图3。
       2.2  含量测定
       2.2.1  色谱条件色谱柱为Symmetry C18(5 μm,3.9 mm×150 mm);流动相为异丙醇-甲醇-醋酸-水（1：23：1：75）；流速1.0 ml·min-1,检测波长为230 nm；柱温35℃，进样量10 μl；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。
       2.2.2  溶液的制备
       对照品溶液的制备：精密吸取芍药苷对照品（60℃减压干燥至衡重）约5.0 mg置100 ml量瓶中，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，即得。
       供试样品的制备：取复方川脊片20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取约1 g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞称定后，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液备用。
       阴性样品溶液制备：按复方川脊片处方制备不含白芍的片剂，同法制成阴性样品溶液备用。
       2.2.3  线性关系考察精密称取经60℃减压干燥至恒重的芍药苷对照品0.1 g，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2，4，6，8和10 ml，分别置5个100 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（相当于20，40，60，80，100 μg/mol）。 照高效液相色谱法［1］，精密量取10 μl注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，以进样的对照品溶液浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=1173.866 4 X+12.458 8，r=0.999 3，结果表明芍药苷进样量在0.204 8～1.024 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
       2.2.4  干扰实验按照上述色谱条件，吸取对照品溶液，供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl测定。在供试品色谱图中，与对照品色谱峰相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而阴性样品溶液在此保留时间无干扰。见图4～6。
       2.2.5  精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定对照品溶液峰面积，计算RSD=0.92%（n=5），提示精密度良好。
       2.2.6  样品溶液的稳定性实验取同一批样品，按上述方法配制供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12，16，24 h注入液相色谱仪中测定，其峰面积基本保持不变，RSD=1.32%，稳定性良好。
       2.2.7  重复性实验取同一样品6份，按含量测定方法分别制备供试品液，测得芍药苷峰面积值并计算含量，RSD=1.3 %（n=6）。表明本方法重复性良好。
       2.2.8  加样回收率实验取已知含量的复方川脊片（0.3 g/片，批号为200051122），除去包衣，研细，取约1.6～1.8 g， 精密称定6份，分别置烧瓶中，加入对照品溶液5～15 ml(50 μg/ml),挥尽溶液后，按供试品的制备方法处理并测定，计算回收率为99.05%，RSD=1.13%。结果见表1。表1  复方川脊片中芍药苷的回收率测定结果（略）
       2.2.9  含量测定取3个批号的样品（0.3 g/片），除去包衣，称取约1.0 g,每个批次取3份，按含量测定方法分别制备对照品溶液和供试品溶液,精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定。结果见表2。表2  样品测定结果（略）
       3  讨论
       用HPLC法测定芍药苷含量，文献中有多种流动相［3］，但用于本样品分离效果均不好，比较了多种比例的异丙醇-甲醇-醋酸-水，以异丙醇-甲醇-醋酸-水（1：23：1：75）为优，分离效果好，出峰时间短，柱效高。
       芍药苷可溶于乙醇、甲醇。根据本制剂特点，用甲醇溶解并超声处理30 min，其样品的测定效果良好，无杂质峰的干扰。超声时间比较实验［4］：取复方川脊片适量，按供试品溶液制备方法制备，曾比较超声时间，分别超声20，30，40 min，发现30 min即可将复方川脊片合剂中的芍药苷提取完全。
       方法学研究结果表明，采用TLC法对处方中的续断、狗脊、伸筋草等3种药材进行定性鉴别，采用HPLC法对处方中白芍的芍药苷进行含量测定，结果准确，重复性好，能够有效控制该产品的质量。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：68，附录VIB，VD.
       
       ［2］廉延国.中成药薄层色谱鉴别［M］. 北京：人民卫生出版社，1995:161.
       
       ［3］李东雪.杜采颖.贾海英，等.对《中国药典》2000年版I部白芍中芍药苷含量测定方法的探讨［J］.时珍国医国药,2005，16（4）：311.
       
       ［4］李瑞莲.雷玉萍.活络消痛胶囊质量标准的研究［J］.中国药师,2006.9（5）：439.