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       【关键词】  设计
        摘要：目的：为烫伤喷雾剂剂型改革研究优选提取工艺。方法：以小檗碱、总生物碱、干浸膏得率为指标，采用正交实验优选烫伤喷雾剂提取工艺条件。结果：确定其工艺条件为：A3 B3 C3 D2，即溶剂为8倍量95%乙醇，浸提时间为40 min/次，提取次数为3次。结论：该工艺提取的有效成分含量高。
        关键词：烫伤喷雾剂；正交设计；提取工艺
        Study on Extraction Technology of Scald Sprays by Orthogonal Design
        MA Xiaoli1，2, YAO Zihua1, HAO Lijing2
        (1.College of Chemistry and Environmental Science,Hebei University，Key Lab of The Analytical Science and Technology of Hebei Province, Baoding, 071002, China; 2.Hebei Medical College for Continuing Education,Baoding, 071000, China)
        Abstract:Objective:To optimize the extraction process of Scald Sprays.Methods:The orthogonal design was used to select the optimum extraction of Scald Sprays according to the amounts of berberine,alkaloid and extract.Results:The optimum extracting condition was A3B3C3D2,that was,to reflux the herb for 3 times and duration of extraction was 40 min for each time with 8 times amount of 95%alcohol.Conclusion:The optimized process is stable and highly efficient.
        Key words:Scald Sprays;Orthogonal Design;Extraction technology
        烫伤喷雾剂是一临床经验方，由黄连、黄柏、地榆、花椒等中药组成，用95%乙醇浸渍提取后喷涂于伤处，用于治疗烫伤、烧伤，具有很好的临床疗效。但临床浸渍提取时所用的药材、溶剂比比较大(原药材∶溶剂=46∶100)，有效成分浸出不完全，造成药材的浪费。另外，以酊剂喷涂时喷涂次数多，痛苦大，为了充分利用药材资源，对其进行剂改研究，以小檗碱、总生物碱、干浸膏得率为指标，采用正交实验优选了其醇提工艺条件。
           1材料与仪器
        药材：购自保定市中药材公司，经鉴定符合《中国药典》2000年版Ⅰ部标准；盐酸小檗碱对照品：购自中国药品生物制品检定所；仪器：CS930型薄层扫描仪(日本岛津)，SX721分光光度计(山东高密彩虹分析仪器有限公司)，乙醇为95%药用乙醇，其余试剂为分析纯试剂。
           2方法
        2.1小檗碱的含量测定［1］标准曲线的制备：取盐酸小檗碱对照品甲醇溶液(0.56 mg・ml-1)1，2，4，6，8，10，12 μl，分别点于同一薄层板上，用苯醋酸乙酯甲醇异丙醇氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，另槽加入同体积的浓氨试液饱和20 min，展开8 cm取出，晾干，按薄层色谱法进行荧光扫描，激发波长λ=366 nm。以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得回归方程。
        2.2总生物碱的含量测定［2］
        2.2.1对照液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品1.7 mg，用pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液定容至10 ml，得盐酸小檗碱对照液。
        2.2.2标准曲线的制备取2.2.1项下酸小檗碱对照液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置于具塞三角瓶中，加pH 7.0磷酸盐缓冲溶液稀释至2.0 ml，加0.007%溴麝香草酚蓝8.0 ml，摇匀，加入10.0 ml氯仿，密闭振摇2 min，移入分液漏斗中，静置分层。分取氯仿层，用干燥滤纸滤过，滤液以相应的试剂为空白，在420 nm处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
        2.3干浸膏得率的测定分别取提取液各20.0 ml置恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃烘至恒重，计算干浸膏得率。
           3正交实验及方差分析
        以小檗碱浸出量、总生物碱浸出量、浸膏得率为指标，考察乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间4个因素，以L9(34)正交表进行实验，因素水平见表1。
        表1因素水平水平（略）
        3.1回流提取液的制备将处方药材分别粉碎成12～20目粗粉，按处方比例称取药材57.5 g，按正交实验表设计工艺进行加热回流提取，提取液抽滤，密闭静置澄清，合并上清液，量定体积，得A1～9号提取液，密封保存。
        3.2浸渍提取液的制备按处方比例称取未粉碎加工的药材饮片和3.1项下粉碎好的药材粗粉各57.5 g，按临床制备方法分别置于具塞瓶中用95%的乙醇300 ml室温浸渍7 d，浸渍液过滤，定容至250 ml，得A1-11号提取液，密封保存。
        3.3供试液的制备取Al-11号提取液各4 ml水浴蒸至近干，拌硅藻土4 g，混匀，80℃烘干，用甲醇160 ml索氏回流提取4 h，回收甲醇，甲醇定容至25 ml，得Bl-11号供试液。
        3.4供试液中小檗碱的含量测定取B1-11号供试液10 μl，与2.1.1项下盐酸小檗碱对照溶液2 μl，分别点于同一块0.3%CMCNa硅胶G板上，按2.1.1项下条件展开，薄层扫描，小檗碱含量以盐酸小檗碱计算。结果见表2。
        3.5供试液总生物碱的含量测定取供试液Bl-11各0.1～0.2 ml，分别置具塞三角瓶中，水浴上蒸干，用pH 7.0磷酸盐缓冲溶液稀释至2 ml，加入0.007%溴麝香草酚蓝溶液8 ml，摇匀，加入氯仿10 ml，盖好瓶盖，充分振摇2 min，移入分液漏斗中，静置分层，分取氯仿层，用干燥滤纸滤过，滤液以相应的试剂为空白，在420 nm处测定吸收度。总生物碱含量以盐酸小檗碱计算，结果见表2。
        表2醇提工艺优选正交实验设计表及结果列号 (略)
        3.6工艺验证实验按照优化出的工艺条件，制备3批样品，分别测定各指标成分的含量。
           4结果与讨论
        4.1标准曲线盐酸小檗碱薄层扫描的回归方程为Y=3 302.516 94X＋3 919.756 92，r=0.998 17，点样量在0.65～6.72 μg范围内线性关系良好。总生物碱的回归方程为Y=9.600 84X＋0.022 5，r=0.999 85，盐酸小檗碱浓度在0.017～0.085 mg/ml范围内线性关系良好。
        4.2正交实验结果分析由表2中R值和表3～5方差分析结果可见：以得膏率为考察指标时，因素C对得膏率有显著影响，因素A的影响最小，最佳提取工艺为C3D2B3A1；以总生物碱浸出量为考察指标，各因素对总生物碱浸出量均无显著影响，但从极差分析因素C对得膏率的影响最大，因素B的影响最小，最佳提取工艺为C3D2A3B1；以小檗碱浸出量为考察指标，因素B的影响最大，因素D的影响最小，最佳提取工艺为B3A3C2D2。综合三项考察指标，确定烫伤喷雾剂的最佳浸提工艺为A3B3C3D2。冷浸法提取药材饮片(3.2项)的得膏率、总生物碱浸出量和小檗碱浸出量分别为0.05 g・g-1，0.275 g，0.0274 g；冷浸法提取药材粗粉的得膏率、总生物碱浸出量和小檗碱浸出量分别为0.06 g・g-1，0.765 g，0.082 2 g。可以看出，以药材粗粉为原料浸渍提得的总生物碱和小檗碱的量约为以饮片为原料时的3倍，而且比正交实验表中提取工艺低的多。
        表3浸膏得率方差分析方差来源（略） 
        表4总生物碱浸出量方差分析方差来源  （略）
        表5小檗碱浸出量方差分析方差来源（略） 
        4.3工艺验证实验由于所选方案A3B3C3D2是正交表中没有的方案，需做实验予以验证。取与上述正交实验同批次的药材粗粉57.5 g，共3份，按方案A3A3C3D2进行提取，其余操作同上，结果得膏率、总生物碱浸出量和小檗碱浸出量均比正交表中实验结果高，因此确定烫伤喷雾剂最佳提取工艺为A3B3C3D2，即用8倍量95%乙醇回流浸提3次，40 min/次。
           参考文献：
   
    ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］北京：化学工业出版社，2000：附录XD.
        ［2］张学兰，张兆旺，徐霞，等.黄柏SBE法与WE法的成分比较［J］.中国中药杂志，1999，24(10)：600602.
        (1.河北大学化学与环境科学学院，河北省分析科学技术重点实验室，河北 保定071002；
    2.河北职工医学院，河北 保定071000)