硫酸阿米卡星注射液含量的测定方法研究
作者：张幸生 何丽芳 石东方
《时珍国医国药》 2005年 第9期
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【关键词】 注射液
摘要：目的：建立硫酸阿米卡星注射液的含量测定方法。方法：采用旋光法和抗生素微生物检定法测定硫酸阿米卡星注射液含量。结果：硫酸阿米卡星注射液浓度在1～20 mg/ml范围内与其旋光度呈良好线性关系，回归方程：y=7.892 9x-0.035 6，r=0.999 9，平均回收率98.92 %，RSD为0.42%（n=5）。结论：与抗生素法相比旋光法更简便易行,结果准确，可作为该制剂的检验方法。
关键词：旋光法；抗生素微生物检定法；硫酸阿米卡星注射液；含量测定
Study on the Determination of Amikacin Sulfate Injection
ZHANG Xing sheng1, HE Li fang1, SHI Dong fang2
(1.Department of Applied Biologic Engineering ,Shenzhen Polytechnic College, Shenzhen 518055, China; 2.Medical School of Huangshi College of Science and Technology, Huangshi, Hubei 435000, China)
Abstract:Objective:To determine the content of Amikacin Sulfate Injection. Methods:Polarimetric analysis and Antibiotic microorganism was used for determine the content of Amikacin Sulfate Injection.Results:The linear range of Amikacin Sulfate Injection lay between 1～20 mg/ml. The regression equation: C=7.892 9a-0.035 6,r=0.999 9. The average recovery rate was 98.92% with an RSD of 0.42%.Conclusion:Compare with Antibiotic Microbial method, Polarimetry is easy to operate, with accurate and reliable results. It is therefore suitable for the quality control analysis of Amikacin Sulfate Injection.
Key words:Polarimetry;Antibiotic Microbial;Amikacin Sulfate Injection;Determination
硫酸阿米卡星是一种氨基糖苷类抗生素。它的主要成分为硫酸阿米卡星，其化学名为O 3 氨基 3 脱氧 a D 葡吡喃糖基 (1→6) O ［（6 氨基 6 脱氧 a D 葡吡喃糖基 (1→4)］ N (4 氨基 2 羟基 1 氧丁基) 2 脱氧 D 链霉胺硫酸盐。分子式C22H43N5O13・nH2SO4(n=1.8)。本品对多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、沙雷菌属等均具良好作用，对铜绿假单胞菌及部分其他假单胞菌、不动杆菌属、产碱杆菌属等亦有良好作用；对脑膜炎球菌、淋球菌、流感杆菌、耶尔森菌属、胎儿弯曲菌、结核杆菌及某些分枝杆菌属亦具较好抗菌作用，其抗菌活性较庆大霉素略低。本品最突出的优点是对许多肠道革兰阴性杆菌所产生的氨基糖苷类钝化酶稳定，不会为此类酶钝化而失去抗菌活性。
1仪器和试剂
HNQW5智能旋光仪（德国）,ZY 300IV型抑菌圈自动测量仪ZY-300IV；MP220数字酸度计；容量瓶；移液管；培养皿；不锈钢小管内径(6.0±0.1)mm,高(10.0±0.1)mm,外径(7.8±0.1)mm。短小芽孢杆菌［CMCC（B）63202］； 1号培养基（pH 7.8～8.0）；磷酸盐缓冲液（0.1 mol/L，pH 7.8）；硫酸阿米卡星标准品（中国药品生物制品检定，批号130335-200204,含量65.5%），硫酸阿米卡星注射液（市售，批号20011008,20020512,03030531）。
2实验方法与结果
2.1旋光法测定硫酸阿米卡星注射液含量［1］
2.1.1回归方程的建立精密称取硫酸阿米卡星标准品0.015 28，0.076 35,0.152 8,0.229 4,0.305 7 g分置10 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。根据其百分含量为65.5%计算浓度分别为1.000 84，5.000 93，10.008 4，15.025 7，20.023 4 mg/ml。用1 dm旋光管测定其在589.4 nm下的旋光度值，分别为0.131 3，0.638 1，1.272 6，1.908 2，2.541 4，得回归方程：y=7.892 9x-0.035 6，r=0.999 9。见表1，图1。
表1硫酸阿米卡星浓度与旋光度关系浓度C/mg・ml 1（略）
2.1.2加样回收实验精密量取已知含量的样品0.5 ml（1 ml相当于硫酸阿米卡星0.1 g），分别定量加入硫酸阿米卡星标准品0.076 19，0.076 26，0.076 31,0.076 52,0.076 38 g（约相当于硫酸阿米卡星0.05 g），置10 ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，依法测定旋光度值。结果5次测定平均回收率为98.92%，RSD=0.42%(n=5) 。见表2。
表2加样回收实验测定结果加样量m/mg(略)
2.1.3精密度与稳定性试验取浓度为10 mg/ml的硫酸阿米卡星溶液连续测定其旋光度值，求得RSD=0.018%（n=5）。见表3。
表3连续测定结果旋光度 （略）
表4稳定性实验测定结果时间t/h （略）
2.1.4含量的测定取硫酸阿米卡星注射液10支,混匀,精密量取5 ml置50 ml量瓶中（1 ml相当于硫酸阿米卡星0.1 g），加水稀释至刻度，测定其旋光度值，根据回归方程，求出相当于硫酸阿米卡星标示量的百分含量。结果见表5。
表5样品含量测定结果批号 （略）
2.2微生物法测定硫酸阿米卡星注射液含量［1，2］
2.2.1供试品溶液浓度的制备（1 ml：10万单位）取1 ml硫酸阿米卡星注射液，加磷酸盐缓冲液定容到100 ml，然后在100 ml容量瓶中取1 ml定容到25 ml，在从中取5 ml分别定容到50 ml（最终浓度4 u）和100 ml（最终浓度2 u）（高、低浓度的剂距为2∶1）。
2.2.2对照品溶液浓度的制备（1 mg：655单位）取硫酸阿米卡星标准品0.038 26 g，加磷酸盐缓冲液定容到25 ml，然后取1 ml定容到25 ml的容量瓶中，在从中取5 ml分别定容到50 ml（最终浓度4 u）和100 ml（最终浓度2 u）（高、低浓度的剂距为2∶1）。
2.2.3测定方法取直径约为90 mm，高16～17 mm的平底双碟8个，分别注入加热融化的培养基20 ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层，另取100 ml培养基放冷至60℃，加入短小芽孢杆菌［CMCC（B）63202］4.5 ml，摇匀，然后在每1双碟中分别加入5 ml规定的实验菌悬液，摇匀，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置水平台上冷却后，在每一双碟中以等距均匀安置不锈钢小管（内径6.0 mm±0.1 mm,高10.0 mm±0.1 mm,外径7.8 mm±0.1 mm）4个，然后在每一双碟中对角的2个不锈钢小管中用10 μl的抽样器分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液，其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液，用陶瓦圆盖覆盖，在37℃培养16 h后，测量各个抑菌圈的直径，然后把数据输入电脑，进行可靠性计算和效价计算。结果见表6。
表6各批样品含量测定结果批号（略）
2.3旋光法和微生物法含量测定结果的比较见表7。
表7旋光法和微生物法含量测定结果%批号 （略）
由表7可知，旋光法比微生物法测定结果相差很小，相对误差为0.73%。
3结果与讨论
3.1硫酸阿米卡星注射液浓度在1～20 mg/ml范围内与其旋光度呈良好线性关系，回归方程：y=7.892 9x-0.035 6，r=0.999 9，平均回收率98.92%，RSD为0.42%（n=5）。
3.2稳定性实验结果表明，24 h内旋光度及浓度基本无变化，RSD=0.082%（n=5）。
3.3微生物法具有经济、灵敏度高、相关性好等特点，能直接显示抗生素的效价。但该法实验过程长，操作烦琐，测定结果影响因素较多，其中主要包括培养基的质量、培养基成分的pH值、实验菌株的敏感性、琼脂平板中的实验菌株数、培养温度及时间等，必须从各个环节加以控制，才能保证实验结果准确可靠。而用旋光法测定硫酸阿米卡星注射液含量相对于用微生物法，操作简便、准确、快捷、重现性好，对产品能快速分析，可作快速检验使用。
参考文献：
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：附录43 43.
［2］贺微,高哗.正交法探讨生素微生物检定法的影响因素［J］.实用医药杂志,2004,21（4）：354 355.
(1.深圳职业技术学院，广东 深圳518055；2.黄石理工学院医学院，湖北 黄石435000)