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       【摘要】 
       目的观察益智仁盐炙后对豚鼠膀胱逼尿肌收缩活动的影响并探讨其作用机理。方法将膀胱逼尿肌肌条置于灌流肌槽内，采用分别加兴奋剂和累计加药物的方法, 观察肌条的收缩活动。结果益智仁和盐益智仁剂量依赖性对乙酰胆碱引起的膀胱逼尿肌兴奋具有显著的拮抗作用，可降低肌条收缩的平均张力，且盐炙品效果优于生品。结论益智仁和盐益智仁作用膀胱的靶点可能是膀胱逼尿肌的M受体，具有类似M受体阻断剂的作用，盐炙后作用更强。
       【关键词】  益智仁； 盐炙； 膀胱逼尿肌； 收缩活动
       Study of the Stir-heated Alpiniae oxyphyllae Fructus on Contractile Activity of Isolated Bladder Detrusor Muscle of Guinea Pigs
       HUANG Qinwan, HU Changjiang, LI Xinghua, LI Wenbing, YU Lingying, XIE Xiuqiong, YANG Jing
       1.Chengdu University of Traditional Chinese Medcine，Chengdu, Sichuan 611137,China； 2.The Fifth Hospital of Sichuan Province，Chengdu,Sichuan 610031,China
       Abstract:ObjectiveTo study the effect of the crude Alpiniae oxyphyllae Fructus（CAOF）and the stir-heated Alpiniae oxyphyllae Fructus（SAOF）on contractile activity of isolated bladder detrusor muscle strips of guinea pigs and it"s possible mechanism. Methods Bladder detrusor strips were suspended in tissue chambers,the CAOF and the SAOF and stimulant drug of varied concentration were added accumulatively in them. Observed the contractile activity of bladder muscle strips. ResultsBoth of the CAOF and the SAOF stimulated the bladder detrusor strips via acetylcholine antagonism with an increasing dosage,which could increase the resting tension, and SAOF showed a stronger effect.ConclusionThe CAOF and the SAOF influence on the M-receptor of bladder smooth muscle as M-receptor inhibitor thus decreasing the construction of bladder smooth muscle.
       Key words:Alpiniae oxyphyllae Fructus;  Stir-heated with salt solution;  Bladder detrusor muscle strips;  Contractile activity
        益智为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实，药用部位为种仁。临床上常用有生品和盐炙品，生品辛温而燥，主要归脾经，以温脾止泻、收摄涎唾力胜，多用于腹痛吐泻、口涎自流等症；盐炙后可缓和辛燥之性，主要归肾经，专行下焦，长于固精、缩尿，用于肾气虚寒的遗精、早泄、尿频、遗尿、白浊等症，如清·张仲岩《修事指南》指出：“益智仁盐炒，止小便频数”。益智仁盐炙后增强“缩尿”作用，可能与影响膀胱逼尿肌的活动有关。本文观察了益智仁生品和盐炙品对豚鼠离体膀胱逼尿肌活动的影响，报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  动物豚鼠，英国种，一级，体质量250～300 g，雌雄不拘，由四川省动物专委会饲养场提供。质量合格证：川实动管质第99-12号。
       1.2  药材益智，产地海南省琼中市，购于海南省中药材公司，经本校中药标本中心卢先明教授鉴定，为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。
       1.3  仪器与试药AS-HJ-Ⅱ型恒温平滑肌槽（成都遨生电子有限公司）；JH-2型肌张力传感器（北京航天医学工程研究所）；BL-420E生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）。氯化乙酰胆碱（化学纯，上海三爱思试剂有限公司，批号：20061130），BaCl2（分析纯，成都化学试剂厂，批号：721231），磷酸组胺（生化试剂，上海伯奥生物科技有限公司，批号：070107）。
       2  方法
       2.1  预处理将益智药材去壳制成益智仁饮片，并将净益智仁盐灸后制成盐益智仁饮片。分别粉碎，过2号筛，用75%乙醇回流提取两次，减压回收乙醇，制备成1 g生药/ml的药液，备用。Krebs液配制：称取NaCl 6.92 g，KCl 0.35 g，KH2PO4 0.16 g，MgSO4·7H2O 0.29 g，NaHCO3 2.10 g，CaCl2 0.28 g和无水葡萄糖2.00 g，加水溶解定容至1 000 ml。
       2.2  离体实验猛击豚鼠头部致昏，快速取出膀胱，用Krebs液漂洗干净，置于盛有低温krebs液的培养皿中。从三角区下横切，将膀胱主体部分沿一侧面纵向切开，沿肌纤维走向切取两条纵行肌条（8 mm×3 mm）。将肌条安置在盛有50 ml的（37±0.5）℃ Krebs液的平滑肌槽中，持续通以氧气。肌条的一端固定在肌槽底部的不锈钢弯钩上，另一端与肌张力传感器连接，后者接生物机能实验系统记录肌条收缩时的平均张力（g）和频率（次/min）［1～2］。肌条负荷1 g张力，温育30 min，待肌条自发活动平稳后，记录2 min正常收缩曲线，分别给予生品和盐炙品药液50，50，100，100，100，100，100 μl，每个剂量记录2 min曲线；用krebs液冲洗膀胱3次，待豚鼠肌条自发活动平稳后，记录2 min正常收缩曲线，然后加入终浓度为1.0×10-5的Ach溶液，记录2 min曲线，分别累积给予上述7个体积的生品和盐炙品药液。操作同前，依序再完成拮抗BaCl2（终末浓度4.1×10-4mol/L）和磷酸组胺（终末浓度1.0×10-5mol/L）引起膀胱逼尿肌兴奋的实验。
       3  结果
       3.1  益智仁和盐益智仁对正常豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响 随着剂量的增大，益智仁生品和盐炙品对正常豚鼠膀胱逼尿肌具有抑制作用趋势，可降低其收缩平均张力和频率，但与正常膀胱组比较无统计学意义（P>0.05）。结果见表1。表1  益智仁和盐益智仁对正常豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响（略）
       3.2  益智仁和盐益智仁对乙酰胆碱兴奋豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响 随着剂量的增大，益智仁生品和盐炙品可拮抗因乙酰胆碱兴奋豚鼠膀胱逼尿肌M受体而引起的收缩反应，其中生品0.010，0.012 g生药/ml及盐炙品0.004，0.006，0.008，0.010，0.012 g生药/ml时，与乙酰胆碱兴奋膀胱组比较，可显著降低其收缩平均张力（P<0.01，P<0.05）。结果见表2。表2  益智仁和盐益智仁对乙酰胆碱兴奋豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响（略）
        生品组与其对应的正常膀胱比较，*P<0.05；炙品组与其对应的正常膀胱比较，△P<0.05，△△P<0.013.3  益智仁和盐益智仁对BaCl2兴奋豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响随着剂量的增大，益智仁生品和盐炙品均不能拮抗因BaCl2而引起的豚鼠膀胱逼尿肌兴奋效应，与BaCl2兴奋膀胱组比较，无统计学意义（P>0.05）。结果见表3。表3  益智仁和盐益智仁对BaCl2兴奋豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响（略）
       
       3.4  益智仁和盐益智仁对磷酸组胺兴奋豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响
       随着剂量的增大，益智仁生品和盐炙品对磷酸组胺兴奋豚鼠膀胱逼尿肌有一定的拮抗作用，与磷酸组胺兴奋膀胱组比较，生品各剂量组无统计学意义（P>0.05），而盐炙品0.010 g，0.012 g生药/ml时，可显著降低其收缩平均张力（P<0.05）。结果见表4。表4  益智仁和盐益智仁对磷酸组胺兴奋豚鼠膀胱逼尿肌活动的影响
       4  讨论
        益智仁和盐益智仁对正常动物离体膀胱具有一定的抑制作用，而对乙酰胆碱引起的膀胱逼尿肌兴奋具有显著的拮抗作用，可显著降低收缩的平均张力，且盐炙品效果优于生品；对因BaCl2引起的膀胱逼尿肌兴奋几乎无拮抗作用，对磷酸组胺引起的膀胱逼尿肌兴奋亦具有一定的拮抗作用。初步认为益智仁和盐益智仁作用膀胱的靶点主要是膀胱逼尿肌的M受体，益智仁具有类似M受体阻断剂的作用，盐炙后作用更强。
       【参考文献】
         　［1］张英福,邱小青.乌梅对豚鼠膀胱逼尿肌运动影响的实验研究［J］.山西中医,2000,16 (2):43.
       
       ［2］曾俊伟,余 梅,骆亚莉,等.大黄对豚鼠离体膀胱逼尿肌条收缩活动影响的实验研究［J］.中药药理与临床,2005,21(1):27.